Содержание к диссертации
стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1. ОСНОВНЫЕ СВЕДЕНИЯ О МЖБРАН0-СВЯЗАНН0М
АППАРАТЕ ТРАНСЛЯЦИИ ХЛОРОПЛАСТОВ 7
Мембрано-связанные рибосомы хлоропластов 7
Вопрос о продуктах синтеза мембрано-евязанных рибосом 13
Участие цитоплазматической и хлоро-пластной белоксинтезирующих систем в организации внутренних мембран хлоропластов 20
Формирование белоксинтезирущей системы
при дифференцировке пластид 25
1.5. Структурная организация и химический
состав внутренних мембран хлоропластов
в онтогенезе. 30
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 40
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДО ИССЛЕДОВАНИЯ 40
Объект исследования 40
Выделение хлоропластов 40
Получение фракций хлоропластных
мембран 41
Обработка мембран хлоропластов детергентами 42
Обработка мембран хлоропластов ферментными препаратами 42
2.5.1. Обработка мембран хлоропластов
трипсином 42
стр.
Обработка субмембранных фракций хлоропластов рибонуклеазой 42
Обработка субмембранных фракций хлоропластов дезоксирибонуклеазой.. 42
Определение белка и хлорофилла во фракциях мембран хлоропластов 43
Определение РНК во фракциях мембран хлоропластов 43
Включение 4С-аминокислот в белки мембранных фракций хлоропластов 45
Получение надосадочной жідкости 200000s
из хлоропластов гороха 47
2.10.Выделение рибосом из клеток E.coli штамм
MRE-600 47
2.II.Выделение высокомолекулярной РНК из
мембран хлоропластов 48
2.12. Фракционирование РНК в полиакриламидном
геле 48
2.13. Выделение PHKr-маркера из рибосом E.coli
штамм MRE-600 49
2.14. Электронно-микроскопические методы 49
2.15.Используемые реактивы 50
3. РЕЗУЛЬТАТЫ " ЭКСПЕРИМЕНТОВ 51
3.1. Исследование локализации белоксинтезирующего
аппарата, связанного с мембранами зрелых
хлоропластов 51
Выделение и электронно-микроскопическое исследование двух типов мембран хлоропластов 51
Содержание белка и РНК в мембранных фракциях хлоропластов 53
стр.
Белоксинтезиругощая функция двух типов мембран хлоропластов 56
Электронно-микроскопическое исследование мембранных фракций хлоропластов, полученных после обработки детергентами 61
Выделение рибосом из мембранных фракций хлоропластов 66
Электрофоретическое разделение РНК, выделенной из мембран хлоропластов 68
Обсуждение результатов 72
3,2, Исследование белоксшітезирующего аппарата ,
связанного с первичными мембранами хлоро
пластов гороха 77
Выделение из хлоропластов фракции первичных мембран 77
Электронно-микроскопическое исследование изолированных первичных мембран хлоропластов 84
Выделение из первичной мембраны хлоропластов предфрет и их электронно-микроскопическое исследование 91
Исследование химического состава изолированных предфрет 105
Белоксинтезиругощая функция структур, изолированных из первичных мембран хлоропластов 114
3.2.6. Обсуждение результатов 116
ВЫВОДЫ 126
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ 128
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 129
Введение к работе
В общем ходе исследований синтеза белка хлоропластов в настоящее время прослеживаются три основных направления: продолжается изучение особенностей изолированных из хлоропластов компонентов белоксинтезирующей системы; определяется вклад двух геномов (ядерного и пластидного) и двух белоксинтезирующих систем (цитоплазматической и пластидной) в общий фонд белков этих орга-нелл и изучается организация белоксинтезирующего аппарата в тонкой структуре хлоропластов.
Настоящая работа посвящена последнему из перечисленных направлений исследований. Данная проблема возникла в связи с тем, что в хлоропластах за синтез белков ответственны, главным образом, рибосомы, связанные с мембранами. Они входят в гигантские полирибосомы, состоящие из колец, каждое из которых заключено в тилакои-де граны.
Такая структурная организация полирибосом в мембранах хлоропластов свидетельствует о существовании тесной связи белоксинтезирующего аппарата и процессов фотосинтеза и служит указанием на участие локализованных в тилакоидах гран полирибосом в гранообра-зовании.
Прямым подтверждением этого явилось обнаружение в первичных мембранах содержащих полирибосомы кольцевых структур, которые предшествуют тилакоидам гран и поэтому названы предтилакоидами.
В данной работе представлены результаты исследований, направленных на решение двух взаимосвязанных задач :
I. Выявить, существуют ли в хлоропластах полирибосомы, свя-| занные с межгранными ламеллами-фретами.
-.6 г
2. Исследовать белоксинтезирующии аппарат, связанный с первичными мембранами хлоропластов.
Решение этих задач необходимо для выяснения путей регуляции синтеза белка в хлоропластах.
