Введение к работе
Актуальность проблемы. Биосинтез белка на рибосомах является ключевым этапом процесса реализации генетической информации в клетке. Детальное понимание механизма трансляции невозможно без изучения взаимодействий рибосомы с мРНК, тРНК и факторами трансляции на различных этапах биосинтеза белка. Существенным аспектом этой проблемы является знание пространственного расположения махромолекулярных лигандов относительно компонентов рибосомы в процессе инициации, элонгации, термингыии. Однако, несмотря на большое количество данных, накопленных х настоящему времени, как реальная структура самой рибосомы, так и топография лкганяов остается невыясненной. Особенно много разногласий существует по поводу расположения матричной РНК на рибосоме, и из всех предложенных моделей ни одну нельз? считать доказанной. Ис-пользогание метода фотоаффинной модификации позволяет приблизится к решению проблемы топографии матричной РНК на рибосоме.
Цель работы. Изучение расположения матричной РНК на рибосоме в различных инициаторнш комплексах, а также в злонгирующей рибосоме методом фотоаффинной модификации.
Научная новизна и практическая значимость. В настоящей работе для изучения топографии матричной РНК были использованы короткие аналоги мРНК, сконструированные на основе сго-мРНК фага А, в которых остатка урядина статистически замещали на его фотоаффинный аналог - 4-тяоуридии, расположенный как в иницийторной области, так и в заданных положениях от +4 до +16 нухлес-тидного остатка З'-кояцевой части мРНК. В отличие от большинства выполненных ранее работ, исследование расположения мРНК проводилось яе только в инициаториых бинарных и тройных- комплексах, но л в комплексах с двумя тРНК, а также после трзвелохапии.
Модификация рибосом фотоаффинными производными мРНК позволила идентифицировать специфические участки 16S РНК, а также рабосомкые белки, которые непосредственно сближены с мРНК на различных этапах трансляции.
Полученные результаты пеззолили не только детально охарактеризовать мРНК-связывакшгай центр рибосомы, но и послужили основанием для пересмотра существовавших ранее представлений о простравсгвелной организации малой субчастицы рибосом.
Апробация работы. Материалы диссертации докладывалась на Межлуна-родной конференции "Биосинтез белка", Пушино, 1?91 г, Международной конференции * Современная этимология: проблемы и направления", Москва, 1992 г.
Международной конференции "Трансляционный контроль", Колд Спринг Харбор, США, 1992 г., .Международной конференции Трансляционный аппарат", Берлин, Германия, 1992 г.
Структурі и объем работы. Диссертационная работа изложена на стра
ницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор
литературы (посвящен применению метода сайт-специфического мутагенеза для
исследования структуры и функции 16S РНК), результаты, обсуждение результа
тов, материалы и методы, выводы. Материал иллюстрирован ' рисунками и
таблицами. Библиографический указатель включает датированных работ.
