Введение к работе
з
Актуальность темы. Лейкоз крупного рогатого скота относится к числу опухолевых заболеваний, индуцируемых вирусной инфекцией. Возбудителем является вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС). Это РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae, подсемейства Oncovirinae. Он входит в одну группу с возбудителем Т-клеточного лейкоза человека. ВЛ КРС, являясь экзогенным ретровирусом, имеет чрезвычайно широкое распространение среди животных, особенно в условиях индустриального животноводства с высокой концентрацией поголовья в хозяйствах. Инфицированность животных в некоторых стадах может превышать 50%. У части инфицированных животных развивается лнмфоцитоз или опухолевая форма болезни, приводящая к гибели животных (Бурба Л.Г., 1977).
Мероприятия по борьбе с лейкозом направлены на предупреждение ВЛ КРС-инфекции, как этиологической основы заболевания. При низком уровне инфицированности достаточно диапюсцировать ВЛ КРС инфекцию с помощью хорошо разработанных серологических методов, а затем удалить зараженных животных из стада. Однако, в сильно пораженных хозяйствах такой подход не может быть использован по экономическим соображениям. В этом случае могла бы быть полезной вакцинация против ВЛ КРС, которая привела бы к резкому снижению процента зараженных животных, с последующим освобождением стада от них с помощью традиционных подходов (Шишков В.П.. Крикун В.А., 1979).
Современная биотехнология, основанная на методах генетической инженерии, позволяет разрабатывать вакцины нового типа. В частности, важным направлением является использование в качестве вектора вируса осповакцины (ВОВ) и других поксвирусов для создания живых рекомби-нантных вакцин (Альтштейн А.Д., Валихов А.Ф., 1992). В настоящее время создан набор рекомбинантов ВОВ (РВОВ), экспрессирующих env ген ВЛ КРС и отличающихся по: свойствам вируса-вектора; промотору, контроли-
рующему экспрессию env гена; встроенной в вирус генно-инженерной конструкции. Сравнительное изучение этих рскомбмнантов стало предметом настоящего исследования.
Цель н задачи исследовании. Работа посвящена сравнительному изучению биологических свойств рекомбинантных штаммов ВОВ, экспресси-рующих оболочечный гликопротеид ВЛ КРС, полученных в лаборатория генетики вирусов НИИ биологии гена РАН.
В процессе выполнения настоящей работы решались следующие задачи:
-
Провести сравнительное изучение репродукции, экспрессии оболо-чечного антигена gp М ВЛ КРС, особенности цитопатического эффекта рекомбинантных штаммов ВОВ в культуре клеток.
-
Изучить на лабораторных животных иммунологические свойства и нейровирулентную активность рекомбинантов ВОВ.
-
Изучить накопление антигена gp 51 ВЛ КРС в куриных эмбрионах, зараженных рекомбипантными штаммами вируса осповакцины.
-
Изучить возможность применения рекомбинантных штаммов ВОВ, как источник антигена gp 51 в диагностических целях.
Научная новизна и практическая ценность работы. Разработка и изучение рекомбинантов ВОВ, экспрессирующих gp 51 ВЛ КРС, является новым научным направлением в области создания специфических средств профилактики лейкоза крупного рогатого скота.
Проведено сравнительное изучение биологических и иммунологических свойств рекомбинантных штаммов ВОВ, экспрессирующих ген env ВЛ КРС в культуре клеток, на животных и в куриных эмбрионах. Дана сравнительная оценка экспрессии gp 51 ВЛ КРС оригинальными рскомбинантами ВОВ. Впервые выявлен и изучен симпластообразующий эффект в культуре клеток. Показано существенное снижение нейровирулептной активности ) рекомбинантов по сравнению с исходными штаммами ВОВ. Установлено что рекомбинанты ВОВ могут быть использованы в качестве источника ан
тигена gp 51 для диагностических целей. Разработан и утвержден лабораторный регламент по изготовлению и контролю набора диагностикумов для выявления антител к гликопротепдному антигену ВЛ КРС методом иммуноферментного анализа (Москва, ВИЭВ 23.04.1996; Москва, НИИ биологии гена РАН 31.05.1996).
Изученные варианты рекомбинантных штаммов ВОВ в дальнейшем также могут использоваться для разработки живой вакцины против инфекции, вызванной ВЛ КРС.
Апробация работы. Результаты исследований доложены:
на научно-практических конференциях: "Вирусные болезни сельскохозяйственных животных" (Владимир, 1995), "Ретровируспые и прионные инфекции животных" (Москва, 1995); на научно-производственной конференции (Курск, 1996); на 10-ом международном конгрессе по вирусологии (Израиль, Иерусалим, 1996).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы (84 отечественных и 202 зарубежных источника) и приложения. Работа содержит 13 таблиц и иллюстрирована 21 рисунком.