Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Явление стресса известно уиэ более 50 лет, но проблема защиты организма от повреждающих последствий стресса до сих пор остаётся нерешённой. Под влиянием сильных стрессовых воздействий развиваются патологические изменения во многих органах, системах органов н- тканях организма. Причиной этих изменений является чрезмерная активация стресс-реализующих систем организма (Ыеерсон Ф. 3. , Пшенникова У. Г. 1988). Результатом неблагоприятных последствий стресса являются такие тямёлые заболевания, как ишемическая болезнь сердца, язвенная болезнь желудка, вторичные иммунодефицитные состояния, возрастает риск онкологических заболеваний.
Поэтому, остро стоит проблема поиска веществ, ограничивающих действие стресс-реализующих систем и предупреждающих, таким образом, развитие неблагоприятных последствий стресса. Такие вещества называются адаптогенами.
Применяемые в настоящее время методы оценки адаптогенного действие веществ, не позволяют провести быструю и одновременно адекватную оценку -их активности. Поэтому, необходимы новые экспресс-методы скрининга адаптогенов, позволяющие быстро и эффективно проводить их отбор из широкого спектра биологически активных веществ С БАБ).
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ Основной целью данной, работы являлась разработка экпресс-метода скрининга адаптогенов.'
Для разработки метода скрининга адаптогенов необходимо выбрать тест-объект,адекватно отражающий развитие стресса и влияние
- 2 -на него адаптогенов, найти параметры, быстро и обязательно меняю, щиеся при изменениях физиологического состояния этого тест-объекта и метод,с-помощью которого удобно регистрировать эти изменения.
В качестве тест-объекта были выбраны клетки тимуса. В тимусе, являющимся центральным органом иммунитета, наиболее рано и ярко проявляются морфологические изменения при стрессе (Селье 1936). Поэтому, функциональные изменения состояния тимоцитов, предшествующие морфологическим, должны проявляться в ещё более ранние сроки развития стрессовой реакции, и могут служить удобным параметром для её экспресс оценки.
Параметрами, которые одними из первых меняются при изменении функционального состояния клеток, являются трансмембранные потенциалы на плазматической мембране клеток и мембранах их митохондрий (Miles P. R. 1981,Гуковская А. С. 1984).
Для исследования трансмембранных потенциалов нами был выбран удобный, широко применяемый для этих целей, метод флуоресцентных бондов (Владимиров Ю. А., Добрецов Г.Е. 1980, Косников ЕЕ 1990).
Таким образом, на основании всего вышесказанного для достижения цели нашей работы были поставлены следующие задачи:
исследовать с помощью потенциалчувствительных зондов изменения трансмембранных потенциалов на плазматических мембранах тимоцитов и их митохондрий в первые два часа развития стрессовой реакции,
исследовать зависимость этих изменений от силы стрессового воздействия,
оценить влияние адаптогенов на эти параметры.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Флуоресцентный зонд 4 - (п - димети-ламиностирил) -1- метилпиридиний толуолсульфонат (ДСМ) был. впер^
- з -вые применён для исследования развивающихся in vivo изменений трансмембранного потенциала митохондрий тимоцитов.
В работе впервые было обнаружено изменение функционального состояния тимоцитов, развивающееся в первые 60 минут стрессовой реакции и выражающееся снижением трансмембранного потенциала митохондрий тимоцитов (
В результате проведённого исследования был разработан новый экспресс-метод скрининга адаптогенов.
С помощью разработанного метода впервые обнаружена адапто-генная активность иммуномодулятора кукумариозида.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Разработан новый экспресс-метод скрининга адаптогенов, с помощью которого можно проводить быстрый первичный отбор веществ, обладающих адаптогенной активностью.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на семинаре Научно исследовательской лаборатории биологически активных веществ гидробионтов (НИЛ БАВГ) МЗ РФ (1992), на конференциях молодых учёных НИЛ БАВГ МЗ СССР (1986, 1988), на і конференции Международного общества патофизиологов (Москва, 1991), на Всесоюзном совещании "Биологически активные вещества гидробионтов - новые лекарственные, лечебно-профилактические и технические препараты" (Владивосток, 1991).
ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.
СТРУКТУРА И ОБЪЁМ РАБОТЫ. Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы (3 раздела), материалы и методы, результаты и обсуждение, заключение, выводы, список литературы. Список литературы включает 157 ссылок (112 работ на русском и 45 на английском языках). Текст диссертации набран на компьютере и распечатан на принтере на 122 страницах. Диссертация иллюстрирована 1 таблицей и 23 рисунками.