Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Строение и классификация антибактериальных пептидов 12
1.2. Механизм действия антибактериальных пептидов 22
1.3. Механизмы устойчивости к антимикробным пептидам 29
1.4.Синтез антибактериальных пептидов 31
1.4. Исторический очерк применения экстрактов из Galleria mellonella
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 40
2.1. Характеристика объекта исследования - восковой моли 40
(Galleria mellonella)
2.2. Получение экстрактов из личинок большой восковой моли 42
2.3. Индуцирование производства пептидов личинками Galleria mellonella, получение гемолимфы, очистка и фракционирование
2.4. Метод определения антибактериальной активности пептидных фракций гемолимфы
2.5. Морфологическая и биохимическая характеристика тестовых микроорганизмов Escherichia coli и Bacillus cereus
2.6. Методы определения ферментативной активности клеток Escherichia coli
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение
3.1 .Изучение антибактериальной активности спиртовых 55
экстрактов личинок восковой моли
3.2.Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения культуры клеток Pseudomonas aerugenosa
3.3. Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения культуры клеток Escherichia coli
3.4.Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения смеси культур Escherichia coli и Bacillus cereus
3.5. Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения ксенобиотика 1,1-диметилгидразина (гидразон)
3.6.Исследование влияния пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella на ферментативную активность Escherichia coli
Заключение 103
Выводы 112
Список литературы 114
- Механизм действия антибактериальных пептидов
- Индуцирование производства пептидов личинками Galleria mellonella, получение гемолимфы, очистка и фракционирование
- Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения культуры клеток Escherichia coli
- Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения ксенобиотика 1,1-диметилгидразина (гидразон)
Механизм действия антибактериальных пептидов
К линейным катионным пептидам относится большая группа цекропинов. Это пептиды, состоящие из 31-39 а. о., для которых характерен сильно основный N-конец, содержащие длинную гидрофобную последовательность в С-концевой области и формирующие обычно две а-спирали, соединенные шарнирным участком (Holak et al., 1988). С-концевой аминокислотный остаток модифицирован амидной группой. Цекропины были выделены из иммунизированной гемолимфы гигантского шелкопряда Hyalophora cecropia (Hultmark et al., 1980), а также других представителей Lepidoptera и Diptera (Samakovlis et al., 1990; Hara et al., 1995; Marchini et al., 1998).
В дальнейшем было показано, что синтез цекропинов насекомых индуцируется бактериальной инфекцией (Вгеу et al., 1993). Заслуживает внимания консервативность аминокислотной последовательности цекропинов из насекомых различных филогенетических групп. Единственный известный цекропин млекопитающих, Р1 из тонкого кишечника свиньи, также близок по первичной структуре к цекропинам насекомых, но, в отличие от них, лишен шарнирной последовательности. Молекула Р1 формирует одну спирать, а не две, причем введение остатка пролина в позицию 22 молекулы Р1 по аналогии с цекропинами насекомых приводит к значительному снижению антибактериальной активности (Gazit et al., 1995). Все цекропины исключительно активны по отношению к грамотрицательным и некоторым грамположительным бактериям (Bacillus megaterium, Micrococcus luteus), но неэффективны против стафилококков и большинства видов рода Bacillus. Наиболее восприимчивы к действию цекропинов мутантные штаммы (например, Escherichia coli D22) с повышенной проницаемостью клеточной оболочки. О роли последней в резистентности бактерий к цекропинам свидетельствует также усиление литического эффекта цекропинов в присутствии 0,5 мМ ЭДТА (Holak et al., 1988).
Саротоксин IA - типичный представитель линейных катионных пептидов насекомых, относится к группе цекропинов. Он состоит из 39 а.о. (около 4 кДа), в природе образуется в гемолимфе личинок мясной мухи Sarcophaga peregrine в ответ на повреждение тела личинки и проникновение бактериальной инфекции (Таран, 2002). Спектр антибактериального действия саротоксина достаточно широк: он токсичен как для грам отрицательных, так и грамположительных бактерий в концентрациях, сравнимых с эффективными концентрациями традиционных антибиотиков (Okada et al., 1984).
