Введение к работе
Актуальность проблемы. Высокая пато-генность Vibrio choierae ,их широкое географическое распространение .появление вспышек клинически неотличимых от холеры диарейных заболеваний,обусловленных токсигенными холерными вибрионами неизвестного до настоящего времени 0139 сэ-ровара привело в последние годы к обострению' эпидемической ситуации по- холере в мире к ,в частности, в России (Акиев А.К., 1991; Арамович А.С. с соавт., 1S92; Онищенко Г.Г. с соавт., 1994; Карег J., 1994; Mehalanabis D. et al, 1994; Ломов Ю.М. с соавт., 1995).
Состояние и тенденция развития эпидемической ситуации по холере во-всем мире диктует необходимость более глубокого изучения различных аспектов этого заболевания,в том числе и совершенствования специфической профилактики путем создания новых вакцинных препаратов дм пероралыгаго применения (Адамов А?К., 1981; Бюл.ВОЗ, 1991; Король В.В. с соавт., 1992).
В институте "Микроб" конструирование новой 'оральной
вакцины было проведено,исходя из положения,что заболевание
холерой обусловлено комплексом патогенных свойств холерного
вибриона (экзотоксином-холерсгеюм,0-антигеном или эндоток
сином вибрионов,внеклеточными ферментами) и поэтому'в полно
ценной холерной вакцине необходимо присутствие всех извест
ных факторов патогенности вибриона (Джапаридзе М.Н.с сс^вт.;.
1981; 1991). ' .
В настоящем исследования основное вним'аниё уделено од-нэму из , используемых при профилактике холеры антигену -* о-антигену,представляющему липополисахаридобелковый комплекс, который является одним из основных факторов латогекности и иммуногеняости холерного вибриона- и обусловливает возкикнове— ние ряда клинических симптомов при холерной инфекции-(Апол-. лонин А.В. с соавт., і990;Белсв Л.Г., 1394).Кроме того,0-ан-тиген способствует колонизации вибрионов,Принимая участие в адгезии микробов к. эпителиальным клеткам тонкого кишечника . ,'Attridg'e ' S.R. et аІД983; Fuerst j.A. et al,- 1983}.опрёде-іяет серологическую специфичность вибрионов и является мощ--ым иммуногеном,обеспечивающим формирование антибактериаль- ' ;ого иммунитета при холере (.Адамов А.К.,. 1981^ КзМг S. ,1987:..
Тктенко B.M., 193В; Сплина С.Г.. Айманоза О.Я., 1930).
Современная тенденция развития вакцинопрофилактики при холере связана'также с повышением требований к безвредности и чистоте препаратов. Использование ШС ъ составе вакник весьма ограничено из-за высокой токсичности и пирогеннос-ти.поэтому проблема снижения токсичности 0-антигенов остается актуальной (Киселёв П.Н., 1971; Иванои К.К.. 1993).
Многочисленными исследованиями ШС различных микроорганизмов было показано,что ведущая роль в проявлении токсических свойств принадлежит липиду A (Luderits 0. et al, 1985: Raetz C.R.H., 1988) или отдельным компонентам этого липи-да,например, жирным кислотам CNovotny А., 1971).Значительную роль глюкозамща показали Luderitz 0. et ai(1981),Lehman V.et al (1987), Freudenberg M.A.'et al.(1988).
Вопрос снижевия токсичности 0-антигена холерного- вибриона, имеющий первостепенное значение для вакцинопрофилактики. изучен недостаточно,имеются работы по гидролитической деградации ЛПС холерного вибриона (Kabir S., 1987; Gupta R.K. et а1,1992; Голубинский Е.ІЇ. с соавт. ,1992). .
Одновременно актуальной проблемой является дальнейшая разработка.методов-регистрации токсичности антигенных компонентов вакцин in vitro,поскольку токсичность холерных вакцин определяется в основном in vivo по LD50 на белых мышах.
Цель -работы. Разработка эффективных способов детоксикаши эндотоксина холерного вибриона,методов регистрации остаточной токсичности биологических препаратов.
Изучение динамики синтеза,накопления и структуры 0-антигена холерного вибриона-на всех этапах производства холерной химической бивалентной табдетированной вакцины.
