Введение к работе
Лістуальность проблемы. Исследование транспортные систем, с помощью которых потенциалобразувщке ионы преодолевавт нембранные барьеры клетки, обеспечивая ее ионный гомеостаз, является актуальной проблемой совреиєїшой физико-химической биологии. С точки зрения жизнеобеспечения клетки важное значение икет транспорт ионов Са - универсальны* регуляторов внутриклеточное процессов. 3 основе регуляторного действия леяит сбалансированное изменение концентрации катиона в клетке, .являющееся рззультатом функциони-рованкя слокной сети шчбрэшмх Са. ' -транспортнрувзщх систем. Одна из таких систем - Са -АТФаза плазматических иекбран, найдена практически во всех клетка; зукаркот. Используя энергии гидролиза АТФ," этот фермент осуществляет трансмембранній» перенос ионов Са протг-пз более чек тксячекратного. градиента их концентрація. Работа Са -насоса находится под контролем больпего числа природных регуляторов: кальиодулина, кислых фосфолюзосв, цАНФ-зависиыой протеинккназц, протекнкиназы с, калытаина и других.
К настояшеиу времени накоплена значительная информация о строении к функции Са -АТФазы плазматические мембран: определена полная аминокислотная последовательность белковой цепи, локализованы основные функциональнее к рагуляторные области фермента. Дальнейшее развитие представтешій о принципах функционирования и регуляции Са -насоса на клекулярном уровне не возможно без детального анализа пространственной организации шеркента. Однако трудности технического характера в настоящее гремя не позволяют- исследоьать трехмернув структуру молекулы АТФазц путей рентгекоструктурного анализа. Применение таких
традиционных методов как гидрофобное мечение и ограниченный протеолиз в составе нативного липопротеинового комплекса затруднено из-за незначительного содержания белка в мембране. В связи с этим представляется перспективным иммунохимический подход к изучению топографии Са -АТФазы в мембране, в частности, использование матоклональных антител, являюцихся селективными . зондами на конкретные участки фермента. С помощью ионоклоналышх антител - также мозэт быть получена информация о локализации функциональных дсазнов белка и его полиморфизме.
Цель работа. Настоящая работа является частая проводимых в
Институте биоорганической хиіми струэтурно-функцкональкьк
исслздований Са -АТФазы эритроцитов человека. Цель работы
заключалась в создании представительной коллекции монэклоналъных
р. антител к Са -АТФазе и исследовании с их понощьа
структурно-функциоїзальніа: свойств фермента, з первуа очередь его
пространственной организации в плазматической иєіібране.
Научная новизна и фактическая ценность работы, ГЬлучена коллекция
гибридом, продуцкруюцих моноклоналыше антитела к Са -АТФазз
эритроцитов человека. Проведена характеристика этих антител:
определены константы аффинности, класс и подкласс полученных
антител. Определена ориентация эпитопов - мииеней антител,
относительно плазіатической мембраны.
Разработан подход к локализации антигенных детерминант белка, стимулировавших образование моноклональных антител. С помощьв этого подхода вперзые идентифицирован экстрацеллвлярный фрагмент 130-142 полипептидной цепи, что позволило предлоапъ
экспериментально оооснованнуг модель трансмембранной организации Н-концевой области молекулы Са-АТФазы. В созданной коллекции выявлены коноклональные антитела к. по-крайней мере, двум различным изофоршм Са -АТФазы. Это может стать основой метода разделения изотерм фермента с целью изучения их функциональных особенностей, а такте распределения изо&зрн в различных органах и тканях илекопитавцих.
Объем работы.. Диссертация содергхгг страниц машнописного
текста и состоит из введения, обзора лзггерзтуры, обсуждения
результатов, экспериментальной части, вызодов и списка цитируемой
литературы ( ссылок).
