Введение к работе
Актуальность темы. Как в России, так и за рубежом регистрируется рост пищевых инфекций. По информации ВОЗ (1999) ежегодно в мире острыми кишечными инфекциями (ОКИ) болеют 2 млрд. человек. В России из более чем 5 млн. случаев ОКИ, зарегистрированных за период с 1989 по 1999 гг., этиология половины (55,6 %) не установлена (Равилов, Гильмутдинов, Хусаинов, 1999). Одной из причин этого является то, что диагностические и профилактические бактериологические исследования предусматривают поиски и выделение лишь ограниченного числа патогенных микроорганизмов – в первую очередь возбудителей кишечных инфекций. Однако, этиологическое значение в заболевании людей могут приобретать самые разнообразные микроорганизмы, среди которых и Aeromonas hydrophila (Gibbs, Shawn, Mark, 2008).
Бактерии A.hydrophila являются возбудителями инфекционных патологий рыб и других гидробионтов, животных и человека. Биологическая особенность этих микроорганизмов заключается в их способности к свободному обитанию в пресной и соленой воде. Особую опасность для человека представляют контаминированые аэромонадами вода и морепродукты (рыба, ракообразные, моллюски), а также продукты растительного и животного происхождения.
Микроорганизмы данного вида представляют серьезную проблему для многих стран Европы и Азии, в которых аэромонадная инфекция составляет от 1 до 10 % острых кишечных заболеваний у взрослых и до 50 % у детей (Agger, Cormick, Gurwith, 1985). В США A.hydrophila являются причиной 13 % острых кишечных инфекций (Schadich, Cole, 2009).
При заражении бактериями A.hydrophila у людей с ослабленным иммунитетом может развиться септицемия и в этом случае инфекция приобретает угрожающий жизни характер, поражая мозг, кости, почки, глаза, мягкие ткани. В результате у пациентов с таким заражением развивается пневмония, менингит, остеомиелит, септический артрит, гангренозные поражения кожи и т.п. (Zhiyong, Xiaoju, Yanyu, 2002).
Статистических данных о циркуляции аэромонад в объектах ветеринорно-санитарного надзора в нашей стране не существует. Вместе с тем, роль A.hydrophila в возникновении пищевой инфекции уже доказана. Целенаправленного поиска аэромонад в пищевом сырье и продуктах не проводится, так как наличие этих микроорганизмов не регламентируется действующими нормативными документами. Кроме этого, практические бактериологи имеют недостаточный комплект методических разработок по выделению и идентификации бактерий рода Aeromonas. А более детальная идентификация отдельных подвидов A.hydrophila стала разрабатываться лишь в последнее время.
Цель исследования – разработка методов выделения и идентификации бактерий вида Aeromonas hydrophila из объектов ветеринарно-санитарного надзора.
Задачи исследования:
-
Изучить биологические свойства бактерий вида A.hydrophila.
-
Разработать транспортную среду, среду накопления и селективную среду для выделения бактерий вида A.hydrophila.
-
Разработать схему выделения и идентификации бактерий вида A.hydrophila из различных объектов окружающей среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.
-
Изучить распространение бактерий вида A.hydrophila.
-
Создать биопрепарат-диагностикум для антигенной идентификации A.hydrophila методом планшетной реакции агглютинации (РА).
Научная новизна работы. Разработана оптимальная схема выделения и идентификации бактерий вида A.hydrophila из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов. Сконструированы новые среды накопления, селективная и транспортная для выделения бактерий вида A.hydrophila, а также среда для внутривидовой дифференциации данных бактерий. Изучено распространение аэромонад в объектах ветеринарно-санитарного надзора. Создан биопрепарат-диагностикум для антигенной идентификации A.hydrophila методом пластинчатой РА.
Практическая значимость работы. Предложенная в диссертационной работе схема позволяет выделять и идентифицировать штаммы A.hydrophila из пищевого сырья, пищевых продуктов и объектов внешней среды. С помощью сконструированной дифференциальной среды появилась возможность определять биоварианты A.hydrophila. Сконструирован биопрепарат-диагностикум для антигенной идентификации бактерий вида A.hydrophila методом пластинчатой РА.
По материалам диссертационной работы предложена «Инструкция по выделению и идентификации бактерий Aeromonas hydrophila», разработанная для сотрудников медико-биологических научных учреждений, врачей бактериологических лабораторий, в помощь работникам рыбоводческих хозяйств, определяющая временный порядок и правила проведения лабораторных исследований по выделению и идентификации данных бактерий. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций, для практических занятий студентов, работы аспирантов на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Транспортная среда (УГСХА-тр.А.h.) позволяет сохранять жизнеспособность бактерий вида A.hydrophila при перевозке проб исследуемого материала до лаборатории. Среда накопления (УГСХА-1А.h.) способствует максимальному росту и размножению аэромонад. Плотная селективная среда (УГСХА-2А.h.) высоко специфична и обеспечивает рост большинства штаммов данного вида микроорганизмов. Дифференциальная среда для биоваров Aeromonas hydrophila позволяет осуществлять идентификацию до подвида.
-
Оптимальная схема дает возможность за 48 ч выделять и идентифицировать бактерии вида A.hydrophila из различных объектов окружающей среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.
-
Бактерии A.hydrophila широко распространены в объектах санитарного надзора: выделяются из открытых водоемов, сточной воды и речной рыбы, при этом имеют стабильную сезонность.
-
Диагностический биопрепарат позволяет идентифицировать A.hydrophila методом пластинчатой РА.
Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» в рамках научно-исследовательской темы: «Разработка и усовершенствование методов диагностики, лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний».
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: Всероссийских научно-практических конференциях Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2006, 2007, 2008), Международных научно-практических конференциях «Биотехнология. Вода и пищевые продукты» (Москва, 2008), «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» (Москва, 2008), «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных» (Покров, 2008).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ, из них 2 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, состоящих из материалов и методов, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка использованных литературных источников. Материалы диссертации изложены на 126 страницах, включают 20 рисунков, 18 таблиц. Список использованных литературных источников содержит 126 наименований, в том числе 81 зарубежных.