Задачи исследования:
1.Разработать методику комплексного контроля снижения токсичности эндотоксинов холерного вибриона in vitro.
2.Изучить различные способы детоксикации эндотоксинов, охарактеризовать антигенные и иммуногенные свойства полученных препаратов с целью отбора наиболее перспективных.
3. Охарактеризовать особенности экспрессии антигенных детерминант звяотокгавна холерного вибриона на всех этапах
производства холерной бивалентной таблетированной вакцины.
4.Изучить эндотоксин нового штамма холерного вибриона 0139 серовара и возможность использования его как компонента холерной вакцины и антигена для получения диагностических препаратов.
Научная новизна.
Разработаны методы контроля токсичности эндотоксина холерного вибриона in vitro путем определения содержания глю-козамина- .цит-лсксической дозы для простейших,на модели аг-' регации тромбоцитов;индуцированной АДФ,коррелирующие с ток-'сичностыэ in vivo для белых мышей.
Установлена перспективность снижения токсичности при сохранения серологических и иммуногенных свойств О-антигена холерного вибриона деэтерификацией аскорбиновой кислотой;которая сопровождается уменьшением показателей трех критериев токсичности iii vitro и коррелирующая с увеличением величины LD<50 Знтигена in vivo.
Впервые изучена динамика накопления С-антигеноз различных штаммов-продуцентов и показана сохранность их эпитопкой структуры на этапах культивирования,выделения,различных способов стерилизации и лиофилизации фракций вакцины.
Впервые- получен 0-антигенный, комплекс нового эпидеми-чески значимого штамма V.cholerae не 01 0139 серовара,.по.химическому составу подобный 0-антигенному компоненту сра2ьной. вакцины из 01 серовара,токсичность.'и иммуно'генность которого соответствуют критериям.отработанным для холерных вакцин РНИПЧІІ "Микроб",и иысокоспецифичняе антисыворотки, к іїему.
Практическая значимость.
Экспериментально обоснована возможность контроля" оста-точ:: эй токсичности 0-антигена холерного вибриона in vitro путем определения содержания в нем глюкозамина, цитотскси<1бс-кий дозы для простейших,ш увеличению агрегации тромбоцитов. Полученная из штаыма 0139 О- антиґенсодепжтауч* фракция может быть использована з качестве компонента холерной химической вакцлны и антигэка для получения специфичсчзких ;лаіу-ноглобулинов.
Материалы- диссертаций использованы При сюставлэнян прс-изБОдстгенггогс регламента на вакцину холернуїі.^-бйьаленїную -
-_ fi -
химическую таблетировадаую (N479-94).
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных итоговых ' научных конференциях института "Микроб" (1992г.,1994г.);Российской научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций" (Сара- , тов,1993);на научной "конференции РНИПЧИ "Микроб",посвященной 100-летию памяти Л.Пастера (Саратов,1995).
Диссертация обсуждена и одобрена на расширенной межлабораторной конференции РНИПЧИ "Микроб".
. Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.
Объем и- структура работы. Диссертация состоит из введения и шести глав,содержащих обзор литературы, описание материалов и методов,результатов собственных исследований,заключения,выводов и библиографического указателя .
Общий объем диссертации 154 страницы.Работа проиллюстрирована 18 таблицами и 9 рисунками.
Библиографический указатель содержит 253 источника,из них 129 зарубежных.-
Основные положения, выносимые н а в а щ и т у:'
-
Альтернативные тесты для определения in vitro остаточной токсичности О-антигена коррелируют с определением токсичности in vivo.-
-
Детоксикация 0-антигена аскорбиновой кислотой сохраняет его серологические и ишуногенные свойства.
-
Данные,характеризующие иммунохимкческие свойства и особенности экспрессии эпитопоб О-антигеноЕ холерных вибрионов в процессе производства холерной химической вакцины.
-
Характеристика О-антигенного комплекса нового штамма холерного вибриона 0139 серовара,который может быть использован в качестве компонента холерной химической вакцины и для приготовления диагностических препаратов.
![Изучение белковых антигенов Helicobacter pylori на основе моноклональных антител [Электронный ресурс]](/i/i/4283/202634.png "Изучение белковых антигенов Helicobacter pylori на основе моноклональных антител [Электронный ресурс] Вечканов Евгений Михайлович")