Пептиды семейства магаининов также имеют линейную структуру и содержат, как правило, 23 а.о. В водном растворе при нейтральном рН магаинин практически не имеет вторичной структуры, в то время как при связывании с мембраной он приобретает а-спиральную структуру (спиральность - 60-90 %) (Strandberg et al., 2013). Магаинины хранятся в кожных железах и секретируются в недопроцессированном виде - активная форма пептида образуется в результате протеолиза уже на поверхности кожи (Hultmark et al., 1980). В эпителии желудка шпорцевой лягушки Xenopus laevis обнаружена новая разновидность многоядерных гранулоцитов, в которых антимикробные пептиды семейства магаининов: магаинины I и II, PGLa, PGQ и четыре фрагмента предшественника церулеина - CPF хранятся в зрелом виде, что было показано иммуногистохимическими исследованиями. Причем аминокислотные последовательности пептидов из желез желудка оказались идентичными таковым их аналогов, секретируемых кожными железами. Впоследствии из кожных и гастроэнтеральных желез Xenopus были очищены и другие представители семейства магаининов; PGLa, фрагмент предшественника ксенопсина XPF, пептид из железистого эпителия желудка PGQ и ряд пептидов, высвобождающихся, по-видимому, в результате процессинга различных известных белков (Нага et al., 1995).
Близки к пептидным антибиотикам данной группы и самые низкомолекулярные из известных пептидных антибиотиков (темпорины), очищенные из лягушки Rana temporaria и представляющие собой продукт ограниченного протеолиза гистона Н2А (Lee et al, 1989; Wang et al, 2012). Все перечисленные пептидные антибиотики, в отличие от многочисленных токсинов, присутствующих в слизистых выделениях амфибий и также секретируемых гранулярными кожными железами, в физиологических концентрациях ареактивны по отношению к клеткам эукариот, но ингибируют рост бактерий и грибов, а также способны индуцировать осмотический лизис простейших (Lee et al., 1989; Fink et al., 1989).
К группе пептидов, содержащих дисульфидные связи преимущественно относятся дефенсины. Это пептидные антибиотики, содержащие в своем составе 34-51 а.о. Дефензины насекомых характеризуются наличием 6-ти консервативно расположенных цистеиновых остатков, образующих три внутримолекулярных дисульфидных мостика (Hoffman et al, 1981, 2002; Wei et al, 2015). В молекуле дефензина выделяют три участка - гибкий и малоупорядоченный N-концевой, центральный, представленный амфипатической а-спиралью и С-концевой. С-концевой участок дефензина является 3-слоем, сформированным двумя антипараллельными Р-тяжами (Bonmatin et al., 1992). Дисульфидные мостики стабилизируют вторичную структуру пептида и поддерживают его третичную структуру, которая необходима для максимальной реализации антимикробных свойств молекулы (Bulet et al., 2005). Дефензины активны только против грамположительных бактерий и почти не оказывают токсического влияния на грамотрицательные бактерии и эукариотические клетки (Lehrer et al., 1993; Tonk et al., 2014).
Пептидные антибиотики этого класса обнаружены при исследовании кислороднезависимой микробицидной активности в азурофильных гранулах макрофагов и полиморфноядерных нейтрофилов кролика, в которых дефензины составляют до 17 % всего клеточного белка (Giovannini et al., 1987; Simmaco et al., 1993). Вскоре экспрессия генов, кодирующих пептиды этого семейства, была показана в миелоцитах человека, крысы и морской свинки (Simmaco et al, 1991; Мог et al, 1991; Simmaco et al, 1996). Это богатые аргинином катионные пептиды, состоящие из 29-34 а. о., шесть из которых цистеины, образующие три внутримолекулярные дисульфидные связи (Zasloff et al., 1988). Несмотря на незначительную гомологию в аминокислотной последовательности, положение упомянутых дисульфидных связей в молекулах дефензинов различного происхождения высоко консервативно. Подобную структуру имеет и молекула криптидина -пептидного антибиотика, продуцируемого клетками Пакета в криптах тонкого кишечника мыши, а также макрофагами в соединительной ткани (Fehlbaum et al, 1996).
