Введение к работе
Ант^альность^роблемм. Гемофилия А, наиболее распростра-ненное и тяжелое наследственное заболевание системи гемостаза, привлекает большое внимание' раэличннх исследователе!». В последнее время, благодаря разритиг; методов молекулярно?, биологии, достигнуть! значительные успехи в изучении 'этиологии и патогенеза гемофилии А: выделен и клонирован ген фактора УШ { I.I.Tool* et al , I9?4; J.Gitscher, U.J.Wood , 19??; G.A.Ve-har et al , 1965),.охарактеризована его структура ( A.White, 1959), изучена 'ЭКСГГреССИЯ in vitro .( 1.1.Toole, D.D.Fittman,
1955), природа некоторых, «утаїзій ( J.Gitscher et «і , 1985;
J.Gitscher , I9?S; F.L.Howard , 19"?).
.Однако, в связи с возрастании распространением заболе
вания и учаЗЄПИЄМ случаев СПОКТаННОЙ ГемО^ЛИИ ( S.K.Lovn et al
I9S5; З.С.Баркаган, І95Є; J.Gitscher , І9ЄЄ), недостаточ
ной точностью и надежнзстья сузествугдих методов детекции
кондукторов геко^илии, обусловленной вариабельностью экспрес
сии гена фактора УШ у гетерозигот и нормальних гомозигот
( J.B.Grahaai , 1977; .Ю.Н.Токарев, О.П.Плщ, 1978; Z.Chen ,
І9Є2; И.Б.Снегиреза-Давыден'ко с соавт., 1955), зависимостью"
от возраста и группы крови обследуемых ( b.s.McLellian ,
I98S), остается постоянно актуальной проблема генопрофилакти-
ки гемоймии А, цельэ которой является выявление, жещин-гете-
розиготннх носителей дефектного гена фактора УШ (О.П.Плющ с
соавт., 195в; 3;С.Варкаган, 1988). использование эндонуклеаэ
рестрикции в качестве зондов для детекции і^утаций в геномной
ДНК лредстазляется наиболее перспективным налразлпкием диаг
ностики гетерозиготного носительсгЕа патологического гена
( ±..G.l'udcteriham , 1987; «.L.^enco , I9F7; A.Vonssour;fion , 19(33), но вопрос о иироком применении данных методов в целях генетического консультирования вызывает серьезное сомнения, связанные прежде всего со сложностью их воспроизведения
В УСЛОВИЯХ КЛИНИЧеСКОЙ лаборатории ( K.tt.Lown , G.A.Vehar ,
І9Єо).
Поэтому, до настоящего времени сохраняет свою актуальность поиск биохимических маркеров гемофилии А. Биохимические аспекты патогенеза гемофилии практически не изучены. В этом отноаении особый интерес представляет исследование,ферментов, гени которых локализованы в непосредственной близости от гена {актора УЕ (З.С.Баркаган, І9Я5). Известно, что гени гл^козо-6-:?г,с*атдегидрзгеназьі (Г-с-ФД), U -галактозида-3U, .Joe|оглш;ератки.чазм,
Ць_и_задачи_исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение важнейшего фермента обмена пуринов -гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы (ГФРТ) и уровня адениннуклеотидов тромбоцитов (как биохимического критерия функциональной полноценности тромбоцитов) при гемофилии А и гетерозиготных носителей, определение патогенетической значимости выявленных нарушений и возможности использования полученных данные в комплексе диагностических тестов детекции
- З -гетерозиготного носительства гена гемофилии А. Для решения поставленной гели использовались слечугаие подхопн:
Разработка микрометода и определение активности ГіРТ тромбогитов доноров и больных гемоТилие? А.
Исследование ^ияико-химииеских и кинетических параметров ГЇРТ тромбоцитов в норме и при гемофилии А.
Исследование корреляпионноЯ зависимости между активностью ГЇРТ и содержанием адениннуклеотидов в различных бондах тромбогитов р норме и при гемофилии А.
Определение активности ПРТ и урогкя адениннуклеотидов "пула хранения" тромбоцитов облнгятнъгх гетерозигот по гену гемотилии А, а также огенка разработанинх критериев в комплексе различных диагностических тестов для иленти*икании кондукторов гемофилии Л.
ШїїНїї -i!!.S2E!:2tJ5 Проведено исследование ключевых звеньев метаболизма пуринов в тромбоцитах крови (определение активности Г}РТ и уровня' адениннуклеотидов в различных яомпартаен-тах), изучен ряд *изико-химических и кинетических характеристик Г$РТ тромбоиитов в норме и у больных гемофилией А.
Выявлен биохимический дефект в содержании адениннуклеотидов гранул хранения тромбоцитов при гемофилии А, указывавший на 'гунктаональную неполноценность тромбоцитов при данном заболевании и являтадийся следствием энэимопатии на уровне Фермента пути реутилиэаиии пуринов - ГЗРТ. На основания про-есдсн!лл: исследования представлена новая информация о роля изучаемого Фермента в патогенезе гемофилия А.
Проведено комплексное обследование нескольких семей больных гемофилией А с использованием разработанных биохимических ме-
методов и показана значительная кежсемейная вариабельность исслєдуємих параметров при данной наследственной патологии.
Піактическая_значимость. Разработанный радиохимический микрометзд определения Г5РТ тромбоцитов может быть использован для обследования больных и гетерозиготных носителей как- при гемофилии А, так и при подагре и синдроме Леша-Ниха-на. .Метод определения адениннуклеотидов в' плотных гранулах тромботатов может быть рекомендован для практического здравоохранения, в качестве диагностического теста для выявления функциональной неполноценности тромбоцитов и направленной терапии при гемофилии, а также при различных фордах тромбо-цитопатий.
Предложено использование биохимических методов-(определение активности ГФРТ и содержания адениннуклеотидов "пула хранения" тромбоцитов) в комплексе различных методов детек-. ции гетерозиготних носителей гемофилии А. '...'
*32!Зба!]ия_2аботы состоялась 29 сентября 1939 года на. I межлабораторной конференции 'НИИ биологической и медицинской химии АМН СССР.
Основные положения диссертации, докладывались на Всесоюзен съезде врачей-лаборантов (Таллинн, 1985), У Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1986), Всесоюзном симпозиуме "Актуальные вопросы профилактики наследственных болезней" (Вильнюс, 1986), У Всесоюзном симпозиуме по проблеме "Медицинская энэимология" (Махачкала, IS86), ХУ научной конфёрен^ ции молодщ .ученых ЩМИГПК ИЗ СССР "Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии" (Москва, 1936), ХУІ Республиканской научной конференций могадьк ученых и специалистов ГССР
- 5 -(Вакуриани, 1987), Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы диагностики заболеваний системы крови" (Сухуми, 1980).
« Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ.
2іеМ_2_ІЕїї!Ш!2_Е22т.У« Диссертация состоит из введения, обзора, литературу, методической части, результатов собственных исследований, обсуждения и выводов. Количество страниц 130, рисунков 19, таблиц 23. Список цитируемой литературы включает 202 источника.
Результаты клинико-генеалогического енализа родословных, коагулогического и иммунохкмического методов обследования сз-мзй больных гемофилией А были предоставлены сотрудником Центра гемофилии ВГНЦ И.Б.Снегкревой-Дзвыденко.