Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ. ТЕМЫ. Изучению протеолитических ферментов хроматина и ядерного матрикса в последнее время уделяется достаточно большое внимание. Это связано с тем, . что протеолиз считают одним из факторов регуляции активности генома и структурній перестроек хроматина. Детальное изучение протеаз хроматина способно пролить свет на проблему механизма активации генома.
За последние 20 лет накоплен значительный объем Данных' о протеазах хроматина и - ядерного, матрикса. Выяснены физико-химические характеристики ряда энзимов. Установлено, что протеази хроматина различных организмов проявляют специфичность как в отношении гистонов, так и раз«>шчных негистоновых белков.' Предполагается, что прогеазы хроматина принимают участие, 'в процессинге ряда ферментов. Однако ни в одной из работ _нет данных о получении хотя бы одного протеолитического энзима хроматина в гомогенном состоянии и детальной характеристике его физ'ико-химических свойств. Никто не предпринял попытку подробного анализа протеолитических фермейїб» хроматина как целостного ісомплекса. Практически полйосгші отсутствует информация о протеазах хроматина насекокіа» Ййкей также не ставилось задачи установить коррелящюййу» ззййсййость мекду активностью протеаз в хрома-гюй я какими-либо хозяйственно-полезными признаками гййОїКаг.
В свете вышесказанного, изучеййе протеояйїйчзского комплекса хроматина тутового шелкопряда представляет значительный интерес квк в теоретической* так и в> йрастическом аспектах.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ* Остшсй целью данного игсдадования была детальная характеристике йротеолигиче"Шй& кошяекоов хроматина грены и йедксбтдели&лмюй далей* тутового шелкопряда, выделение . Я характеристика отдельна* еязишв,
-э-
входящих б его состав, и изучение связи активности ферментов в хроматине с хозяйственно-полезными признаками тутового шелкопряда. Для достижения етой цели были поставлены следующие задачи:
I. Выявить спектр протеолитичеоких ферментов, входящих в состав протеолитичеоких комплексов хроматина грены и шелкоотделигельной железы тутового шелкопряда, зависимость их активности от рН среды. . ." .
'а. Изучить характер изменения активности протеаз хроматина грены - в процессе эмбрионального развития, а также протеаз хроматина шелкоогделительной железы - на заключительной стадии личиночного развития тутового шелкопряда.. х
3. Осуществить выделение и очистку ряда ферментов, входящих в состав протеолитического комплекса хроматина тутового велкопряда, причем некоторых из них - до гомогенного или близкого к нему состояния.
А. Охарактеризовать физико-химические свойства и .субстратную специфичность протеаз хроматина тутового шелкопряда. Провести сравнение етих ' свойств с цитоплазматичесними протеазами, имеющими сходный оптимум рН.
5. Изучить связь активности протеаз хроматина тутового шелкопряда с некоторыми хозяйственно-полезными признаками етого насекомого.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. РАБОТЫ, Впервые дана подробная -характеристика протеолитического комплекса хроматина .хозяйственно-полезного насекомого - тутового шелкопряда. Установлена \.его тканевая специфичность. Показано, что изменение активности'' протеаз. хроматина грены в процессе вмбркогенеза коррелирует с такими-существенными "биохимическими процессами, как органогенез и биосинтез нуклеиновых ' кислот, а протеаз хроматина шелкоотделигельной железы в течение пятого личиночного возраста - о процессами ашшіфикзции' генов и усилением интенсивности синтеза белкоз аелкэ. Впервые получен гомогенный- препарат
'" -3-протеазы хроматина шелкоотделигельной железы тутового шелкопряда. Изучены физико-химические свойства и субстратная специфичность втого энзима. Впервые установлена положительная корреляционная зависимость меяду активность» протеаз хроматина и шелконосностыо пород тутового шелкопряда.
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Разработаны оригинальные методики выделения и очистки протеолитических ферментов хроматина. Впервые для етой цели использованы такие современные биохимические методы, как аффинная хроматография и высокоэффективная жидкостная хроматография. Установленная нами положительная корреляционная зависимость между активностью протеаз хроматина грены и шелкоотделительной железы и" шелконосностыо пород тутового шелкопряда позволяет использовать данные об активности протеаз хроматина в качестве анзиматического теста в селекции.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты диссертационной работы докладывались на Международном симпозиуме "Актуальные проблемы мирового шелководства" (Мерефа, 1990, на координационном совещании шелководов стран СНГ (Мерефа,, 1393) и ежегодно - на заседаниях кафедри органической и биологической химии МПГУ им». Ленина (IS89-IS93 г.).
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертащюнной работы опубликовано 3 статьи и тезисы сообщения на Международном симпозиуме "Актуальные проблемы мирового шелководства".
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Работа состоит из введения, овзора литературы, отрезающего современные представления о структуре хроматина и роли' протеолитических ферментов в его состава* описания материалов и методов исследования, 3-х глав, содержащих результаты собственного исследования и их