Индуцирование производства пептидов личинками Galleria mellonella, получение гемолимфы, очистка и фракционирование
Бумажные диски d=0,6 см (8-мь дисков для каждого образца) пропитывали анализируемыми фракциями и помещали на свежие посевы во влажном состоянии. Перед посевом бактерий диски стерилизовали с помощью УФ-бактерицидных ламп. Посев проводился в микробиологическом боксе на чашки Петри методом распределения по поверхности шпателем Дригальского, после чего чашки Петри помещали в термостат на двое суток при 37 С. Антибактериальная активность определялась по размерам зон ограниченного роста Escherichia coli и Bacillus cereus (наличие единичных точечных колоний или отсутствие колоний) вокруг дисков, пропитанных фракциями гемолимфы. В качестве образцов сравнения для фракций гемолимфы использовали диски, пропитанные фракциями гемолимфы интактных личинок Galleria mellonella, диски, пропитанные стерильной дистиллированной водой, 34%-м этанолом, а также буфером различной молярности. 2.5. Морфологическая и биохимическая характеристика тестовых микроорганизмов Escherichia coli и Bacillus cereus
Escherichia coli широко распространена в природе (почва, вода, пищевые продукты), поэтому ее используют как санитарно-показательный микроорганизм фекального загрязнения внешней среды (коли-титр, коли-индекс) (Минкевич, 1944). Escherichia coli представляет собой короткую палочку с закругленными концами 1,1-1,5x2,0-6,0 мкм, одиночную или в парах, имеются подвижные и неподвижные формы. Некоторые штаммы имеют капсулу или микрокапсулу (Покровский, 2002; Гусев и др., 2003; Борисов, 2005).
Кишечная палочка относится к грамотрицательным неспорообразующим бактериям, с перетрихиально расположенными жгутиками. Escherichia coli имеет ворсинки по типу фимбрий (Борисов, 2005) (рис. 6). Рисунок 6. Внешний вид Escherichia coli, увеличение 3000 (Берджи, 1997) Escherichia coli является факультативным анаэробом, осуществляя метаболизм как дыхательного, так и бродильного типа. По способу существования относится к хемоорганогетеротрофам. Интенсивно растет при оптимальной температуре 37С и слабощелочной реакции среды, вызывает брожение при температуре 45-46С. Кишечная палочка растет и размножается при значительных колебаниях рН от 4,2-9,5, причем сама его регулирует (Покровский, 2002).
Escherichia coli обладает высокой ферментативной активностью, утилизирует ацетат в качестве единственного источника углерода. Escherichia coli хорошо ферментирует такие углеводы как глюкоза, сахароза, лактоза, маннит с образованием уксусной, муравьиной, пропионовой и молочной кислот, этилового спирта, водорода и углекислоты. Не способна разлагать жиры и высшие жирные кислоты и нативный белок (Пивоваров и др., 1982; Борисов, 2005). Молоко свертывает на 2-3-и сутки (Фершт, 1980). Пептоны разлагает с образованием аминов, аммиака, сероводорода, меркаптанов. Восстанавливает нитраты в нитриты. Не обладает амилолитической активностью. Является оксидазоотрицательной, каталазоположительной. По способности ферментировать лактозу различают лактоза-положительные и лактоза-отрицательные штаммы (Готшалк, 1982; Борисов, 2005).
Патогенность у кишечной палочки выражена слабо, однако у человека может вызывать кишечные инфекции, поражения мочевыводящих путей, бактериемии, менингиты, сепсис, перитонит (Лобашевский, 1992; Бакиров и др., 2011).
Escherichia coli, вызывающие диарею, отличаются друг от друга по факторам патогенности: энтеропатогенные кишечные палочки - возбудители диареи у детей; энтеротоксигенные кишечные палочки - возбудители холероподобной инфекции; энтероинвазивные кишечные палочки вызывают поражения типа бактериальной дизентерии; энтерогеморрагические кишечные палочки - возбудители гемморагического колита (Покровский, 2002; Борисов, 2005; Бакиров и др., 2011).
Bacillus cereus - почвенная бактерия-сапрофит, широко распространённая в природе, относится к грамположительным спорообразующим палочковидным бактериям. Вегетативные формы в диаметре составляют от 0,5x1,2 до 2,5x10 мкм и могут расти при оптимальной температуре от 25 до 37С и рН7-9,5. Клетки соединены в цепочки, подвижные за счет перетрихиально расположенных жгутиков (рис. 7) (Пивоваров и др., 1982, Берджи, 1997, Литусов и др., 2008).
