Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты Владыченская Елизавета Александровна

Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты
<
Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты
>

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Владыченская Елизавета Александровна. Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.04 / Владыченская Елизавета Александровна; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова. Биол. фак.].- Москва, 2010.- 108 с.: ил. РГБ ОД, 61 10-3/727

Введение к работе

Актуальность проблемы. Гомоцистеин (ГЦ) является природным метаболитом, который образуется в ходе взаимопревращений метионина и цистеина. Он обнаруживается в крови преимущественно в связанном с цистеином белков состоянии, а также в виде продуктов его спонтанного окисления, главным образом, гомоцистеиновой кислоты (ГЦК). Содержание общего ГЦ в крови грызунов и человека не превышает 15 uM [Seshadri et al., 2002], а повышение его уровня является фактором риска для развития нейродегенеративных заболеваний и деменции [Perry et al, 1995, Seshadri et al., 2002]. В литературе отмечается, что нейротоксический эффект у ГЦК выражен сильнее, чем у ГЦ [Gortz et al, 2004].

Токсическое действие этих соединений не ограничивается нервной тканью - отрицательные эффекты ГЦ и ГЦК описаны на тромбоцитах, гладкомышечной стенке сосудов, нейтрофилах [Болдырев, 2009]. В ряде исследований обнаружено, что мишенью действия ГЦ в мозге могут быть глутаматные рецепторы, в частности, NMDA-рецепторы [Zieminska et al., 2002; Maxpo и соавт., 2004]. Активация NMDA-рецепторов в нейронах инициирует вход кальция внутрь клетки, рост активных форм кислорода (АФК) и, возможно, азота.

Недавно в литературе было описано наличие глутаматных рецепторов не только в нервной ткани, но и в некоторых клетках иммунной системы, в частности, в лимфоцитах [Ganor et al, 2003; Boldyrev et al, 2004; Pacheco et al., 2004; Mashkina et al., 2007]. Какова функция этих рецепторов в иммунокомпетентной системе, и какое значение имеет ГЦ для ее активности, оставалось неизвестным. В то же время, постоянная циркуляция ГЦ в крови в условиях гипергомоцистеинемии делает клетки иммунной системы потенциальной мишенью для этого соединения.

Целью нашей работы явилась характеристика действия ГЦ и ГЦК на лимфоциты крысы.

В работе были поставлены и решены следующие задачи:

  1. Оценить экспрессию глутаматных рецепторов NMD А-класса в лимфоцитах крысы.

  2. Охарактеризовать взаимодействие ГЦ и ГЦК с глутаматными рецепторами на мембране лимфоцитов.

  3. Исследовать влияние ГЦ и ГЦК на уровень внутриклеточного Са и свободных радикалов в лимфоцитах.

  4. Определить преимущественные источники свободных радикалов, образующихся при инкубации лимфоцитов с ГЦ и ГЦК.

  5. Оценить влияние ГЦ и ГЦК на продукцию цитокинов лимфоцитами.

Научная новизна и практическая значимость работы. В работе детально охарактеризован механизм действия ГЦ и ГЦК на иммунокомпетентные клетки. Показано, что при активации NMDA-рецепторов в лимфоцитах крысы происходит увеличение содержания внутриклеточного кальция и следующее за ним увеличение уровня свободных радикалов. Выявлено, что при действии ГЦК на лимфоциты источником свободных радикалов являются НАДФН-оксидаза и NO-синтаза. Показана способность ГЦ и ГЦК регулировать синтез IFN-y и TNF-oc в лимфоцитах крыс. Полученные данные указывают, что в основе токсического действия ГЦ лежит специфическое влияние на иммунную систему, опосредованную глутаматными рецепторами. Проведенные исследования существенно расширяют представления о механизмах взаимодействия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты с лимфоцитами, что существенно для понимания молекулярных механизмов токсичности гомоцистеина.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на научных семинарах кафедры биохимии Биологического факультета МГУ, 29 Annual Meeting of Neurochemical Society of Japan (Japan, Kyoto, 2006); 17th ESN Meeting (Spain, Salamanka, 2007); на XX съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Россия, Москва, 2007); Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов» (Россия, Москва, 2007); Int. Symp. Lipid Peroxidation (Japan, Karuizawa, 2008); Ehrlich II World Conf. Magic Bullets (Germany, Nurnberg, 2008); 7th Int. Conf. on Homocysteine Metabolism (Czech Republic Prague, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из Введения, Обзора литературы, разделов «Материалы и методы», «Результаты», «Обсуждение», «Выводы» и списка цитируемой литературы. Работа содержит 109 страниц машинописного текста, 6 таблиц и 37 рисунков. Список литературы включает 140 отечественных и зарубежных источников.

В работе приняты следующие сокращения:

АФК - активные формы кислорода, ГЦ - гомоцистеин, ГЦК - гомоцистеиновая кислота, НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный, Con А -concanavalin A, D-AP5 - L-(+)-2-Amino-5-phosphonopentainoic acid, DCF -dichlorofluorescein, DCFH2-DA - dichlorofluorescein diacetate, DHR 123 - dihydrorhodamine 123, ELISA - Enzyme-linked immunosorbent assay, FITC - fluoresceine isotiocianate, Fluo-3 AM - 4-(6-Acetoxymethoxy-2,7-dichloro-3-oxo-9-xanthenyl)-4'-methyl-2,2'-(ethylenedioxy)-dianiline-N,N,N',N'-tetraacetic acid tetrakis(acetoxymethyl) ester, IFN-y - interferon gamma, LY 294002 - 2-(4-Morpholinyl)-8-phenyl-4H-l-benzopyran-4-one, MK-801 - (5S,10R)-(-)-5-Methyl-10,ll-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5,10-imine, NMDA - N-methyl-D-aspartic acid, PI - Propidium iodide, PKC - Protein kinase C, TNF-a - tumor necrosis factor.

Похожие диссертации на Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты