Введение к работе
Актуальность проблемы. Репликация ДНК вирусов, бактерий, эукариот является одвоа из основных проблем современной биохимии и молекулярной биологии. Изучение репликации вирусных геномов, и в часшосїи вируса ядерного полиэдроза, актуально как в практическом, гак и в гаорегическом отношении. В теоретическом плане потому, чю это даех возможность моделировав» отдельные этапы эукариот, и, следовательно, изучевие каждой вирусной системы вносит определенный вклад в решение важной проблемы. В практическом отношении nosouy, чю ядерный полиэдроз очень распространенное заболевание среда насекомых. Ему подвержены полезные насекомые, такие как пчёлы, тутовый шезшопряд, и вредные насекомцэ, наносящие огромный ущерб сельскому хозяйству и лесным массивам ( хлопковая совка, плодоаорка, пилильщик, вощинная моль и др.).
В последнее время интерес к изучению бавулозирусов, к которым о та оси іся вирус ядерного, полиздрова, резко возрос, это объясняемся использованием их в качестве бйоивсентицидов для борьбы с насекомыми-вредиззелями, а гакжв в качестве вектора -для широкомасштабного синтеза инородных балков - биологически активных соединений, необходимых в медицине и биологии. Кроме того, результаты исследований бакуловирусов используются для разработки мероприязяй, направленных на защиту полезных насекомых, в частности тутового шелкопряда.
Хлопковая совка привлекав* к себе большое вниманиэ исследователей, тан как являехся серьёзным вредителем многих сельскохозяйственных, культур. Одваао, до настоящего времени многие вопросы , касающиеся биологических и молекулярных основ
репродукции вируса ядерного полиздроза у рода HeUothis и в частности вида Hexiothis annigera ~ хлопковой совки, особенно распространенного на херрихории СССР, ос хаются пока не явными. Ферменхы репликахивного комплекса вообще не изучались. Исследования эвзшологии синааза ДНК очень важвы хак как репликация ДНК, осуществляемая с помощью ДНК лолимераа и других белков репликахивного комплекса, обеспечивает эоспроизводс и о генехк-чесного материала. Процесс репарации, поддерживающий «елосг-носхь с spy Ktypu. генома, хак же свяаав с активностью ДНК поли-иераз. В репродукции цногих ДНК-содержащгес вирусов участвуют реплинахиввые белки насекомого-хозяина. С помощью репдика*ив-ных систем вирусов ножно определить их участие в репликации вирусной ДНК. Для выяснения эаих вопросов рациональный ыеходи-чеоким подходом мпяєїся сравнительное изучен аз кдехочных и вирусных ДНК подимераз. Фермевхы репликаїивного комплекса у наое-вшьк исследованы ещё ведосаагочно. Что касаа±ся сравнихельно-го изучения ДНК подимераз в различных органах и хкавях васено-иых в процессе развития вирусной инфекции,хо до начала наших исследований имелась только одна рабоха Мамедова ( 1987),выполненная ва хухоаш шеднопряде.
Насхоящая работа являеяя сосхзввпй частью исследовании, выполненных даборахориев молекулярной биологии Института зоологии АН ТССР в райках гісесоюзаоа программы 0.74.05. по заданию ГК НІ СИ СССР: "Исследовать вирусный гейш ядерного полиэдроза у хухового шелкопряда.-" ( IS66-I990 гг.) регистрационный номер ОВІ60068563, раздел "Иаучихь вирус ядерного полиэдрозв хлопковой совки", эвяхого лабоовхорвей молекулярной биологии iiicia*yxa зоологии АН ТССР дополнительно в хеме в соохвехсжвии
с Постановлением ЦК КПСС и СМ СССР й 807 от 26 августа IS85 г. "О дальнейшем развитии новых направлений биологии и биотехнологии".
Цель работы. Исследовать чувствительность гусениц хлопковой совки различных возрастов в вирусу ядерного полйздроза. Определить сроки и дозы заражения вирусом ядерного полйздроза с целью получения большого выхода вирусной биомассы с высоким титром вируса. Изучить ДНК пблимеразы гусениц хлопковой совки и динамику их активности в процессе развития вирусной инфекции, а также исследовать ДНК полиаеразы хлопковой совки в период метаморфоза и влияние на них аязибиошка брунеомици-на, индуцирующего резервы хромосомвой ДНК.
Научная новизна и практическое значение работы. Впервыз исследована динамика а'нтивности ДНК полшеразыеС и установлено появление вирусчіндуцируемой ДНК полимеразы в процессе развития вирусаой инфекции в раздичЕых органах'гусениц хлопковой совки, зараненных перорально вирусом ядерного полйздроза. Впервые из куколок хлопковой созки выделены две,-формы ДНК полимеразы < и охарактеризованы некоторыз их свойства. '
Резулыа-гы исследований диссертации используются в лаборатории молекулярной биолоіии Института зоологии АН ТССР для приготовления биомассы вируса ядерного полйздроза хлопковой совки. С целью приготовления вирусного прэпарата.и применения его в качестве биоинсектицида против хлопковой совки на томатах. Материалы диссертации могу і бы*ь использованы в НПО "Век-гор" Мшшедбиопрома СССР и в Среднеазиатском НИИЗР, а также могут бы^ь включены в спецкурс по инфекционным болезням васе-комыхи защите растений в сельскохозяйственных ВУЗах и гехни-
кумах сараны, где чиї-авжся ээя спецкурсы.
Апробация работ Маавриалы диссертации докладывались на ІУ конференции биохимиков Средней Азии и Казахстана (Ашхабад, IS66); Всесоюзной рабочей совецании "Молекулярная биология ДНК содержащих вирусов, имеющих практическое значение для сельского хозяйства и ыедицины (Киев, 1967); ЕГ научао-пракаической конференции молодых ученых и специалистов АН Туркм. ССР, посвященной 70-лэмю великого Октября (Ашхабад, 1967); X съезде Всесоюзного эа юно логического общества (.йнинград, 1989); Отраслевом совещании "Биологические и технологические проблемы создания вирусных препаратов для интегрированной защиты растений (пос. Кольцове Новосибирской обл. 1989 ); Научво-пракшческом и координационном совещании по защита и карантину сельскохозяйственных растений в республиках Средвей Ааии и Южного Казахе зв-на ( Таыауз, Х99І >.
Публикации. По теме диссорїации опубдив-овано б печатных
работ.
Структура и объем диссертации. Работа состой* из введения, обзора литературы, маидической части, результатов исследования, обсуждеаия, выводов и епцека цитируемой литературы. Материал изложен на 155 схравицах машинописного такевв, включая 21 рисунок, І таблицу. Список цигированаой литзрагуры состой і из 74 отечественные и 135 иностранных источников.