Введение к работе
Актуальность проблемы.
Изучение механизмов инициации репликации ДНК является важным, так как регуляция этого процесса определяет такие существенные проявления жизни в норме и патологии, как рост, эмбриогенез, регенерация, канцерогенез. Репликация ДНК хорово изучена у прокариот, поскольку для них известен участок ДНК - origin, на котором осуществляется инициация синтеза ДНК. Несмотря на огромное количество исследования, посвященных проблемам поиска or і репликации и белков - инициаторов репликации, для млекопитающих, пока не удалось однозначно доказать, что проклонированныв потенциальные or і высших эукариот являются or і in vivo. Также мало известно о клеточных белковых Факторах, связывающихся с этими последовательностями. В литературе отсутствуют данные об инициации репликации ДНК млекопитающих и о механизмах, контролирующих этот процесс.
Одним из основных моментов в цепи событий, приводящих к репликации ДНК,является изменение экспрессии некоторых геноь
CFauato, U.r 1984), По-ВИДИКОМУ, НвКОТОрыв ИЗ ЭТИХ ГЄНОВ
кодируют полипептиды, необходимые для инициации репликации ДНК. Для идентификации таких белков и их генов была использована клонотека кДНК з-периода регенерирующей печени крысы.
К настоящему времени имеется только одна работа, опубликованная В 1984 Г- CFrledaan J. et al.,1984), в которой авторы, используя библиотеку кДНК регенерирующей печени крысы, идентифицировали три клона, усиленно экспрессирующиеся в з-периоде, и показали, что они содержат фрагменты кДНК Фибриногена. Показана также усиленная экспрессия в регенерирующей печени нескольких онкогенов, актина и белков "острого ответа".
Таким образом, роль индуцибельных генов в процессах репликации ДНК млекопитающих в настоящее время мало изучена.
Цель работы.
Идентифицировать гены, усиленно экспрессирующиеся в s-периоде регенерирующей печени, и исследовать возможность иг. участия в репликации ДНК. Провести поиск белков, специфически взаимодействующих с or і подобной последовательностью darc і.
.-4-
Научная новизна и практическая ценность работы.
Идентифицированы пять новых клонов кДНК, усиленно экспрессирующихся в регенерирующей печени. Показано, что в составе комплексной формы ДНК-полимеразы а в s-периоде находятся два индуцибельных белка, один из которых обладает ДНК-полимеразноя активностью. Показано, что Фрагмент ДНК, входящий в состав а-полимеразного комплекса из покоящихся гепатоцитов и обладающий способностью к автономной репликации,. содержит участок связывания с Oct-l- белком. Экспрессия Oct-1-белка, как оказалось, резко возрастает непосредственно перед синтезом ДНК в регенерирующей печени крысы.
Структура работы.