Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Разработка и применение диагностического биопрепарата "YP-09 УГСХА" на основе бактериофагов Yersinia Pseudotuberculosis Катмакова, Надежда Петровна

Разработка и применение диагностического биопрепарата
<
Разработка и применение диагностического биопрепарата Разработка и применение диагностического биопрепарата Разработка и применение диагностического биопрепарата Разработка и применение диагностического биопрепарата Разработка и применение диагностического биопрепарата
>

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Катмакова, Надежда Петровна. Разработка и применение диагностического биопрепарата "YP-09 УГСХА" на основе бактериофагов Yersinia Pseudotuberculosis : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.06, 03.02.03 / Катмакова Надежда Петровна; [Место защиты: Ульян. гос. с.-х. акад.].- Ульяновск, 2010.- 151 с.: ил. РГБ ОД, 61 11-3/165

Введение к работе

Актуальность темы. Инфекция, вызываемая Yersinia pseudotuberculosis, привлекает к себе внимание исследователей в связи с ростом заболеваемости и все более широким ее распространением (Г.П. Сомов, 1990; Г.В. Ющенко, 2000; H. Fukushima, 2001; В.Ф. Учайкин, 2008).

Несмотря на достигнутые успехи в изучении многих аспектов иерсиниозов, актуальность этой проблемы сохраняется. Стабильные показатели заболеваемости по РФ псевдотуберкулезом (данные официальной статистики) – 7,1 на 100 тыс. населения – в последние 5 лет не отражают истинного распространения инфекций (Г.Я. Ценева, 2006). Анализ изученных факторов патогенности подтверждает абсолютную патогенность бактерий вида Y. pseudotuberculosis для людей и животных (Г.Я. Ценева, 1984; Ю.Е. Полоцкий, 1987; Н.Ф. Тимченко, 1997; Н.Д. Ющук, 2003).

О выделении штаммов Y. pseudotuberculosis из отдельных регионов при эпидемических вспышках, групповых заболеваниях или спорадических случаях людей и животных сообщается в работах M. Tsubokura et al. (1989); Г.Г. Головиной (2000); С.Н. Бениовой (2000); М.В. Чесноковой (2003); K. Jalava et al. (2004); S. Kangas et al. (2008) и др.

В последние годы выражена тенденция к активному изучению и применению в лабораторно-диагностической практике фагов бактерий различных родов и видов (В.Я. Ганюшкин, 1988; С.Н. Золотухин, 1994; Н.Е. Гаевская, 2004; Л.Д. Македонова, 2006; Т.А. Кудрякова, 2010). Бактериофаги применяются для идентификации и фаготипирования бактерий, а также ускоренной индикации возбудителей бактериальных инфекций в различных субстратах. Все большую актуальность приобретают фаготерапия и фагопрофилактика инфекционных болезней как альтернатива использованию антибиотиков.

Многообразие клинических форм псевдотуберкулезной инфекции, высокая стоимость современных лабораторных методов, отсутствие квалифицированных кадров зачастую затрудняют постановку диагноза в рядовых лабораториях, в связи с чем поиск и разработка методов своевременной индикации возбудителя, вызывающего заболевание, являются актуальной задачей.

Цель и задачи исследований. Цель – разработка технологических параметров изготовления и применения биопрепарата «YP – 09 УГСХА» на основе выделенных специфических фагов для индикации и идентификации бактерий вида Y. pseudotuberculosis. Поставленная цель решалась следующими задачами:

  1. Выделить бактериофаги, активные в отношении бактерий вида Y.pseudotuberculosis.

  2. Изучить основные биологические свойства выделенных бактериофагов: морфологию негативных колоний, литическую активность, спектр литической активности, специфичность действия, температурную устойчивость, чувствительность к воздействию хлороформа.

  3. Подобрать штаммы бактериофагов с заданными биологическими свойствами – высокой литической активностью, широким спектром литического действия, выраженной видовой специфичностью, более высоким, чем у бактерий, порогом инактивации – для конструирования диагностического биопрепарата.

  4. Разработать схему идентификации бактерий вида Y. pseudotuberculosis с помощью специфических псевдотуберкулезных бактериофагов.

  5. Разработать схему ускоренной индикации бактерий вида Y. pseudotuberculosis в объектах внешней среды с помощью диагностического биопрепарата на основе фагов YP – 2 УГСХА и YP – 7 УГСХА методом РНФ.

