Введение к работе
Актуальность исследования Исследование молекулярных механизмов функционирования клеток головного мозга, а также иитегративной деятельности мозга в целом является перспективным направлением современной нейробиологии. Хорошо известно (Edelman G., 1992. г.; Березин В.А., 1994 г.; Штарк М.Б., 1995 г.; Chekhonuv V.P., 1995 г.), что специфические свойства клеток той или иной ткани определяются структурой и функциями характерных для нее белков. Особый интерес вызывают белки, определяющие особенности функций ткани мозга, т.е. нейроспецифичесюде белки (Moore B.W., 1965 г.; Eng L.1971 г.; Bock Е., 1975 г.; Березин В.А., 1986 г.; Полетаев А.Б., 1987 г, Чехонин В.П., 1989 г.; Бурбаева Г.Ш., 1989 г., Warecka К., 1992 г.; Edelman G. 1994 г.). Эти белки вовлечены в метаболические пути, характерные только для нервной ткани, такие как генерация и синаптическая передача, молекулярные механизмы анализа, синтеза и хранения информации, а также процессов обучения и запоминания Кроме того, нейроспецифические белки участвуют в процессах, не являющихся специфичными для ткани мозга, и обеспечивают такие функции как транспортную, ферментативную, ілггоскелетную, модуляторную и т.д Есть основания считать, что НСБ определяют особенности метаболизма ткани мозга его интенсивность, направление, локализацию.
Нейроспецифический белок, известный как 14-3-2 или нейроспецифическая ено-лаза, обнаруженная преимущественно в нейронах (Heran Е.А., 1981 г.), является одним из нейроспецифических белков, функция которого в настоящий момент установлена.
Несмотря на то, что в результате исследования NSE за период более чем в 20 лет накоплен обширный экспериментальный материал, следует признать, что целый ряд как прикладных, так и фундаментальных аспектов в проблеме NSE остаются открытыми. Например, не изучены особенности метаболизма NSE в норме и патологии, вопросы антнтелообразования к NSE и возможной агрессии антител а мозг. Не решен окончательно вопрос о возможности использования NSE и анти-ЫБЕ-антитед в качестве маркера прорыва гематоэнцефалического барьера при нервных и психических заболеваниях, нейроинфекциях, травмах и опухолях головного мозга. Относительно слабо исследованы аспекты эктопического синтеза NSE и возможности этого феномена в целях ранней диагностики опухолевых процессов. Научный и практический интерес вызывает возможность использования специфических aHTH-NSE-антител в качестве вектора для транспортировки в нейроны специальных маркеров или лекарственных препаратов (Carney D.N., 1982 г.; Marangos P.J.. 1982 г.. Jankovich В., 199г; Dauberschirndt R.1991 г.; BaroneF.C, 1993 г.; Bonhomme V.. 1993 г; StieberP., 1993 г.)
Целью настоящего исследования явилась разработка высокочувствительного метода определения NSE и анти-Ы5Е-антитсл і биологических жидкостях больных нервно-психическими заболеваниями в патогенезе которых имеет место нарушение функции ГЭБ, а также исследование роли aurm-NSE-аятител в формировании обшей аутоантителыюй агрессии в мозг.
З&ллчи исследования:
-
Разработать способ получения NSE, позволяющий получать препарат NSE высокой степени гомогенности, необходимой для создания иммунохимических диагнос-тикумов.
-
Разработать и апробировать в клинико-лабораторной практике иммунофер-мектные тест-системы для определения NSE и анги-NSE-aHTHTCj] в биологических жидкостях.
-
Провести иммуноферментный скрининг NSE и анти-№Е-антител в биологических жидкостях больных различными нервно-психическими и соматическими заболеваниями, сопровождающимися нарушением функции гематоэнцефалического барьера.
-
Исследовать феномен прорыва меченых 1231 aHnf-NSE-антител через гемато-экцефалический барьер в направлении кровь-мозг, а также вероятность проникновения антител к нейроспецифическим белкам в мозг при экспериментальном нарушении резистентности гематоэнцефалического барьера.
Научная новизна. Разработан способ получения NSE высокой степени гомогенности из постмортальной ткани мозга человека. На основе этого препарата получены моноспецифические aHTH-NSE-aHTHCbiBopoTKH и гомогенные препараты анти-NSE-антител.
Разработаны высокочувствительные иммуноферментные тест-системы для определения NSE и анти-^Е-антител в биологических жидкостях.
Проведена апробация данных тест-систем на клиническом материале и выработаны рекомендации по их применению при заболеваниях, сопровождающихся нарушением функции гематоэнцефалического барьера
Установлен феномен прорыва NSE и анти-МБЕ-антител через гематоэнцефали-ческий барьер в направлении мозг-кровь при нервно-психических заболеваниях, травмах и опухолях головного мозга
*
Экспериментально установлена возможность проникновения антител к NSE через оврежденный гематоэнцефалический барьер в направлении кровь-мозг, избирательном акоплении антител в ткани мозга, сопровождающихся повреждающим воздействием а клеточные структуры мозга.
Практическая ценность. Иммуноферментные тест-системы для анализа NSE і aHTH-NSE-антятел могут быть использованы в комплексной диагностике и контроле а эффективностью проводимой терапии заболеваний, в патогенезе которых имеет іесто нарушение проницаемости гематоэнцефаличесхого барьера.
Иммуноферментная тест-система для анализа NSE может быть рекомендована для іиагностики, дифференциальной диагностики и контроля за проводимой терапии мел-:оклеточного ража легкого.
Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на «жлабораторных конференциях ГНЦССП им. В.П Сербского (1994-1997 гг.), на 5 яеждународном симпозиуме по направленному транспорту пептидов, белков и генов Лейден, 1995 г.), 20 международном конгрессе по нейропсихофармакологии (Мельбурн, 1996 г.)
Публикации. Материалы диссертации отражены в семи опубликованных <аучных работах.
Структура диссертация.
Диссертация изложена на машинописных страницах и состоит из введения, 6
"лав, в которых приводятся данные обзора литературы,, результаты собственных «следований и обсуждение полученных результатов, а так же выводов и библиографического указателя.
Диссертация иллюстрирована 14 рисунками, 14 таблицами.