Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы
2.1. Строение эритроцитарной мембраны 11
2.1.1. Белковый состав эритроцитарной мембраны 11
2.1.2. Липидный состав эритроцитарной мембраны 19
2.1.3. Роль холестерина в мембране эритроцита 21
2.1.4. Возможные изменения липидного состава эритроцитарной мембраны 24
2.1.5. Способы взаимодействия компонентов эритроцитарной мембраны 27
2.2. Виды гемолитического процесса 28
2.3. Механизмы неокислительного гемолиза 29
2.3.1. Механический лизис эритроцитов 29
2.3.2. Термогемолиз эритроцитов 31
2.3.3. Кислотный гемолиз эритроцитов 33
2.3.4. Детергентный лизис эритроцитов 37
2.3.5. Комплементзависимый гемолиз 41
2.4. Характеристика белков плазмы крови, исследованных в качестве регуляторов гемолитического процесса 43
2.4.1. Строение и свойства сывороточного альбумина 44
2.4.2. Строение и свойства СЗ компонента системы комплемента 47
2.4.3. Строение и свойства фибриногена 48
2.4.4. Строение и свойства альфа-2-макроглобулина 50
2.4.5. Строение и свойства липопротеинов плазмы крови 52
2.5. Агрегация эритроцитов 55
3. Материалы и методы исследований
3.1. Аппаратура и реактивы 58
3.2. Получение СЗ компонента комплемента 59
3.2.1. Этапы выделения и очистки компонента СЗ . 59
3.2.2. Получение RC3 63
3.2.3. Методы регистрации гемолитической активности компонента СЗ 63
3.2.4. Микрометод регистрации гемолитической активности компонента С3 64
3.3. Кинетические методы регистрации гемолиза 64
3.3.1. Метод кислотных эритрограмм 64
3.3.2. Регистрация сапонинового гемолиза 65
3.3.3. Определение гемолитической активности комплемента по альтернативному и классическому путям 65
3.4. Трипсинизация эритроцитов 66
3.5. Метод извлечения холестерина из мембраны эритроцитов 66
3.6. Методы статистической обработки 67
4. Результаты и обсуждение
4.1. Влияние белков плазмы крови на процесс сапонин-опосредованного гемолиза 68
4.1.1. Особенности динамики лизиса эритроцитов под действием сапонина 68
4.1.2. Липопротеины плазмы крови как модуляторы сапонинового лизиса эритроцитов 74
4.1.3. Влияние других белков плазмы крови на сапонин-опосредованный гемолиз 77
4.1.4. Сапониновый гемолиз и система комплемента 79
4.2. Влияние белков плазмы крови на протон-опосредованный гемолиз эритроцитов 84
4.2.1. Общая характеристика кислотного гемолиза 84
4.2.2. Воздействие сывороточного альбумина на кислотный гемолиз 86
4.2.3. Влияние липопротеинов плазмы крови на кислотный гемолиз и на эффект его потенцирования альбумином 92
4.2.4. СЗ - компонент комплемента и протон-опосредованный гемолиз 96
4.2.5. Влияние фибриногена и а2- макроглобулина на кислотный гемолиз 102
5. Заключение 104
6. Выводы 108
7. Список литературы 110
- Возможные изменения липидного состава эритроцитарной мембраны
- Строение и свойства сывороточного альбумина
- Этапы выделения и очистки компонента СЗ
- Особенности динамики лизиса эритроцитов под действием сапонина
Возможные изменения липидного состава эритроцитарной мембраны
Авторами [2,44,205] выявлено, что липидный состав эритроцитарной мембраны может изменяться в зависимости от состояния липидного метаболизма организма. Известны патологии, связанные с нарушением липидного обмена, и сопровождающиеся изменением липидного состава мембраны эритроцита (рис.1).
При атеросклерозе нарушение метаболизма липидов вызывает изменение состава и свойств клеточных мембран, что становится фактором снижения механических свойств эритроцитов. Нарушается их способность к деформации и прохождению через микроциркуляторное русло. Считают, что это ведущий механизм в формировании хронической недостаточности мозгового кровообращения [2].
