Введение к работе
Актуальность теки. К адову фундаментальных достдаеккй молекулярной биология последних 15-18 лет относится осознание про-теолйза как особой Форш биологической регуляции {Л. А. Локшила, 1994).
Особенный интерес в атом аспекте представляет изучение системы лизосомалькьпе іпетеинсашс прстеияаз (ЛЩЇ), так как именно им в настоящее время приписывается участие в заключительных этапах синтеза и активация обширного ряда функционально важных белков через иеханкзш ограниченного протеолига (К.Н.Веремеенко, 1985; В.А.Тутельян, 1990; Л.А.Локшина, 1991 и другие).
На сегодняшний день имеются доказательства участия система ЗЩД в осуществлении таких фундаментальных физиологических и па-толоппеских процессов, как перестройка тканей (Н.М.2аякакзя, 1990; 'JL А. Локшина, 1994), воспаление (К* Kunimatsu, 19S0; VJ.Machleldt, 1992; A.Saflna, 1982), .атеросклероз (В.А.Тутельян, 1907; А.В.Васильев, 1990; С.Н.Табагара, 1990) сахарини диабет (Й.В.Иатв9ЄЕа, 1892), иазазиа а ийтэстагщювакие гаокгггественньпе опухолей (Е.А.Козырева, 1984; Г.А.Отлоблина, 19S4; S.Krepela, 1989; R.tisson, 1990).
Последние годы знздзнуются ловьззением интереса к изучению состояния лкзосомалыюго'цдстешювого протеолкза в разнообразных сферах биологии и медицины, обусловленным, в частности, появлением сведений о его вкладе в функционирование системы иммунитета (А.В.Васильев, 1987-1991; O.Gradenhadt, 1В91; C.Rey-Mlilet, 1993; P.Morton, 1995), а таклае в процессы возкккневення и развк-' тик опухолей (Э.А.Дилакян, 1SS4; Q.Sin, 1989). Полная характеристика роли ЛЩІ в этих процессах пека не получена.
В связи с вышеизложенным перспективним представляется иэу-чение состояния ' лизосомалышх цистешювых протеиназ при XpGIiH-ческих лейкозах, характерными признаками которых являются избы-
- о _
точная клоналъкая пролиферация клеток лимфоидного или ыиелоидно-го ряда, сопровождавшаяся выраженным вторичный иммунодефицитом.
В последние годы в этом направлении опубликовано несколько работ (В.С.Былкнюша, 1991; Т.А.Гуреева, 1993; Л. А. Локшина, 1S93), однако их результаты все е^е носят фрагментарный и несколько противоречили характер, в связи с чей нами к было предпринято настоящее исследование.
Цель работы состояла в виявлений состояния активности лизо-ссмаяьшх цистсиновых протеиназ в лейкоцитах и плазме крови при хронических лейкозах и их лечении.
Экспериментальна1! часть включала решение следующих задач:
-
Провести сравнительный анализ распределения суммарной активности лизссомальных цистеиновых. катепсинов В, С и L между двумя основними фракциями лейкоцитов периферической крови в норме.
-
Выявить изменения активности указанных ферментов в раз-Л5Г лнх типах лейкоцитов и плазме крови в динамике развития хро-
нического лимфо- и миелолейкоэа.
3) Дать оценку влиянию традиционной химиотерапии хроничес
ких лейкозов на активность ЛЩІ при данном типе патологии.
Научная новизна. В результате проведения исследований впервые было подробно охарактеризовано состояние активности катепсинов В, С и L в различных фракциях лейкоцитов и плагме крови в норма и при хроническом яимфо- и шелолейкозе. В работе впервые продемонстріфовзна зависимость направленности и выраженности сдвигов активности катепсинов В, С и L от стадии развития хронического лимфолейкг",з и описаны изменения активности указанных >:.-)отеияаз при переходе развернутой клинической стадии хронического ыиелолейкоза в терминальную, охарактеризовано влияние широ-
- з - . ко используемых тродициояых методов химиотерапии хронического лнмфолейкоза (сочетания циклофосфана, вкнкристина и преднизоао-на) и хронического миелолейкоза (ареваратов гидрокеимочепияы) на состояние лизоеомального цистеинового протеолиза в лейкоцитах.
Кроме того, в работе предложен метод сравнительного анализа
степени протеолитической активация катеасина L в нормальных и
лейкозноповрежденных леккоцитах и произведена оценка указанного
параметра. п
Практическая значимость. Предложенная в данной работе модификация метода фракционирования лейкоцитов при хроническом лим-фолейкоае легко осуществима и может быть применена в условиях клинических лабораторий для обследования данной категории больных. Выявленное достоверное различие активности ЛЩІ мезду двумя основными фракциями лейкоцитоз периферической крови в норме указывает из необходимость их й>акцконированиа яри изучении состся-еия протэолига в белых клетках ирови. пря различных заболеваниях.
Ояиегнноэ постепенное снигеяие активности катепсишз В, С и L в лейкоцитах пра прстрессировании хронического лкмфолейкоза может быть использовано в качестве дополнительного метода при определении стадии заболевания. Выявленное резкое возрастание активности катеясика В в лейкоцитах больных хроническим лимфо-лейкозом пря переходе заболевания в термкнальнув стадию может даз» основу кетаду дазздщческого наблвдезиа для своевременного выхаленЕЕ озлокачествжекш процесса.
Ме*од определения степени протеолитической активации катеп-сииа L, примененный, в работе?, может быть цепользозан при проведении научных исследовании по патрхиыки протеолиза.
Результату, полученные в настоящей работе, углубляют представления об участии системы ЛЩІ в процессах опухолевого роста, а
также о возможных механизмах изменения их активности при изучаемой патологии.
Результаты работы внедрены в учебный процесс по курсам биохимии и гематологии, а метод определения степени протеодитичес-кой активации катепсина L - в научные исследования ЦНИЛ Рязанского государственного медицинского университета.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на Всероссийской научно-практической конференции "Аллергия, иммунитет и патология внутренних органов" (Рязань, 1995), а также на заседании Рязанского отделения Всероссийского биохимического общества.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ.
Об'єм и структура работы. Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя, включающего 161 источник. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 17 рисунками.