Введение к работе
Актуальность проблемы, Предлагаемая работа посвящена проблемам выделения и исследования структурных особенностей ціітохрома с и его гемсодержащих фрагментов. Дмтохрим с является электронпереносятим белком, участвующим п процессе клеточного дыхания как лукяриотическнх, так и ирокариотических клеток. В состав цнтохрома входит полинептид...чи пель, включающая от 103 до 135 аминокислотных остатком, и заві.симосіи от источника белка, и ковалентно свяпапггый гем с.
На протяжении многих лет цитохроч с привлекает пристальное внимание биохимиков, . биофизиков, снепналипов и области неорганической, координационной и физической химии, а также физиологов и медиков Интерес исследователей к г.гому белку обусловлен двумя основными причинами Вопериых, это функциональная значимость цнтохрома с в организме человека. Цнтохром с используется как лекарственный препарат для улучшения клеточного дыхания, при асфикции новорожденных, астме, ииіемичсскоіі болезни сердца, сердечной недостаточности, хронической пневмонии, инфекционном гепатите и других заболеваниях, связанных с нарушением окислительных процессов в организме. Кроме того. известно положительное действие препарата, в состав которою входит нитохром с, при лечении катаракты и старческой деградации сетчатки глаза. В медипчне перспективным' язляегсч также применение. гсмсодержащих «{фрагментов цитохрома с, со сравнительно небольшой последовательностью аминокислотных остатков. Дальнейшее нспользопдпиг- питохрома с и его фрагментов с качестве лекарственных пренгршо!» требует глубоких иследозапиіі механизма их функционирования, структурных особенностей,
метаболизма в клетке и разработки аффективных и технологичных методов получения и очистки.
Во-вторых, в силу своего небольшого размера, легко детектируемой активности и характерных спектров поглощения, цитохром а широко используется как модельный белок ДЛЯ отработки многообразных методов белковой химии, Цитохром с. часто применяется для изучения механизмов, лежащих в основе межбелкового взаимодействия.
Настоящая работа является частью і лаповых исследований, проводимых на кафедре Химии и технологии гонких органических соединений Московской Государственной Академии Тонкой Химической Технологии им. М.В.Ломоносова по теме: "Синтез молекулярных систем иа основе порфиринов и их димеров, содержащих донорно-акцеаторные заместители, с целью моделирования важнейших природных биологических і процессов и создания на их осноце соединении дл:г мецицины, науки и техники .
Цель работы заключалась в выделении и структурном исследовании цитохрома дрожжей Candida vallda н его триптического гемпептида.
Научная новизна В ходе работы была изучена способноспг цитохрома осаждаться под дейстсием тетраиодида кадмия и комплекса железа с иодид-ионом и свободным иодом. Исследовапъ* факторы, определяющие агрегирование белка под действием этих комплексных соединений. Предложен метод очистки цитохрома , включающий стадию осаждения белка комплексом железа. Разработан метод получения гемпептида цитохрома трипсиноьым гидроли.юм. непосредственно из цитохрома, осажденного йодным комплексом железа. Исследован состаз получаемого гидролизата," образующегося э гетерогенных условиях. Изучен трипсинолиз
цитохрома с из осадка. Установлена структура и предложена аминокислотная последовательность гемсодержзщего пептида цитохрома с дрож'кей Candida valida. На основания данных fsacc-спектрометрии сделан яывод о сходстве исследуемого цнтохрема г дрохокей Candida valida. с известным цнтохромс » с Candida krusei.
Прпггтгчессая "ешгость Разработаны две схемы выделения цнтохрема с лроікмсей, основанные на осаждении белка солями кадмия и железа, использование которых поззоляет уменьшить вречя и трудоемкость процесса поту-іения цитохрома з чистом виде. Пре,-тоженнык споссб выделения гемнепгида цитохрома дает возможность получать данное соединение непосредственно из дрожжевой биомассы, минуя стадию очистки цитохрома с_, и сократить с :ему очистки самого гемсодержащего фрагмента при сохранении хорошего пыхода целевого продукта.
Иа защиту выносятся следующие по;. ,жения:
разработка методов выделения и г чистки цитохрома с из дрожжей на примере штамма Candida valida;
разработка метода выделения гемпептида цитохрома с:
определение структуры Гемпептида из Candida valida;
изучение закономері остей, осаждения цитохрома под действием комплексных соединений кадмчя и железа с иодид-ионом и иодом;
исследование трипсинолиза цитохромг в гетерогенных условиях;
Публикации По материалам диссертации опубликована одна лечатшія работа и получено 2 авторских свидетельства. Вторая статья принята к печати.
Апробация Работа обсуждена в завершенном виде на расширенном заседании кафедры Химии и т;хнологии тонких органических соединений 30 июня 1993 года.