Эндоспоры расположены центрально, имеют эллипсоидную или цилиндрическую форму и обычно не превышают размер клетки. По способу существования относится к хемоорганогетеротрофам. Метаболизм дыхательного типа, аэроб, реже факультативный анаэроб. Большинство штаммов Bacillus cereus являются каталазоположительными (Мишустин, 1975, 1979; Огай, 1972).
Bacillus cereus является возбудителем пищевых токсикоинфекций, респираторных инфекций, а также вызывает септицемию, эндокардит, перикардит, поражения центральной нервной системы. По данным ВОЗ пищевые инфекции, вызванные Bacillus cereus, составляют не более 1%-та от общего числа, заражающая доза составляет 10 или более клеток на 1 г эпидемиологически подозреваемой пищи (Turnbullp et al., 1991). Почти все штаммы Bacillus cereus продуцируют токсины, которые образуются только in vivo, во время прорастания спор. Около 95%-тов штаммов Bacillus cereus продуцируют цитотоксический энтеротоксин, из них негемолитический энтеротоксин (NHE) продуцируют более 90%-тов штаммов, а гемолизин BL (HBL) около 55%-тов исследованных штаммов, также некоторые штаммы продуцируют термостабильный рвотный энтеротоксин (ЕТЕ) (Harvie , 2005, Wijnands, 2006, Clavel, 2007).
Выбор в качестве тестовых микроорганизмов Escherichia coli М-17 и Bacillus cereus АТСС 10792Т не случаен, так как данные микроорганизмы являются типичными представителями грамотрицательных и грамположительных бактерий, которые обычно используются в качестве тестовых микроорганизмов. Кроме того, данные штаммы разрешены для работы в микробиологической лаборатории, так как являются наименее опасными.
Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения культуры клеток Escherichia coli
Хроматографические области, соответствующие фракции №1 (фракции гемолимфы, элюированные 40%-ным ацетонитрилом), отличаются наличием пиков после 3,16 мин элюирования в случае образца, полученного из индуцированных личинок. МАЛДИ-анализ показал, что фракция №1 гемолимфы личинок после действия смесью культур Escherichia coli и Bacillus cereus содержала два коротких пептида, а один из них обнаруживался и у интактных личинок. Бактерицидный эффект фракции, полученной из гемолимфы индуцированных личинок, ограничивающей рост Escherichia coli на 67%-тов, может быть обусловлен наличием в ней ранее неизвестного пептида с молекулярной массой 1013 Да.
Антибактериальный эффект фракции №2 по отношению к Escherichia coli не зависит от наличия воздействия (25 и 22%-та ограничения роста соответственно), однако после него в ней увеличивается число пептидных соединений. Пептидный состав фракций гемолимфы индуцированных и интактных личинок восковой моли различен и увеличивается после воздействия на личинки смесью культур Е. coli и В. cereus. Известных антиактериальных компонентов в составах фракций №2 гемолимфы индуцированных и интактных личинок обнаружено не было. По-видимому, антибактериальный эффект данных фракций обусловлен ранее не описанными пептидными компонентами.
Хроматографические пики в области активной против Е. coli фракции №3 слабо выражены, однако, можно наблюдать появление пика после 5,83 мин разделения образца личинок, подвергнутых воздействию культурами Е. coli и В. cereus. Антибактериальный эффект фракции №3 по отношению к Е. coli не зависит от воздействия на личинки восковой моли смесью культур Е. coli и В. cereus (30 и 28%-тов соответственно). Кроме того, фракция №3 гемолимфы интактных личинок проявляет активность и против В. cereus (28%-тов ограничения роста по сравнению с контролем). Пептидные составы фракций гемолимфы индуцированных и интактных личинок различны. Фракция №3 содержит в своем составе известный бактерицидный пептид Lebocin-like anionic peptide 1 LEBl GALME с молекулярной массой 4819Да (Cytrynska et al, 2007).
Антибактериальный эффект по отношению к Е. coli проявляется только во фракции №4 гемолимфы личинок восковой моли, индуцированных смесью культур Е. coli и В. cereus (47%-тов задержки роста по сравнению с контролем). Пептидный состав фракции №4 гемолимфы индуцированных и интактных личинок восковой моли различен, однако в обоих случаях преобладают короткие пептиды с молекулярной массой от 813 до 3664Да, известные бактерицидные пептиды не обнаружены.