При гиповитаминозе Д отмечается накопление в органах и тканях промежуточных продуктов биосинтеза холестерина. Предполагают также, что витамин Д, химическая структура которого обладает значительным сходством с циклопентанпергидрофенантреновой структурой, способен проникать в мембраны клеток. В работе [44] оценены некоторые свойства эритроцитов при экспериментальном рахите и Д-гиповитаминозе, и, в частности, проведен анализ стеринового состава мембран. Выявлено, что содержание холестерина в мембране эритроцита при рахите увеличивается более чем в два раза по сравнению с нормой, что приводит к увеличению осмотической стойкости и уменьшению мембранной проницаемости.
Увеличение содержания холестерина в мембране эритроцитов наблюдается и при эссенциальной гипертензии, сопровождающейся проявлениями нарушенного метаболизма - гипертриглицеридемией, гиперинсулинемией и ожирением [205].
Начальным этапом патогенеза эссенциальной гипертензии считают повышение периферического сопротивления току крови в артериях, вызванное изменением структуры сосудистой стенки. Полагают, что изменение структуры мембран и активности «клеточных насосов» вызваны нарушением транспорта в клетки насыщенных жирных кислот (ЖК). Происходит блокада активного апоЕ/В-100-рецепторного поглощения клетками ЖК в составе ЛОНП, и поэтому ЖК транспортируются в свободном виде. В мембране насыщенные ЖК формируют локальные участки, через которые начинается неконтролируемый поток Na+ и Са2+ в клетку и К+ из клетки, то есть повышается активность Na+-, К+-АТФазы. Накопление холестерина приводит к ингибированию Ыа+,К+-АТФазу и Са+2-АТФазу. Таким образом, при данной патологии холестерин обеспечивает клетке функцию краткосрочной адаптации [43]. При обтурационной желтухе, характеризующейся низкой активностью ЛХАТ в крови, а также у лиц с врожденной ЛХАТ-недостаточностью, при ос - Р липопротеинемии отмечено увеличение соотношения ХС:ФЛ. Обнаружено накопление холестерина в мембранах эритроцитов больных с ишемической болезнью сердца [26].
Полагают, что одной из основных причин гемолиза, сопровождающего некоторые заболевания, является снижение деформируемости эритроцитов, которая определяется составом мембраны.
Так, умеренная или тяжелая анемия является классическим гематологическим синдромом, сопровождающим течение сепсиса, в связи с чем традиционным является представление о септической анемии как о гемолитической. В работе [41] исследован липидный компонент эритроцитарной мембраны у больных сепсисом. В терминальной фазе заболевания наблюдается резкое увеличение содержания насыщенных и мононенасыщенных жирных кислот с одновременным быстрым падением до патологических величин содержания полиненасыщенных жирных кислот, уменьшение активности Гл-6-ФДГ, СОД, истощение ПОЛ. По мнению авторов, изменение жирнокислотного состава эритроцитарной мембраны, увеличение ее жесткости наряду с падением метаболической активности эритроцита, могут являться причиной гемолиза у больных сепсисом.
Одной из причин анемии при почечной недостаточности также является гемолиз. В работе [1] исследован липидный состав эритроцитарной мембраны при ХПН. Обнаружен высокий уровень лизофосфолипидов, являющихся гемолитическими ядами. Также отмечено увеличение содержания ЭХС, образование которых в мембранах представляет собой один из путей детоксикации или выведения избытка СЖК. Повышение уровня ЭХС существенно увеличивает проницаемость мембраны эритроцитов для одновалентных ионов, что снижает осмотическую стойкость эритроцитов при ХПН. 2.1.5. Способы взаимодействия компонентов эритроцитарной мембраны
Для формирования трехмерной структуры мембраны необходимо наличие связей между белковой сетью цитоскелета, интегральными белками и липидным бислоем. Между ними выявлены [132,134] следующие области фиксации, обеспечивающие жесткость мембраны: спектрин - анкирин - цитоплазматический домен белка полосы 3; спектрин - белок полосы 4.1 - интегральные белки гликофорины С и D; спектрин - аддуцин (кальмодулинсвязующий белок) - молекулы фосфатидилхолина. Вместе с тем механизмы взаимодействия холестерина с фосфолипидами не вполне выяснены. Предполагают, что холестерин встраивается в мембрану так, что его гидроксильная группа взаимодействует с полярной головкой соседнего с ним фосфолипида, кольцевое ядро - с глицериновым остатком и с примыкающей к нему частью жирнокислотной цепи. Нет единого мнения относительно характера связей, участвующих во взаимодействии полярных участков молекул фосфолипида и холестерина. Брокерхоф с соавторами [194] предположил, что существенную роль в связывании играют водородные связи между карбонильными группами жирнокислотных цепей фосфолипидов и лабильным водородным атомом 33- ОН группы холестерина. Подтверждением этому явились опыты с замещением диэфира в фосфатидилхолине диалкиловым аналогом, исключающим образование С=0 "НО- связи. Авторы показали уменьшение проницаемости с добавлением холестерина для диэфира, и отсутствие изменений в проницаемости для диалкила. По-видимому, гидроксильная группа обусловливает необходимую ориентацию молекулы холестерина в бислое.
