Некоторые белки амниотической жидкости в иренатальной диагностике врожденных пороков развития и муковисцидоза плода Кащеева, Татьяна Константиновна

Введение к работе

АКТУАЛЬНОСТІ ТЕШ. На долг; наследственных заболеваний и врожденных пороков развития /ВПР/ nnwvn«»-~; _д„ ПГ.-«»^-/ ^-;;їіі,й детской '-""prr.v.o.n < оря?-тгг-со, Кячяиггг:» Ijjt). ііарувения „а.чмитчг' центральной нервной системы /ЦНС/ составляют более 30% всех врожденных пороков. Одной из наиболее частых причин врожденных аномалий ЦНС является дефекты заражения нервной трубки - ДЗНТ (Лазюк и др..і989). В конце 70-ых годов в ряде стран Западной Европы, а в конце 80-х годов в отдельных регионах нажей страны был начат скрининг беременных по содержанию в сыворотке крови матери зибпиек-гпс-пніическот белка альвафртепрптеана /ЙФП/ для определения группы высокого писка рондения ребенка с врожденными пороками развития /ВПР/ к, прежде :tccro. с ДЗНТ (Гречаника, 1390).

РечаЕКїиу в пренатальной диагностике ВИР и, в частности, ДЛИТ является ультразвуковое скринирование. Однако, эти исследование не всегда является информативным, и в тех случаях, когда с помодьв УЗ исследования не удается выявить причину повывения нФП в крови беременной аенаины, на первое место выдвигается биохимические методы тестирования содержания этого фермента непосредствен!!» в амниотической пидкости /AS/. Диагностическая ценность этого тоста для выявления Ц'ЗШ существенно возрастает, если наряду с ЙФП в AI проводится измерение уровня и спектра изоформ холинзетераз /ХЭ/ и, в первую очередь, ацетилхолинэстеразн /нХЗ/ (Saith at al.. 1979: Chtibb nt al. 1976). Динамика изменения ЙФП в амниотической жидкости, так же как и в сыворотке кропи беременных, даае в норме мозет существенно варьировать и зависимости от срока беременности, состояния плода и ряда индивидуальных особенностей. Количественные характеристики изменений ЙФП в амниотической жидкости при патологии у плода в литературе отсутствуют. Поэтому изучение этих показателей является первоочередной задачей при разработке биохимических подходов в пренатальной диагностике ВПР и особенно, ДЗНТ на ранних сроках беременности.

Наряду с ЙФП и ХЗ важное диагностическое значение имеют исследования в амниотической жидкости комплекса ферментов, продуцируемых микроворсинками кижечника плода /ФМКПУ. Зстановлено (Brock, 1983), что анализ этих ферментов имеет

решающее значение для пренатальной диагностики муковисцидоза /МБ/ - самой распространенной моногенной болезни человека (Капранов, Рачинский, 19Э5). По ориентировочным оценкам ежегодно только в России рождается около 1500-2000 детей с МБ (Капранов, 1992).

С 1383 по 1985 год анализ белков нЕ, таких как
гаммаглутамилтранспептидаза, аминопептидаза и щелочная

фосфатаза, был, по сути, единственным способом пренатальной
диагностики этого тяжелого, часто летального заболевания.
После картирования гена муковисцидоза, его секвенирования и
идентификации мутаций, основными в пренатальной диагностике
стали методы ДНК-анализа. Однако, по опыту Лаборатории
пренатальной диагностики наследственных болезней ИйГ РАМН в
80Z семей высокого риска, обращающихся на пренатальную
диагностику, больной МБ ребенок уже умер, таким образом эти
семьи является неинформативными для непрямой

ЛНК-диагностики. Прямая же ДНК-диагностика путем

идентификации мутаций, согласно нашим данным, возможна только в 60-65% семей (Baranov et al.,1992). Следовательно, и в настоящее время в России биохимическая диагностика муковисцидоза продолжает оставаться весьма актуальной.

ЦЕПЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Целью данной работы является исследование содержания ряда белков в амниотической жидкости на разных сроках беременности в норме и при различных патологических состояниях плода; разработка на этой основе наиболее рациональных критериев пренатальной диагностики врожденных (ДЗНТ) и наследственных (муковисцидоз) пороков развития.

Б соответствии с целью исследования в работе были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать динамику содержания АФП в амниотической жидкости в зависимости от срока беременности в норме и при различных патологических состояниях у плода.

2. Провести качественный и количественный анализ АХЗ в АЇ в норме и при врожденных пороках.

3. Изучить особенности изменения активностей ФМКП в зависимости от срока беременности и состояния плода у пациенток группы высокого риска рождения детей с МБ.

