Введение к работе
~ Актуальность проблемы. Антибиотики продолжают оставаться важнейшими химиотерапевтическими препаратами, получившими широкое применение в медицинской практике для лечения тяжелых заболеваний. Возникновение устойчивых форм патогенных бактерий, необходимость снижения побочного действия лекарственных средств на микроорганизмы требуют постоянного развития исследований по скринингу новых антибиотиков, разработке методов их выделения и идентификации.
В ходе скрининга антибактериальных антибиотиков во ВНИИНА АМН была выделена редкая культура актиномицета - штамм ИНА-3802, близкая по некоторым таксономическим признакам к роду Actinopianes. Было показано также, что антибиотик 3802, продуцируемый этим актиномицетом, обладает выраженным терапевтическим эффектом при лечении стафилококкового сепсиса белых мышей, что представляет значительный интерес для практики. Кроме того, ванно было гнать особенности химического строения нового антибиотического вещества и групповую принадлежность по принятой классификации биологически активных веществ.
Цель работы заключалась в разработке оптимального способа выделения и очистки антибиотика 3802, определение его компонентного состава, а такие в изучении физико-хиглческих свойств компонентов и их идентификации. -Для этого необходимо было: I) Разработать рациональный способ выделения антибиотика 3802 из куль-туральной жидкости (КЖ), позволяющий наиболее полное извлечение его как из мицелия, так и из нативного раствора продуцента; 2) Разработать оптимальные условия очистки антибиотика 3802, позволяющие получать препараты высокой степени чистоты; 3) Изучить
- 2 -компонентный состав антибиотического комплекса 3802 и разработать условия разделения его на индивидуальные компоненты; 4) Разработать методы контроля за стадиями получения и очистки препаратов антибиотика, включающие электрофоретические, хроыатографичес-кие (ТСХ, ВЭКХ), спсктрофотометрические и другие методы анализа; 5) Определить химическую природу антибиотика и найти его место в химической классификации биологически активних веществ, разработанной Я.Берди (Венгрия); 6) Изучить физико-химические и биологические свойства антибиотика и его компонентов; 7) Провести идентификацию основного компонента антибиотического комплекса по химическим показателям.
Научная новизна и практическая ценность работы. В результате проведенного исследования выделен антибактериальный антибиотик полипептидной природы, представляющий собой комплекс по крайней мере 6 компонентов. Установлено, что основным компонентом комплекса является антибиотик 3802-ІУ-3, идентифицированный с актагардином - серусодерлшщим полипептидом группы лантибиотиков; компоненты 3802-У-4 и 3802-УІ-7 являются новыми антибиотиками этой группы и представляют собой соответственно w-ацетил- и метиловый сфир н-ацетил-производного актагардина с высокой активностью в отношении грамполояительшх микроорганизмов. Впервые обнаружено, что при кислотном гидролизе в присутствии солей Fe (но не Fea+) остатки лантиошша (Lan) и метиллантионина (MeLan) окисляются до цистеиновой кислоты (cyso3H), которую количественно можно определить на аминокислотном анализаторе; в этих условиях цистинсодернащие пептида дают cysOjH и аспа-рагиновую кислоту, а в присутствии солей те2+ - цистин полностью разрушается, a Lan - не изменяется. Показано также, что в компоненте 3802-ІУ-3 сера одного из остатков Lan (MeLan), а в нонпо-
ненте 3802-ІУ-4 - трех остатков Lan (неіап) окислены до суль-фоксида.
Результаты работы имеют значение для проведения селекционных работ по направленному биосинтезу высокоактивного компонента 3802-УІ-7 и др., а также для раэвития работ по выяснению взаимосвязи между структурой и функцией в ряду антибиотиков группы лантибиотиков.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на П Всесоюзной семинаре "Актуальные направления поиска антибиотиков" (г. Алма-Ата, 1989 г.), на Всесоюзной конференции "Современные методы выделения, очистки и идентификации микробных метаболитов" (Пущино-на-Оке, 1991 г.), на Ш Всесоюзном семинаре "Актуальные направления в технологии получения антибиотиков и других биологически активных соединений микробного происхождения" (Степно-горск, 1991 г.), на заседании кафедры химии природных соединений Химического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова (Москва, 1991 г.).
Публикации. Содержание работы опубликовано в двух работах, две статьи находятся в печати.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения,
обзора литературы, посвященного выделению и изучению триптофан-
содержащих антибиотиков-полипептидов, обсуждения результатов*
экопериментальной части, выводов и списка цитированной литерату
ры. Работа изложена на страницах машинописного текста'/
содержит- таблиц, схем и рисунков. Список литерату
ры включает наименований.