Строение и свойства сывороточного альбумина
Альбумин является простым белком, состоящим из одной полипептидной цепи. Для него характерно высокое содержание цистеина и заряженных аминокислот. Тем самым достигается высокая плотность отрицательных зарядов на молекуле белка. Большое количество дисульфидных связей формирует в молекуле 9 петель и обеспечивает стабильность белка. Петли образуют повторы триплетов: большая-маленькая-большая. По пространственной организации молекула альбумина представляет собой эллипсоид, состоящий из трех последовательно состоящих доменов, которые напоминают три теннисных мяча в общем футляре [139].
В жестких условиях альбумин способен обратимо изменять свою конформацию. Существует несколько молекулярных форм альбумина. В нейтральной среде белок существует в N-форме («nonnal»), которая при рН 4,0-4,5 переходит в так называемую быструю или F-форму («fast»). Последняя легко преципитируется в ЗМ растворе КС1, содержит уменьшенное количество петель, и характеризуется более вытянутой формой, напоминая три мяча, соединенных ниточками.
При значениях рН ниже 4,0 альбумин приобретает еще более вытянутую («expanded») конформацию (Е-форма) [49]. Она на треть длиннее, чем N-форма. При высоких значениях рН (9 и выше) альбумин существует в В-форме («basic»), которая при длительном хранении белка в таких условиях переходит в А-форму («aged»).
Альбумин чрезвычайно стоек к денатурирующим воздействиям. Он сохраняет нативность в широком диапазоне рН от 2 до 12, в присутствии 8М мочевины или 6М гуанидинхлорида. Альбумин проявляет термоустойчивость, выдерживает нагревание при 60С в течение 12 часов. Устойчивость к денатурации повышается, если альбумин комплексирован с жирными кислотами. При нагревании (60С, рН 7) наблюдается агрегация и преципитация части молекул альбумина, которые не содержат жирных кислот, но те молекулы, которые остались в растворе содержали до 6 молекул жирных кислот и выдерживали нагревание до 78С [50].
Характерной особенностью альбумина является его способность связывать разнообразные биологические молекулы. Ведущей силой ассоциации с лигандами является гидрофобное взаимодействие. Гибкость молекулы позволяет ей подстраиваться к конфигурации разных веществ. При взаимодействии с лигандом изменяется конформация как альбумина, так и лиганда, что может привести к химическим преобразованиям лиганда, т.е. проявлению каталитических свойств альбумина.
Имеется видовая специфичность в степени сродства альбумина к лигандам. Так, только ЧСА и альбумин других приматов связывают гематин. Жирные кислоты сильнее связываются ЧСА, чем БСА. Альбумин обладает высоким сродством к высшим жирным кислотам. Молекула альбумина может максимально связать 6 молекул ЖК, при этом три участка обладают высоким сродством и три низким. Модель ступенчатого присоединения жирных кислот основана на наблюдении о том, что при соотношении альбумин :ЖК 1:1 соответственно, только часть молекул альбумина (43%) связана с единственной ЖК, а другие или совсем не несут ЖК, или связаны с большим количеством молекул лиганда. Если соотношение 2:2, 40% молекул альбумина имеет по 2 молекулы лиганда, а 28% содержат 3, 4 или даже 5 молекул жирных кислот. Это свидетельствует о гетерогенности сайтов [157] связывания ЖК на индивидуальных молекулах альбумина. При изоэлектрофокусировании ЖК медленно отделяются от связывающего их альбумина и появляется пик pi 5,6 , характерный для обезжиренного альбумина; второй пик 4,8 содержит ЖК. С течением времени пик 5,6 увеличивается, а 4,8 уменьшается [52].
