Введение к работе
Актуальность проблемы. Альбумин и иммуноглобулины являются одними из основных белков крови, принимающих участие в обеспечении важнейших функций организма [Русанов В.М., 2004]. В связи с этим препараты альбумина и иммуноглобулина нашли широкое применение в медицинской практике. Использование альбумина и иммуноглобулина путем введения непосредственно в кровеносное русло предъявляет повышенные требования к безопасности, направленные на предотвращение вирусного инфицирования реципиентов препаратов крови.
Безопасность препаратов крови в отношении социально-значимых вирусов гепатитов В и С, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) хорошо изучена и подтверждена многолетней практикой клинического применения. Однако спектр инфекционных агентов, передающихся через кровь, постоянно расширяется. В настоящее время все большее внимание уделяется парвовирусу В19 (B19V).
Инфицирование B19V представляет опасность для беременных, лиц с иммунодефицитными состояниями и гематологическими заболеваниями, которые являются основными реципиентами крови и ее дериватов. Поражая клетки-предшественники эритроцитов, B19V может вызвать развитие тяжелой анемии и патологии во время беременности [Corcoran A., 2004]. В связи с этим в развитых странах активно ведутся комплексные исследования парвовируса В19, направленные на обеспечение безопасности препаратов крови.
Недостаточная изученность распространенности маркеров B19V среди доноров России, отсутствие знаний о молекулярно-генетических свойствах российских штаммов вируса и возможности их трансмиссии через препараты крови определили актуальность проблемы и явились основанием для проведения настоящего исследования.
Цель работы – комплексное исследование парвовируса В19 при оценке безопасности препаратов альбумина и иммуноглобулина, получаемых из плазмы крови доноров методом спиртового фракционирования.
Задачи исследования:
-
Определить частоту выявления генетических и серологических маркеров B19V в крови доноров.
-
Установить генотип выявленных штаммов B19V с использованием частичного секвенирования генома.
-
Определить частоту контаминации парвовирусом B19 производственных пулов плазмы для фракционирования.
-
Проследить изменение концентрации ДНК B19V и оценить уровень вирусной редукции по стадиям технологического процесса получения препаратов альбумина и иммуноглобулина из плазмы крови методом спиртового фракционирования в модельном эксперименте.
-
Исследовать препараты альбумина и иммуноглобулина, полученные на филиале ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России в г. Нижний Новгород «Нижегородское предприятие по производству бактерийных препаратов «ИмБио», на содержание генетических и серологических маркеров B19V.
Научная новизна работы.
Получены новые данные о распространенности B19V среди доноров.
Впервые в России определены нуклеотидные последовательности NS1/VP1u области генома российских изолятов B19V, которые депонированы в GenBank/EMBL/DDBJ под номерами JQ518457-JQ518464, что расширяет международную базу нуклеотидных последовательностей генома B19V. Установлена принадлежность обнаруженных штаммов B19V к генотипу 1 субтипу 1а.
Впервые в России определена частота контаминации парвовирусом В19 производственных пулов плазмы для фракционирования отечественных производителей препаратов крови.
Впервые показано изменение концентрации ДНК B19V и оценен уровень вирусной редукции по стадиям технологического процесса получения лечебных препаратов альбумина и иммуноглобулина из плазмы крови доноров методом спиртового фракционирования.
Практическая значимость работы.
С участием автора составлены Методические рекомендации «Порядок проведения входного контроля на вирусную безопасность сырья для производства препаратов из плазмы крови доноров» (утверждены и введены в действие приказом директора ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России от 21.07.2011 № 59-ОД).
Результаты, полученные в ходе настоящей работы, могут стать основой для пересмотра стратегии обеспечения вирусной безопасности в плане расширения спектра вирусных маркеров, обязательных для тестирования, не только при производстве препаратов крови, но и в отечественной трансфузионной медицине и Службе Крови России.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Генетические маркеры B19V генотипа 1а выявлены у 1,0% доноров крови.
-
Высокая частота выявления ДНК B19V в производственных пулах плазмы для фракционирования предполагает возможность контаминации готовых препаратов.
-
Спиртовое фракционирование вносит существенный вклад в редукцию B19V, но при отсутствии дополнительных стадий вирусной инактивации/элиминации не гарантирует безопасность препаратов.
-
Исследованные партии препаратов альбумина и иммуноглобулина не содержат B19V, но риск трансмиссии данного патогена через препараты крови должен рассматриваться.
Апробация работы.
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:
VII Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (г. Москва, 2013 г.);
заседании научно-технического совета филиала ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России в г. Нижний Новгород «Нижегородское предприятие по производству бактерийных препаратов «ИмБио»;
заседании Ученого Совета Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной.
Объем и структура диссертации.
Материалы диссертации изложены на 117 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 222 литературных источника, из них 214 – зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 14 рисунками и 6 таблицами.
По результатам диссертации опубликовано 7 печатных работ.
Работа выполнена в рамках научной тематики 06-2 «Обеспечение вирусной безопасности препаратов крови человека» филиала ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России «Нижегородское предприятие по производству бактерийных препаратов «ИмБио».
