Введение к работе
Актуальность темы. Успешное ведение селекционно-племенной работы и получение высоких показателей продуктивности, невозможно без поддержания соответствующего ветеринарно-санитарного благополучия хозяйства. Иными словами, здоровье животных, является тем стержнем, опираясь на который можно внедрять современные достижения технологии производства, использовать генетический потенциал и другие составляющие рентабельного сельскохозяйственного производства в полном объеме.
Интенсивное ведение животноводства способствует распространению заболеваний, поражающих дыхательные пути. В этиологической структуре этих заболеваний значительная роль принадлежит вирусам инфекционного ринотрахеита (ИРТ), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС), парагриппа-3 (ПГ-3), респираторно-синцитиальной (РС) и аденовирусной (АВ) инфекций. (В.В.Гуненков, 1975; В.Н.Сюрин1978; Н.Н.Крюков 1984; Р.В.Белоусова,1989;С.В.Кузнецова,1991;П.А.Красочко,1997;В.А.Мищенко,
2001;А.Г.Глотов,2001,Т.И.Глотова,2006; К.П.Юров,2001,2003; Д.П.Кузнецов,
2002; О.Г.Петрова,2002; О.Г.Новиков,2002; A.L.E. Lindberg,2003, Н.И. Кот,2003; А.Я.Самуйленко, 1998и др.).
Однако в настоящее время ветеринарная практика располагает наборами моно-диагностических тест-систем в основном зарубежного производства. Поэтому увеличение номенклатуры, совершенствование качества и стандартизация отечественных диагностических тест-систем для серологического мониторинга респираторных заболеваний крупного рогатого скота является актуальной задачей.
Современное развитие биотехнологии предполагает создание экспресс-методов диагностики на основе иммуноферментных тест-систем (ИФА).
При этом необходимо использование в данных системах высокоэффективных и специфических реагентов, полученных на основе современных технологий в области выделения и очистки вирусных белков, получения специфических сывороток.
В этой связи актуальным является разработка технологии изготовления комплексных диагностических тест-систем и совершенствование методов серологического мониторинга вирусных инфекций.
Цели и задачи исследований. Цель исследований - серологический мониторинг вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
-провести анализ эпизоотической ситуации по респираторным болезням крупного рогатого скота в хозяйствах РФ;
-определить этиологическую структуру респираторных вирусов в возникновении патологий крупного рогатого скота;
- усовершенствовать тест-систему ИФА для выявления антител к антигенам вирусов ИРТ, ПГ-3,РС, ВД-БС и АВ инфекции в сыворотках крови и молозиве крупного рогатого скота при тестировании в одном разведении и установить критерии оценки результатов;
-провести серологический мониторинг поголовья крупного рогатого скота на наличие вирусных респираторных болезней и проанализировать полученные результаты.
Научная новизна.
1. Проведен анализ эпизоотической ситуации по респираторным болезням крупного рогатого скота в хозяйствах РФ и определена этиологическая структура респираторных вирусов в возникновении патологий.
2. Усовершенствована технология получения компонентов иммуноферментной тест-системы для выявления специфических антител в сыворотках крови к антигенам вирусов ИРТ, ПГ-3, ВД-БC, РС и АВ инфекций (Патент РФ «Комплексная тест-система иммуноферментного анализа (ИФА) для определения уровня антител к вирусным респираторным заболеваниям крупного рогатого скота» №2371726, 2009 г.
3. Получены специфические компоненты, контрольные референс-сыворотки, оптимизированы условия постановки, критерии оценки результатов иммуноферментной тест-системы (Патенты РФ: «Способ получения стандартной положительной панели сывороток крови для контроля качества иммуноферментных тест-систем» №2392331, 2009 г.; «Способ выявления специфических антител к вирусным респираторным инфекциям крупного рогатого скота» №2008126759, 2010 г.).
4. Проведен анализ результатов серологического мониторинга поголовья крупного рогатого скота с использованием разработанной тест-системы.
Практическая значимость работы.
Результаты исследований использованы при составлении:
- "Методических рекомендаций по определению уровня специфических антител к антигенам вирусов инфекционного ринотрахеита (ИРТ), парагриппа-3 (ПГ-3), респираторно-синцитиальной инфекции (РС), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС), аденовирусной инфекции (АВ) крупного рогатого скота в комплексной тест-системе иммуноферментного анализа", рассмотренные и одобренные 21 сентября 2007 года на секции "Ветеринарная биотехнология" ОВМ РАСХН, протокол №1;
- методических рекомендаций «Мероприятия по профилактике респираторных заболеваний и болезней органов размножения крупного рогатого скота», утвержденные 25 мая 2009 г. директором ГНУ ВНИТИБП.
Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность по использованию тест-системы ИФА не только для серологического мониторинга вирусных заболеваний, но и для оптимизации противоэпизоотических мероприятий с целью установления этиологической структуры респираторных вирусов в возникновении патологий крупного рогатого скота.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета и Методической комиссии ГНУ ВНИТИБП (2005-2010гг), в виде ежегодных отчетов по темам заданий Российской НТП, а также на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» 2007 г.; на заседаниях секции "Ветеринарная биотехнология" Отделения ветеринарной медицины РАСХН, Щелково, 2007-2008 гг.
Публикации научных работ. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, из них 1 -в издании по перечню ВАК. Получены Патент РФ «Способ выявления специфических антител к вирусным респираторным инфекциям крупного рогатого скота» №2008126759, 2010 г. и Патент РФ «Комплексная тест-система иммуноферментного анализа (ИФА) для определения уровня антител к вирусным респираторным заболеваниям крупного рогатого скота». №2371726,2009.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту.
Анализ эпизоотической ситуации по респираторным болезням крупного рогатого скота в хозяйствах РФ.
Определение этиологической структуры респираторных вирусов в возникновении патологий крупного рогатого скота.
Усовершенствование тест-системы ИФА для выявления антител к антигенам вирусов ИРТ, ПГ-3,РС, ВД-БС и АВ инфекции в сыворотках крови и молозиве крупного рогатого скота.
Результаты серологического мониторинга поголовья крупного рогатого скота на наличие вирусных респираторных болезней.
Личный вклад. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы работы проводились совместно с сотрудниками отдела молекулярной биологии ГНУ ВНИТИБП Д.П. Кузнецовым, С.В. Кузнецовой, И.И. Кочиш, Т.Ю. Кочиш, С.Ю.Филипповым, патентоведом института С.И. Бехтеревым. Автор выражает признательность академику РАСХН А.Я. Самуйленко и всем исполнителям и участникам за помощь в выполнении диссертационной работы.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, приложения. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 16 рисунками, 1 схемой. Список литературы включает 265 источников, в том числе 103 отечественных и 162 зарубежных.