ЖК взаимодействуют с альбумином своей центральной частью в области С5-С12 [50]. Модификация карбоксильной группы и концевых углеродов существенно не влияет на связывание. Можно выделить две стадии связывания альбумином ЖК: первая стадия протекает быстро ( 1мс) - сорбция на поверхности альбумина; вторая стадия (0,3 с) - открытие гидрофобного кармана и проникновение гидрофобной части лиганда внутрь молекулы. В этом процессе участвует ионное взаимодействие между карбоксильной группой ЖК и положительно заряженным радикалом альбумина. Присоединение ЖК к альбумину изменяет его физико-химические свойства (диэлектрические, вязкость), изменяется форма молекулы: она становится менее вытянутой (40 х 130 ангстрем). Поскольку циркулирующий альбумин содержит 1-2 ЖК, эта более округлая форма белка является преобладающей. Округлая компактная форма делает альбумин более устойчивым к действию протеиназ и к тепловой денатурации.
Компонент СЗ преобладает над другими белками системы комплемента в количественном отношении. Он состоит из двух неидентичных полипептидных цепей: а-цепь и р-цепь, с молекулярной массой ПОкДа и 75кДа, соответственно. Цепи соединены дисульфидными связями [110]. Характерной особенностью белка является наличие в его а- цепи внутренней тиоэфирной связи между радикалами Glu-988 и Cys-990 [195]. Эта связь при расщеплении в определенных условиях обеспечивает связывание СЗ с поверхностями-мишенями [187]. Кроме того, тиоэфирная связь может быть объектом гидролиза или нуклеофильной атаки со стороны аминов, аммиака и других веществ [156]. Обработка СЗ этими веществами приводит к потере им специфических функций в системе комплемента. Высокая чувствительность СЗ к денатурирующим условиям, вероятно, также обусловлена лабильностью тиоэфирной связи. Прогревание СЗ при 50С приводит к изменениям в молекуле белка, аналогичным тем, которые происходят при обработке ММА [188].
Показано наличие в молекуле СЗ гидрофобных сайтов, которые обеспечивают защиту тиоэфирной связи от действия расщепляющих ее факторов [94]. Анализ интенсивности флуоресценции при 288нм СЗ-компонента, прогретого при 44-46С, свидетельствует о повышении степени гидрофобности белка. То-есть, в этих условиях происходят конформационные изменения белковой молекулы, сопровождающиеся выходом гидрофобных сайтов наружу [196].
Этапы выделения и очистки компонента СЗ
При увеличении концентрации сапонина наблюдалось дозозависимое ускорение гемолиза и реципрокное снижение индукционного периода.
Характер кривой лизиса для каждого из видов исследованных эритроцитов (человека, барана и кролика) был одинаковым. Однако клетки различались по чувствительности к действию сапонина. Наиболее устойчивыми к детергенту оказались эритроциты барана. Заметный лизис этих клеток наблюдался лишь при концентрациях сапонина, превышающих 60-70 мкг/мл. Для индуцирования лизиса эритроцитов кролика и человека было достаточно значительно меньших концентраций сапонина (15-16 мкг/мл). Отличия в чувствительности к сапонину между эритроцитами кролика и человека были незначительны. Различную чувствительность видов эритроцитов к действию сапонина можно объяснить, исходя из результатов, приведенных в работе Bojesen I.N. [58]. В ней проанализированы механизмы связывания и переноса жирных кислот через клеточные мембраны эритроцитов различных видов. Показано, что константа скорости мембранного переноса жирных кислот в эритроцитах барана значительно меньше таковой в эритроцитах человека. Это, очевидно, связано с различиями в составе эритроцитарных мембран. Липидный состав эритроцитарной мембраны у всех млекопитающих характеризуется примерно одинаковым процентным содержанием главных фракций липидов, однако соотношение внутри группы холинсодержащих (сфингомиелин : фосфатидилхолин) варьирует в широких пределах- Так в мембранах эритроцитов человека оно составляет 1:1, барана - 7:1 [119,122]. Известно, что эритроциты барана отличаются высоким содержанием сфингомиелина с большим количеством ненасыщенных жирных кислот (вместо лецитина у человека). Вероятно, это обстоятельство обусловливает низкую поперечную жидкостность липидных участков мембраны эритроцитов барана, что и приводит к замедлению диффузии сквозь нее жирных кислот. Более низкие константы переноса жирных кислот в эритроцитах барана, по мнению авторов [58], подтверждают гипотезу о том, что перенос жирных кислот осуществляется механизмом диффузии через прилегающие к белкам липидные домены, и не требует переносчиков [58]. Жирные кислоты, как и сапонин являются детергентами, следовательно, их действие на мембрану эритроцитов имеет общие механизмы. Поэтому причины различной чувствительности эритроцитов к действию сапонина можно объяснить так же, как и различную чувствительность к действию жирных кислот. Во всяком случае, имеются сведения о том, что при уменьшении количества сфингомиелина в клеточной мембране повышается чувствительность эритроцита к действию желчных кислот, которые также вызывают детергентоподобный лизис [73]. Таким образом, имеется взаимосвязь между уровнем сфингомиелина в мембране и чувствительностью клетки к литическим агентам детергентной природы.