4. Разработать и внедрить автоматизированную систему оценки риска МБ у плода на основе биохимического исследования

- з -ферментов микроворсинок кижечнипа плода вс второк триместре беременности .

впервые получены нормальнее значения дровней альфафстопротенна и ацетилхолинэстеразы в акниотической жидкости женяин разных сроков беременности, проживавших в Северо-Западном регионе России.

впервые в России проведена комплексная оценка количественного содержания АФП и присутствия специфических изоформ ХЗ в акниотической жидкости при различннх врожденных пороках плода.

получены оценки средних значений медиан и дисперсии активностей гаммаглутамилтранспептидазн, аминопептидазы, обвей и кииечной «елочной фосфатази при разных сроках беременности в аиниотической жидкости женжин из группы высокого риска по рождении детей с муковисцидозом.

изучено содержание этих же ферментов при муковисцидозе плода;

выявлена корреляция между активностьв ферментов иикроворсинок кивечника в аиниотической жидкости женвин из группы высокого риска по муковисцидозу и наличием мутации delF508 в гене иуковисцидоза у плода.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Разработаны количественные и качественные критерии для проведения пренатальяой диагностики врожденных пороков развития плода на основе биохимического исследования белков аиниотической жидкости во Н-м триместре беременности.

Результаты диссертационной работы учтены при составлении практических рекомендаций по организации и проведению в навем городе скринирущих программ по оценке содержания ЙФП в сыворотке крови беременных женщин с целью профилактики ДЗНТ у новорожденных. Программы внедрены в практику в Медико-генетическом и Городском Диагностическом Центрах Санкт-Петербурга. Схема обследования беременных с аномально высокими или низкими показателями содержания ЙФП в сыворотке крови передана в женские консультации города.

Отработаны принципы биохимической ПД муковисцидоза во втором триместре беременности. Создана и опробована компьютерная программа оценки риска наличия МБ у плода на основе биохимических исследований ЙІ. Программа содержит базу

- 4 -данных к расчетную часть. База данных позволяет использовать проведенные измерения медиан для каждого срока беременности в качестве отправной точки для начала пренатальной биохимической диагностики МБ в диагностических центрах страны. Расчетная часть содержит таблицу экспертных оценок риска заболевания плода, построенную на основании пятилетнего опыта Лаборатории пренатальной диагностики ИАГ РАИН. Данная программа существенно повышает эффективность и надежность пренатальной диагностики МБ биохимическими методами.

Полученные результаты воили в методические рекомендации по пренатальной диагностике MB, изданные КЗ СССР (1991).

Проведена биохимическая пренатальная диагностика

муковисцидоза в 270 семьях высокого риска и предотвращено рождение 70 больных детей.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ. ВННОСШЕ Ни ЗйЩИТУ:

5. Нормальная изменчивость уровня альфафетопротеина в амниотической жидкости достигает 302, что необходимо учитывать при проведении пренатальной диагностики ВПР у плода.

6. Найдены количественные различия по уровню альфафетопротеина в амниотической жидкости при анэнцефалии, спинномозговой грыже и дефектах передней брюжной стенки плода, что существенно для дифференциальной диагностики соответствующих пороков развития.

7. Доказана четкая корреляция ДЗНТ у плода с наличием специфической изоформы ХЗ в амниотической жидкости; данный тест позволяет с высокой достоверностью дискриминировать зту патологию от ложно-положительных случаев высокого содержания ЙФП в амниотической жидкости.

8. В 902 семей из группы высокого риска по муковисцидозу возможно проведение пренатальной диагностики этого состояния на основании биохимического анализа белков (Л во П-м триместре беременности. Это особенно важно для семей, неинформативных или частично информативных в отношении ДНК-диагностики муковисцидоза.

9. Использование разработанной компьютерной программы оценки риска существенно повыжает надежность и эффективность пренатальной диагностики муковисцидоза биохимическими методами.

10. Выявлена корреляция между активностью ферментов

микроворсинок кивсчника плода в амниотической хидкостк к наличием мутации delF508 в его генотипе.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы докладывались на Всесоюзных и Международных симпозиумах и KOHftpnom;;;:;::: Hrt XIX, XX. XXI и ХХТТ? научных сиспиях НИИАГ и*.!!.0.?тта С1390, И⁴!, 1332. 19S-* >. на Первом (Третьей) Российском съезде медицинских генетиков (1994. Москва). на ежегодней конференции Европейского Общества генетики человека (Бельгия, 1991). По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация содержит следуввие разделы: введение, обзор литература, материала и методы исследований, результаты и обсуждение, виводі;. заключение, список литературы. Работа изложена на страницах мавинописного текста и иллюстрирована 14 таблицами и В рисунками. Список литературы содержит 35 отечественных наименований, к 81 - на иностранном языке.