Введение к работе
Актуальность темы. В последние годы среди инфекционных болезней животных и птиц все большее внимание привлекают хламидийные инфекции.
По данным ряда исследователей (Ю.Д. Караваев 1999 г., Х.З. Хазипов, А.З. Равилов 1984 г.) наиболее значительный экономический ущерб испытывает промышленное овцеводство из-за больших потерь приплода в результате массовых абортов и гибели ягнят в первые дни после рождения.
По данным 1995-2000 гг. массовые аборты и мертворож-цения составляют при хламидиозе - 22,1%.
Поэтому борьба с хламидийным абортом овец признана эдной из актуальных задач ветеринарной науки и практики.
Основным методом серологического мониторинга при сламидиозах животных является реакция связывания комплемента (РСК, РДСК), недостатками которой является: низкая чувствительность, трудоемкость и длительность выполнения.
Для устранения перечисленных недостатков в ветеринарию практику интенсивно внедряется иммуноферментный ана-шз, который занял лидирующее положение при диагностике многих инфекционных болезней (В.Н. Сюрин 1989 г.). Явным греимуществом этого теста является высокая чувствительность, іростота выполнения, экспрессность, доступность и стабильность реагентов, возможность автоматизации процесса и объективность инструментального учета реакции.
Однако применение ИФА в диагностике хламидиозов жи-ютных сдерживается отсутствием в ветеринарной практике вы-юкочувствительных и специфичных диагностикумов.
Таким образом, разработка технологии получения компо нентов тест-системы диагностики хламидиоза овец методом им-муноферментного анализа на сегодняшний день является важної и актуальной задачей.
Цели и задачи исследований. Целью настоящих исследо ваний явились: разработка технологии получения специфически) компонентов для ИФА, отработка условий постановки ИФА длз выявления антител к хламидиям, вызывающим аборты у овец і сыворотках иммунизированных животных и сравнительное изу чение чувствительности РСК (РДСК) и ИФА при количественного определении антител в этих сыворотках.
Для реализации указанной цели были поставлены еле дующие задачи:
получить, очистить и концентрировать суспензию хламидиі штамм «Улетово»;
приготовить антигены хламидий;
получить хламидийные сыворотки на кроликах и овцах; синтезировать конъюгат антивидовых антител с ферменте^ пероксидазы для постановки ИФА;
отработать оптимальные условия постановки реакции ИФі< для выявления антител к антигенам хламидий;
- изучить чувствительность ИФА и РСК (РДСК) при количест
венном определении антихламидийных антител в сыворотка
иммунизированных овец;
провести опытные испытания набора для иммуноферментно диагностики хламидиоза овец.
Научная новизна. Впервые для ветеринарных лаборатс рий России разработан набор компонентов для иммунофермеш
ной диагностики, позволяющий выявлять инфицированных хла-мидиями овец. Экспериментально доказана возможность повышения эффективности диагностики хламидиоза на 17,5% за счет применения набора ИФА.
Практическая значимость работы. Результаты научно-исследовательских работ, полученные при выполнении диссертации, вошли в нормативно-техническую документацию: I. Временная инструкция по изготовлению и контролю набора
для нммуноферментной диагностики хламидиоза овец; І. ТУ-938800-004 «Набор для нммуноферментной диагностики хламидиоза овец», утвержденные 31 марта 1997 г. ГУВ Мин-сельхоза и продовольствия Российской Федерации; ''. Временное наставление по применению набора для нммуноферментной диагностики хламидиоза овец, утвержденное ГУВ Минсельхоза и продовольствия Российской Федерации 31 марта 1997 г.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и бсуждены на конференциях:
. Всероссийской научно-практической конференции «Вирусные болезни сельскохозяйственных животных», Владимир, 1995 г.; . V Всероссийской конференции «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов», Москва, 1996 гг.; Ученых советах ВНИТИБП (1995-1998 гг.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано -статьи, заключительный отчет по научно-исследовательской
работе, нормативно-техническая документация на изготовление, контроль и применение диагностикума.
Основные положения диссертации, выносимые па защиту:
получение специфических компонентов для постановки иммуноферментного анализа;
отработка условий постановки иммуноферментной тест-системы для выявления антител к антигенам хламидий; изучение сравнительной чувствительности РСК (РДСК) и ИФА при определении антихламидийных антител в сыворотках иммунизированных животных; - апробация набора для иммуноферментной диагностики хла-мидиоза овец.
Объем и структура диссертации. Диссертационный материал изложен на 128 машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами и 13 рисунками. Список литературы содержит 220 источников, в том числе 105 иностранных.