В пользу того, что сапониновый и жирнокислотный гемолиз протекают по одинаковому детергентоподобному механизму, свидетельствуют также результаты наших опытов по исследованию сапонинового лизиса эритроцитов, прогретых при 50С. Известно, что при такой температуре, нарушается первый барьер проницаемости мембраны. Это обусловлено температурной денатурацией спектрина - главного структурного белка мембраны [17]. Состояние спектриновой сети играет ведущую роль в обеспечении стабильности мембраны. Имеются данные, что термоинактивация спектрина дестабилизирует эритроцит и повышает его чувствительность к действию жирных кислот [15]. В серии наших экспериментов (п=5) выявлено, что эритроциты с денатурированным спектрином, (полученные путем инкубации при 50С), оказались более чувствительными к действию сапонина, чем нативные клетки (рис. 6).
Для эритроцитов кролика и человека термоинактивация спектрина приводила к увеличению скорости сапонинового лизиса в 4-5 раз. Для эритроцитов барана также наблюдалось увеличение скорости сапонин-зависимого гемолиза, вызванное денатурацией спектрина. Однако степень ускорения была небольшая (в среднем в полтора раза). Это отличие также можно объяснить особенностями липидного состава мембран у исследованных эритроцитов. Известно, что термостабильность эритроцитов и их устойчивость к действию жирных кислот зависят от содержания сфингомиелина в мембране [17]. Полученные результаты еще раз демонстрируют сходство процессов, происходящих при сапониновом и жирнокислотном гемолизе. Термоинактивация спектрина приводит к ускорению сапонинового лизиса эритроцитов, а это соответствует литературным данным о том, что термоинактивация спектрина увеличивает чувствительность эритроцита к действию жирных кислот [15]. Вместе с тем значительное увеличение скорости сапонинового лизиса после термообработки эритроцитов, свидетельствует о том, что чувствительность эритроцитов к литическому действию сапонина определяется не только липидным составом мембраны, но и состоянием белкового каркаса.
Вместе с тем, сапонин, как гемолитический агент, имеет характерные особенности. Главной из них является то, что повреждающее действие сапонина проявляется только в отношении клеточных мембран, содержащих холестерин. В мембранах клеток грибов основным стериновым компонентом является эргостерин, и такие мембраны устойчивы к действию сапонина [62]. Эритроцитарные мембраны различных млекопитающих незначительно различаются по содержанию холестерина. Однако, при патологических состояниях, у человека уровень холестерина в мембранах может значительно изменяться (рис. 1). Учитывая это обстоятельство, мы решили исследовать параметры сапонин-зависимого лизиса эритроцитов пациентов, для которых характерно нарушение липидного обмена [205,26].
Были исследованы параметры детергентного лизиса эритроцитов контрольной группы людей, и эритроцитов больных ишемической болезнью сердца и эссенциальной гипертензией, для которых характерны изменения структуры эритроцитарной мембраны [205,26]. Результаты исследований отражены в таблице 7.
Особенности динамики лизиса эритроцитов под действием сапонина
Фаза торможения была обусловлена буферными свойствами альбумина, так как при высоких (ингибирующих) концентрациях альбумина происходило повышение рН до 4,0-4,6. В этих условиях молекуле альбумина была присуща уже F-конформация. Вместе с тем, при индуцировании гемолиза глициновым буфером с рН 4,0 альбумин не только не стимулировал гемолиз, но даже оказывал антигемолитическое действие (рис 15).
Следовательно, способностью стимулировать кислотный гемолиз обладает только Е-форма альбумина. При этом активирующим действием в отношении лизиса всех исследованных видов эритроцитов обладал не только человеческий, но и бычий сывороточный альбумин. То есть действие альбумина характеризуется отсутствием видоспецифичности.
