Введение к работе
Актуальность проблемы
Инфаркт миокарда (ИМ) ежегодно уносит миллионы человеческих жизней. Смертность от ИМ превышает смертность от онкологических и инфекционных заболеваний.
Достоверная и своевременная диагностика ИМ играет важнейшую роль в его терапии. Чем раньше установлен точный диагноз и начато терапевтическое или оперативное лечение больного, тем эффективнее будет дальнейшее лечение и благоприятнее прогноз. В последние годы наиболее достоверным признаком наличия у больного ИМ считается биохимический признак - повышение в кровяном русле концентрации белков-маркеров некроза клеток сердечной мышцы. В 1987 году среди белков-маркеров ИМ появился новый - сердечная форма тропонина I (cTnl), который в настоящее время считается наиболее чувствительным и специфичным маркером этого заболевания. cTnl может быть обнаружен в крови больного уже через 3-5 часов после появления первых признаков заболевания, достигает пиковых значений концентрации в течение 16-20 часов, после чего белок длительное время - б - 8 дней сохраняется в кровотоке. Важно также отметить, что в отличие от других, использовавшихся ранее маркеров ИМ, концентрация сТіїї в крови повышается только в случае развития патологического процесса, связанного с некрозом клеток миокарда.
Несмотря на то, что cTnl как маркер ИМ известен уже более десяти лет, до сих пор остается ряд серьезных вопросов, связаїшьк с его применением в этом качестве в клинической практике. Так, например, концентрация этого белка в одном и том же образце крови, определенная с использованием различных коммерчесюгх диагностических систем, может различаться на порядок и даже более. С нашей точки зрения, эти различия могут быть обусловлены как недостаточным пониманием того, в какой биохимической форме cTnl представлен в кровотоке больного, так и затянувшимся процессом по выработке единого международного иммунологического стандарта этого белка. В данной работе мы предлагаем свои варианты решешм проблемы стандартизации диагностических систем.
Как уже отмечалось ранее, для эффективного лечения больных ИМ особенно важна ранняя постановка диагноза. cTnl, появляющийся в кровотоке больного через 3-5 часов после начала приступа, не может служить для ранней диагностики. В настоящее время с этой целью используются диагностические системы, основанные на детекции в крови миоглобина, также выделяющегося в кровоток из пораженной сердечной мышцы во время ИМ. Повышение концентрации миоглобина в крови может быть обнаружено уже через 1 -1.5 часа после начала приступа, однако отсутствие в организме человека кардиоспецифичной формы, а также высокая концентрация этого белка и скелетной мускулатуре снижают ценность этого биохимического маркера. Недавно для ранней диагностики ИМ было предложено использовать FABP (Fatty Acid Binding Protein - белок, связывающий жирные кислоты). FABP - небольшой цитозольный белок с молекулярной массой 15 kDa - принимает участие во внутриклеточном транспорте жирных кислот. В организме человека известно несколько тканеспецифичных изоформ FABP. Форма, характерная для сердечной мышцы, была обнаружена также и в скелетной мускулатуре, однако в концентрациях в 20 раз меньших, чем в сердце. Это делает FABP существенно более кардиоспецифичным, чем миоглобин, и позволяет предположить, что FABP может быть с большим успехом, чем миоглобин, использован в клинической практике. Однако ввиду того, что FABP является достаточно новым маркером ИМ и только две - три группы исследователей имеют экспериментальные диагностические системы для количественногс определения этого белка в крови больного, накопленный на данный момент клинический материал недостаточен для того, чтобы сделать вывод о преимуществе использование FABP в сравнении с миоглобином. Задачей данной работы являлось созданш диагностической системы для количественного определения FABP и исследованш возможности ее одновременного использования с системой для детекции cTnl прі диагностике ряда заболеваний, связанных с некрозом клеток миокарда.
Цель и задачи работы
- Получение нового поколения моноклональных антител к сердечной форме Тп] специфичных к стабильной части Tnl и узнающих как свободную форму белка, так и cTnl составе тропонинового комплекса.
- Создание на основе полученных антител высокочувствительной диагностической системы для
количественного определения cTnl в крови больных.
Исследование возможности использования тропонинового комплекса в качестве иммунологического стандарта в тропониновых диагностических системах.
Получение моноклональных антител, специфичных к сердечной изоформе FADP.
Разработка диагностической системы для количественного определения FABP в крови больных.
Исследование возможности применения данной системы для диагностики инфаркта миокарда, а также мелкоочагового поражения сердечной мускулатуры у больных с нестабильной стенокардией.
- Исследование возможности использования параллельного тестирования образца крови на
присутствие обоих антигенов для быстрой и достоверной диагностики заболеваний, связанных с
некрозом клеток сердечной мышцы.
Научная новизна
Предложен новый метод иммунизации мышей, позволяющий получить высокоаффиные моноклональные антитела, в равной степени узнающие, как свободную форму сердечного Tnl, так и Tnl в составе тропонинового комплекса.
Показана целесообразность использования полного тропонинового комплекса в качестве иммунологического стандарта для калибрации диагностических систем для количественного определения cTnl в крови.
Показана целесообразность использования одновременного измерения концентраций Tnl и FABP для ранней и достоверной диагностики ИМ и нестабильной стенокардии.
Апробация работы
Результаты исследований были доложены на Съезде Американской Ассоциации Клинической Химии в 1995, 1997 и 1998 годах (Annaliaim, Atlanta и Chicago, USA), на Съезде Европейской Ассоциации Клинической Химии в 1996 и 1997 годах (London, UK и Bazel Switzerland), на конференции "Прикладные аспекты исследований скелетных, сердечных и гладких мышц" (Пущино, 1996) и на конференции "XXVI Nordic Congress of Clinical Chemistry" (Turku, Finland) в 1998 году.
Диссертационная работа была апробирована 15 октября 1998 года і совместном научном семинаре ЦМЭП, ВНЦМДЛ, МНИИМЭ и кафедр биооргаиической химии МГУ им. М.В.Ломоносова.
Публикации
По теме диссертации Ьпублйковайо 12 Печатных работ.
Структура и объем работы