Хроматографические профили для фракции №5 различны для индуцированной и интактной групп личинок. Состав данной фракции гемолимфы интактной группы личинок восковой моли характеризуется интенсивным пиком при 8,68 мин, она содержит больше пептидов и проявляет высокую антибактериальную активность против Е. coli. Фракция №5 гемолимфы индуцированных личинок не обладает антибактериальным действием по отношению к Е. coli, однако наблюдается значительный эффект при воздействии составом данной фракции на тест-культуру В. cereus (38%-тов ограничения роста по сравнению с контролем). Фракция №5 гемолимфы как индуцированных, так и интактных личинок восковой моли содержала в своем составе известный бактерицидный пептид с М.М. 1695-1696Да (Kopacek et al., 1995). Кроме того, фракция №5 гемолимфы личинок индуцированной и интактной группы содержит пептид с молекулярной массой 5384Да - фрагмент ингибитора сериновой протеазы ISP1GALME (Hansen et al., 2001), который, по-видимому, способен проявлять антибактериальную активность по отношению к Е. coli и В. cereus.
В составе фракции №6 обнаруживается известный бактерицидный пептид с молекулярной массой 1696Да (Cytrynska et al, 2007). Бактериостатическая активность фракции №6 по отношению к Escherichia coli увеличивается после воздействия на личинки восковой моли смесью культур Е. coli и В. cereus до 72%-тов, что, по-видимому, обусловлено появлением пептида с М.М. 1231 Да, отсутствующего во фракции интактных личинок.
Во фракциях №7 и №8 значительных различий по пептидному составу и соотношениям интенсивностей между группами индуцированных и интактных личинок не наблюдается. Однако антибактериальный эффект по отношению к Е. coli наблюдался только при воздействии составами фракций №7 и №8 гемолимфы индуцированных личинок восковой моли. Во фракциях №8 гемолимфы индуцированных и интактных личинок восковой моли содержится известный пептид Antifungal peptide gallerimycin Q8MVY9GALME массой 8400Да (Schuhmann et al, 2003). Данный рекомбинантный пептид активен в отношении энтомопатогенного грибка Metarhizium anisopliae, но не эффективен против дрожжей, граммотрицательных и граммположительных бактерий. Возможно, антибактериальный эффект фракции №8 гемолимфы индуцированных личинок восковой моли был обусловлен пептидами с молекулярной массой 1832 и 4900Да, отсутствующими во фракции №8 гемолимфы интактных личинок.
Бактерицидная активность фракции №10 для Escherichia coli не зависит от наличия индукции (50 и 55%-тов ограничения роста соответственно). А по отношению к Bacillus cereus активность зависит от наличия воздействия и увеличивается после индукции личинок смесью культур Е. coli и В. cereus на 22%-та. Во фракции №10 индуцированных личинок обнаруживаются 6 новых пептидов, часть которых, вероятно, обладают антибактериальным эффектом по отношению к Bacillus cereus.
Антибактериальный эффект фракции №11 гемолимфы личинок восковой моли не зависит от воздействия ни них смесью культур Е. coli и В. cereus, однако фракция №11 гемолимфы индуцированных личинок проявляет большую активность (47 и 22%-та соответственно). На хроматограмме фракции №11 индуцированных личинок наблюдается небольшое увеличение оптического поглощения по сравнению с соответствующей фракцией №11 интактных личинок. Фракция №11 интактной группы личинок содержит Moricin-like peptide С5 A5JSV1GALME (Brown et al, 2008). Moricin-like peptide особенно активны в отношении мицелиальных грибов, предотвращают рост Fusarium graminearum в концентрации 3 мкг/мл, а также активны в отношении дрожжевых грибков, грамположительных и грам отрицательных бактерий.
