Введение к работе
. Актуальность тепы. Одним из наиболее интенсивно исследуемых объектов язляется
бактериородопсин (Бр), светозависимая протонная помпа гглобальных
бактерий tfaiotoacterium salinariua. Ответственная За СЗОеобрЭЗКЬИ
тил фотосинтеза, наблюдаемого у этих бактерии.
< В настоящее время основной задачей изучения функционирования Бр является детализация процесса перекоса протона. Прогресс з области исследовании молекулярных механизмов работы Бр обусловлен в первую очередь применением саат-специїического метагенеза для s выяснения роли отдельных аминокислот. Кроме того, интенсивные исследования ведутся в ряде лаборатории, имеющие целья уточнение и детализацию фотоцикла для более адекватного сопоставления его отдельных стадий со стадиями перекоса протона и кснфсрмэциоккых превращении белка.
До настоящего времени, причина гетерогенности образования К. ключевой стадией фотоцпкдз, остается непонятной. Кинетические схемы, предлагаемые различными исследователями с целья объяснить эту гетерогенность, находятся в противоречии друг другу (Varo and
Lanyi, 1991а; Butt et al., 19S9; Ames a.-.d Mathies, 1990; Oilier and Stockburger, 1983).
' Цель и задачи исследования. Целью исследования являлось изучение причин гетерогенности образования интермедиата М. в связи с чем были поставлены следуюзне задачи.
I. Детально разобраться в кинетической схеме Оотоциклэ. ключевой стадией которого является образование интермедиата М. 2. Уточнишь значения временных констант образования
интермеднзта М.
-
Исследовать процесс выброса протона и его корреляцию с образованием кнтермедоата М.
-
Уточнить кинетические параметры процесса переключения основания Шпффа от выходного ко входному протонному пути.
-
Изучить влияние различных нутаций на стадию образования интермедиата М.
Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые было показано, что нейтральная Форма Бр состоит из двух спектрально неразличимых форм, способных образовывать интермедиа? М с различными рк и . константами скорости. Была выявлена фаза образования М. соответствующая конформационному превращению белка и необратимому М-'>М' переходу, способствующему переключению основания Іиіффа от цепи выброса к цепи поглощения протона, кинетические параметры которой пока еще никто четко из указывал. Было показано, что появление протона в среде без буфера сопутствует этому превращению. Полученные данные способствуют более адекватному представлении о процессе депротонирования основания !11и$фз к выявляют существенную роль конфсрмационных превращения белка при перекосе протока.
Апробация работы. Апробация проходила на совместном заседании кафедры биохимии Биологического факультета МГУ, лаборатория биоэнергетики и новых физических методов НИИ Физкко-ХимическоН Биологии км. А.Н.Белозерского 14 октября 1993 г. Основные результаты работы докладывались на 5-й Международной конференции по ретинальсодержазим белкам (Франция, 1992) и на 7-й Европейской конференции по биоэнергетике (Финляндия, 1992).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 ргбот.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемо;} литературы. Работа изложена на 120 страницах масннсписного текста, зклщая 33 рисунка. Список цитируемой литературы включает 93 ссылок.