Известно, что применяемые в медицинских целях препараты альбумина содержат значительное количество жирных кислот, с которыми белок связан довольно прочно [169]. Мы предположили, что при переходе альбумина из F- в Е-форму происходит освобождение жирных кислот, и к кислотному лизису присоединяется детергентный лизис, обусловленный воздействием жирных кислот на эритроцитарную мембрану. Освобождение жирных кислот из комплексов с альбумином описано при тепловом воздействии на препараты альбумина [50]. Имеются также сведения о зависимости степени связывания жирных кислот с альбумином от кислотности среды [158]. Учитывая эти факты, мы провели исследование влияния двух препаратов БСА на скорость протон-индуцированного лизиса. Препараты отличались разной степенью очистки и поэтому разным содержанием жирных кислот. Во всех экспериментах менее очищенный альбумин с более высокой концентрацией жирных кислот (8" 10_6М) значительно сильнее ускорял кислотный гемолиз. Результаты отличались хорошей воспроизводимостью при работе со всеми видами эритроцитов. Полученные данные свидетельствуют о том, что фактором, обусловливающим ускорение кислотного гемолиза под действием альбумина, является наличие в его составе жирных кислот. Это было подтверждено и в следующей серии экспериментов. Часть высокоочищенного альбумина была "нагружена" пальмитиновой кислотой в молярном соотношении 1:1 и 1:2. Сравнивали активирующий эффект контрольного и "нагруженного" альбумина в отношении кислотного гемолиза. Результаты одного из 5 экспериментов, проведенных с использованием эритроцитов здоровых доноров, приведены на рис.16.
Видно, что активирующий эффект альбумина определялся содержанием в нем жирной кислоты. Наряду с четкой дозозависимостью была отмечена и вариабельность в индивидуальной чувствительности эритроцитов к действию альбумина. Лизис эритроцитов у одних индивидуумов практически не зависел от присутствия высокоочищенного альбумина, а у других оказался существенно ускоренным. Расчет концентраций жирных кислот, достигаемых в инкубационной среде при внесении как очищенного (менее 710"8 М), так и нагруженного альбумина (8 10 6 и 16" 10"6 М), показывает, что даже в случае полного освобождения жирных кислот из комплексов с альбумином, их концентрация не достигает уровня, достаточного для индуцирования детергентного гемолиза. По данным литературы, пальмитиновая кислота вызывает заметный лизис эритроцитов (при рН 7,4) только в концентрациях, превышающих 0,510-4 М [15]. Очевидно, что выявленное нами повышение чувствительности эритроцитов к гемолитическому действию пальмитата объясняется, скорее всего, синергизмом в действии протонов и жирной кислоты как детергента.
Мы попытались заменить жирные кислоты другим природным детергентом - сапонином. Его гемолитическое действие проявляется в концентрациях, превышающих 15 мкг/мл. Нами была выбрана подпороговая концентрация детергента (3 мкг/мл). При таком содержании сапонина в пробе, он не оказывал литического действия на эритроциты даже при длительной инкубации. Однако, введение указанного количества сапонина в инкубационную смесь, содержащую кислотный буфер, приводило к 5-кратному ускорению протон-опосредованного гемолиза. Полученные данные свидетельствовали о сильном потенцировании кислотой действия детергента, чем объяснялось усиление гемолитического действия жирных кислот, освобождаемых с молекулы альбумина при переходе его в Е-форму.
Мы провели также серию опытов по исследованию влияния сывороточного альбумина на кислотный лизис эритроцитов, предварительно прогретых при 50С в течение 30 минут. Как известно, при таком режиме инкубации происходит термоинактивация спектриновой сети мембраны эритроцита [17]. Полученные результаты показали, что чувствительность таких эритроцитов в отношении протон-опосредованного лизиса не претерпевала существенных изменений. Вместе с тем, усиление кислотного лизиса альбумином стало гораздо более выраженным в отношении прогретых эритроцитов. Этот эффект выявлялся для эритроцитов всех видов, но особенно значительным он оказался в опытах с термоинактивированными эритроцитами кролика. Полученные нами результаты явились еще одним подтверждением тому, что активация кислотного лизиса сывороточным альбумином обусловлена именно наличием в нем жирных кислот, так как известно, что денатурация спектрина приводит к повышению чувствительности эритроцитов к лизису, вызванному жирными кислотами [15].