Исследование антибактериальной активности пептидных компонентов гемолимфы личинок Galleria mellonella, полученных после введения ксенобиотика 1,1-диметилгидразина (гидразон)
Воздействие на клетки бактерий смесью пептидов не всегда выявляет кумулятивный эффект, обнаруживаемых во фракции гемолимфы пептидов. В некоторых случаях уже известные пептиды, обладающие антибактериальным действием, содержатся в гемолимфе как интактных, так и индуцированных личинок, однако антибактериальный эффект может выявляться либо только в группе интактных, либо только у индуцированных личинок восковой моли. Например, во фракции №5 (ВЭЖХ) гемолимфы личинок восковой моли известный антибактериальный пептид с молекулярной массой 1619Да (Q9TWE9 GALME - фрагмент профенолоксидазы (Kopacek et al, 1995)) обнаруживался в гемолимфе и у интактных, и у индуцированных смесью культур Е. coli и В. cereus личинок восковой моли. Однако антибактериальным действием обладала только фракция №5 гемолимфы интактных личинок. Причиной, возможно, является значительное увеличение спектра пептидов в условиях индукции. Вновь появляющиеся в гемолимфе после индукции пептиды могут нивелировать эффект фрагмента профенолоксидазы, оказывая угнетающее действие на превращение профермента в активную форму. Полное отсутствие кумулятивного эффекта, а также исчезновение эффекта задержки роста Е. coli мы наблюдали во фракции №13 (ВЭЖХ) гемолимфы личинок восковой моли, индуцированных смесью культур Е. coli и В. cereus, которая содержала три известных антибактериальных пептида. В гемолимфе интактных личинок фракции №13 содержался только один известный антибактериальный пептид - Lebocin-like anionic peptide 1 LEB1 GALME (4820Да) (Cytrynska et al, 2007) и белковый компонент, подобный фиброину шелка (18088Да), но наблюдалась задержка роста Е. coli на 50%-тов. Обнаруженное явление трудно объяснимо и требует проведения дополнительных исследований.
Антибактериальный эффект пептидных компонентов гемолимфы по личинок восковой моли наблюдался в основном по отношению к Е. coli, причем его можно было обнаружить как в условиях неспецифической индукции (псевдомонады, гидразон), так и специфической (Е. coli и смесь культур Е. coli и В. cereus). Тогда как задержка роста В. cereus появлялась очень редко и была в основном малоэффективна. У интактных личинок восковой моли при разделении гемолимфы методом ВЭЖХ удается обнаружить только одну фракцию, компоненты которой задерживают рост В. cereus на 28%-тов. В составе данной фракции (№3) обнаруживается четыре пептида, один из которых известный (4820Да), а три выявлены впервые и более низкомолекулярные (1480, 1979, 2183Да). Подобная фракция, полученная из гемолимфы личинок восковой моли, индуцированных смесью культур Е. coli и В. cereus теряет антибактериальную активность, несмотря на присутствие во фракции пептида с молекулярной массой 4820Да. При этом в данной фракции обнаруживаются еще четыре пептида, молекулярная масса которых не превышает 2кДа (1064, 1226, 1682, 1845Да). Вероятно, антибактериальное действие фракции №3 гемолимфы интактных личинок восковой моли было обусловлено не Lebocin-like anionic peptide 1 LEB1 GALME (4820Да), а присутствующим в составе фракции одним из трех пептидов или их совместным действием. Косвенным подтверждением данного предположения могут являться результаты бактериостатического действия по отношению к В. cereus фракций №5 и №10 гемолимфы личинок восковой моли, индуцированных смесью культур Е. coli и В. cereus. Несмотря на наличие в их составе, а также в составе соответствующих фракций гемолимфы интактных личинок известных антибактериальных пептидов (1696, 4714 Да), задержка роста В. cereus регистрируется только под воздействием фракций гемолимфы индуцированных личинок. Таким образом, в данном случае антибактериальный эффект обеспечивается ранее неизвестными пептидами, присутствующими в данных фракциях, возможно относящимися к дефензинам, так как они активны в основном против грамположительных бактерий (Lehrer, 1993).
Полученные результаты позволили получить новые сведения об антибактериальном и иммуностимулирующем действии биологически активной добавки «Натуральный экстракт доктора Мухина», также создали перспективу для применения пептидных компонентов гемолимфы личинок восковой моли в составе новых лекарственных средств и добавок.
Возможным эффективным применением смеси пептидов, а также экстрактов гемолимфы Galleria mellonella Larvae пропитка ими различных материалов или внесение в состав различных гелей для наружного прменения. В этом случае полученные новые лекарственные средства обладать как бактериостатическими, так и регенерирующими свойствами.