Введение к работе
Актуальность проблемы. Протимозин а - это небольшой (12 кДа) высококонсервативный белок, имеющий необычную структуру неупорядоченного клубка и, по-видимому, играющий важную роль в процессах клеточной жизнедеятельности. Протимозин а является ядерным белком. Многочисленные данные свидетельствуют об участии этого белка в пролиферации клеток. Так, клетки с нарушенным синтезом протимозгага а приостанавливают свое деление до тех пор, пока его продукция не восстанавливается. В то же время, транскрипция гена протимозина а, а также синтез самого белка наиболее интенсивны в активно делящихся клетках.
Несмотря на пристальный интерес к протимозину а, на сегодняшний день не существует достоверных данных относительно его функции и механизма действия. Во многом это связано со сложностью экспериментальной работы с клетками млекопитающих, являющихся до настоящего времени единственной биологической системой, в которой изучался протимозин а.
Цель работы. Целью настоящей работы являлось изучение свойств протимозина а человека при его синтезе в простой и удобной модельной эукариотической системе: в клетках дрожжей Saccharomyccs cerevisiae.
Научная новизна и практическая ценность работы. В диссертационной работе показано, что протимозин а человека, продуцируемый в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae, подавляет их деление. Он делает это, вмешиваясь в процессы, происходящие в клеточном ядре. Экспериментально продемонстрировано, что 9 С-концевых аминокислотных остатков этого белка содержат сигнал ядерной локализации. Удаление этого участка белка приводит к неспособности протимозина а человека транспортироваться в ядро и подавлять деление дрожжевых клеток.
В работе также исследовано влияние, которое этот белок оказывает на транскрипцию в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Полученные при этом результаты позволяют сделать следующие выводы:
1) Протимозин а в свободном состоянии не оказывает заметного влияния на транскрипцию с дрожжевого репортерного промотора.
2) Протимозин а человека, слитый с ДНК-связывающим доменом активатора транскрипции Gal4, подавляет транскрипцию репортерного гена в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae, ари этом не препятствуя узнаванию регуляторного сигнала промотора.
Показано, что при разделении протимозина а и ДНК-связывающего домена Gal4 белковым спейсером протимозин а перестает ингибировать работу активатора. Этот результат практически значим, поскольку делает возможным проводить поиск молекулярных партнеров протимозина а с помощью двугибридной системы.
Публикации и апробации работы. По теме диссертации опубликованы четыре печатные работы. Результаты исследований докладывались на I Всероссийской планово-отчетной конференции по направлению «Белковая инженерия» (Москва, 1994), на II съезде биохимического общества российской академии наук (Москва, 1997), на 13-м Французско-Российском симпозиуме «Структура и регуляция эукариотических генов» (Монпелье, 1997).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на \20 стр.
машинописного текста, содержит рисунков, *. таблицИ-Диссертация
состоит из введения, обзора литературы на тему «Молекулярная биология протимозина а», обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы.