  6. Разработать биотехнологические параметры изготовления и контроля диагностического биопрепарата «YP – 09 УГСХА» на основе выделенных и изученных бактериофагов Y. pseudotuberculosis.

Научная новизна. Выделены новые штаммы бактериофагов, активные в отношении бактерий вида Y. pseudotuberculosis, изучены их основные биологические свойства. Разработаны параметры схемы индикации и идентификации бактерий вида Y. pseudotuberculosis в объектах внешней среды с помощью выделенных и изученных бактериофагов. Впервые разработана технология изготовления диагностического биопрепарата на основе специфических псевдотуберкулезных фагов.

Практическая значимость. Выделены и селекционированы специфичные псевдотуберкулезные бактериофаги, пригодные для изготовления диагностического биопрепарата с целью индикации и идентификации бактерий вида Y. pseudotuberculosis в объектах внешней среды. Разработана «Инструкция по изготовлению и контролю серии индикаторных псевдотуберкулезных бактериофагов YP – 2 УГСХА, YP – 7 УГСХА», предложены «Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий вида Y. pseudotuberculosis из патологического материала, пищевых продуктов, кормов и объектов внешней среды с использованием диагностических бактериофагов YP – 2 УГСХА, YP – 7 УГСХА» и «Методические рекомендации по ускоренной индикации методом реакции нарастания титра фага бактерий вида Y. pseudotuberculosis в патологическом материале, пищевых продуктах, кормах и объектах внешней среды», утвержденные ректором Ульяновской ГСХА (3 сентября, 2010).

Материалы диссертационных исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по биотехнологии, вирусологии, микробиологии для студентов факультета ветеринарной медицины, биотехнологического факультета Ульяновской ГСХА, а также при выполнении тем научно-исследовательских работ на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновской ГСХА.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Разработанная схема выделения бактериофагов позволяет обнаружить и изолировать вирулентные фаги Y. pseudotuberculosis из объектов внешней среды.

  2. Выделенные и изученные штаммы бактериофагов Y. pseudotuberculosis пригодны для изготовления диагностического биопрепарата.

  3. Разработанная схема ускоренной идентификации бактерий вида Y.pseudotuberculosis позволяет выделить и идентифицировать бактерии данного вида за 48 часов.

  4. Разработанная схема ускоренной индикации бактерий вида Y.pseudotuberculosis методом РНФ позволяет обнаружить бактерии вида Y. pseudotuberculosis в объектах внешней среды в концентрации 103 – 101 м.к. в 1 мл за 19 – 28 часов, соответственно.

  5. Разработаны технологические параметры изготовления активного и специфического биопрепарата на основе псевдотуберкулезных фагов для индикации и идентификации бактерий вида Y. pseudotuberculosis.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Всероссийских научно-практических конференциях: «Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы» (Ульяновск, 2005), «Аграрная наука и образование в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Ульяновск, 2006); II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инфекции, обусловленные иерсиниями» (Санкт-Петербург, 2006); Международных научно-практических конференциях: «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008), «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» (Москва, 2008), «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных» (Покров, 2008); конференции молодых ученых, посвященной памяти члена-корреспондента РАСХН Вишнякова И.Ф. 70-летию со дня рождения «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины (Покров, 2009).

Результаты изучения биологических свойств бактериофагов YP – 2 УГСХА, YP – 7 УГСХА и индикации бактерий вида Y. pseudotuberculosis в объектах внешней среды методом РНФ подтверждены актами комиссионных испытаний в Ульяновской ГСХА (11 – 12 февраля 2010 года).

Работа выполнена в соответствии с тематическим планом исследований кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГУ ВПО «Ульяновская ГСХА» «Диагностика и профилактика болезней молодняка сельскохозяйственных животных. Пищевые инфекции» (номер Государственной регистрации 01200203524).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения и список использованных литературных источников (230 всего, в том числе 60 зарубежных авторов). Работа изложена на 151 страницах текста, иллюстрирована 32 таблицами, 15 рисунками и дополнена приложениями.

Похожие диссертации на Разработка и применение диагностического биопрепарата "YP-09 УГСХА" на основе бактериофагов Yersinia Pseudotuberculosis