Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Электроосмотическая ТСХ (обзор литературы) 8
1.1. ТСХ с управляемым потоком подвижной фазы 8
1.2. Открытие электроосмотической планарной хроматографии 10
1.3. Теоретические основы электроосмоса 13
1.4. Развитие электроосмотической ТСХ 16
1.4.1. ЭО-ТСХ на вертикальных пластинках 17
1.4.2. ЭО-ТСХ на горизонтальных пластинках 24
1.4.2.1. ЭО-ТСХ при повышенном давлении подвижной фазы 36
1.4.3. Хроматография на сухих адсорбционных слоях в ТСХ в электрическом поле 38
1.4.4. Общая оценка современного состояния ЭО-ТСХ 41
1.4.5. Перспективы развития ЭО-ТСХ 45
Глава 2. Методика исследования 46
Глава 3 Новый вариант ЭО-ТСХ с использованием пластин с закрытым сорбционным слоем 69
3.1. Обоснование целесообразности реализации нового варианта ЭО-ТСХ...69
3.2. Исследование нового варианта ЭО-ТСХ на пластинах с закрытым сорбционным слоем 73
3.3. Влияние солей электролитов на характеристики удерживания и размывания в ЭО-ТСХ с закрытым слоем 93
3.4. Изучение влияния среднего размера зерен сорбента в адсорбционном слое используемых пластинок на характеристики размывания в ЭО-ТСХ..96
3.5. Применение ЭО-ТСХ для разделения ветеринарных антибиотиков тилозина, реломицина, дезмикозина, продуцируемых культурой Str. fradiae 100
Глава 4. Новый вариант ЭО-ТСХ, основанный на использовании малолетучих растворителей в качестве подвижной фазы 104
4.1. Обоснование возможности применения нового варианта ЭО-ТСХ... 104
4.2. Критерии выбора малолетучих подвижных фаз 106
4.3. Изучение особенностей ЭО-ТСХ при применении малолетучих подвижных фаз 109
4.4 Влияние добавок к подвижной фазе на характеристики разделения в ЭО- ТСХ 117
4.5. Применение ЭО-ТСХ с использованием малолетучих подвижных фаз для разделения нуклеозидов 119
Глава 5. Электроосмотическая тонкослойная круговая хроматография 123
Общие выводы 130
Список литературы 132
Список сокращений 139
- Открытие электроосмотической планарной хроматографии
- Хроматография на сухих адсорбционных слоях в ТСХ в электрическом поле
- Исследование нового варианта ЭО-ТСХ на пластинах с закрытым сорбционным слоем
- Изучение особенностей ЭО-ТСХ при применении малолетучих подвижных фаз
Введение к работе
В настоящее время хроматографические методы активно используются в науке и промышленности, для контроля состояния окружающей среды, медицине, научных исследованиях и т.д. Тонкослойная хроматография (ТСХ), открытая в середине прошлого века Н. А. Измайловым и Н.С. Шрайбер, является одним из наиболее простых и экономичных методов современной хроматографии. Стоимость количественного анализа в ТСХ составляет всего 35% от затрат, необходимых для проведения анализа тех же проб методом колоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии [1]. Поэтому отечественные и зарубежные аналитики уделяют развитию этого метода большое внимание, например, на Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в органической химии» [2], прошедшем в 2002 г. в г. Краснодаре, тонкослойная хроматография используется в 17% докладов, посвященных хроматографии.
Однако современному классическому варианту ТСХ присущи и определённые недостатки, основным среди которых является невысокая скорость движения подвижной фазы вдоль пластинки, которая постепенно уменьшается в ходе анализа.
Для преодоления этого недостатка в последние годы были предложены новые решения, позволяющие ускорить движение подвижной фазы и сделать его более равномерным во времени. Одним из наиболее перспективных направлений, развиваемых в последние годы в ТСХ, является электроосмотическая ТСХ, в которой ускорение движения подвижной фазы основано на использовании явления электроосмоса. Электроосмотическая хроматография была предложена Мулдом и Синжем в статье, опубликованной в 1949 г [3].
Однако в публикациях по электроосмотической ТСХ исследователи отмечают как результат выделения джоулевого тепла в адсорбционном слое интенсивное неконтролируемое испарение летучей подвижной фазы, что имеет своим последствием : во-первых, низкую воспроизводимость хроматографиче-ского процесса и, во-вторых, нередко полное прекращение хроматографическо го процесса из-за полного испарения подвижной фазы на отдельных участках ТСХ пластинки. В ряде публикаций отмечается также движение подвижной фазы на поверхности слоя сорбента, что естественно приводит к резкому дополнительному размыванию хроматографических зон.
Поэтому можно было надеяться, что разработка новых решений в электроосмотической ТСХ, которые позволили бы преодолеть известные недостатки, является несомненно актуальной.
Цели работы
Разработка и исследование следующих новых вариантов электроосмотической ТСХ (ЭО-ТСХ), свободных от известных недостатков разработанных вариантов ЭО-ТСХ:
1. электроосмотическая ТСХ на пластинках с закрытым (например, полиэтиленовой пленкой) сорбционным слоем.
2. электроосмотическая ТСХ с использованием малолетучих подвижных фаз;
3. круговая электроосмотическая ТСХ, характеризующаяся повышенной эффективностью разделения, а также «сжатием» начальных зон;
Научная новизна
Основная научная новизна работы заключается в том, что разработаны принципиально новые методы ЭО-ТСХ, свободные от недостатков известного линейного варианта в ЭО-ТСХ, а также новый вариант круговой электроосмотической ТСХ и изучены основные характеристики предложенных вариантов.
Показано, что применение новых вариантов позволяет повысить скорость движения хроматографических зон (в 2 и более раз по сравнение с традиционной ТСХ), причем одновременно увеличивается и эффективность разделения.
Практическая значимость
Практическая значимость работы заключается в том, что предложены и экспериментально продемонстрированы преимущества следующих новых ва риантов ЭО-ТСХ, основанных на использовании пластинок с закрытым сорб-ционным слоем и применения малолетучих подвижных фаз.
Новые варианты ЭО-ТСХ свободны от следующих принципиальных недостатков известного метода ЭО-ТСХ, затрудняющих его эффективное использование: 1) самопроизвольное прекращение хроматографического процесса в результате улетучивания подвижной фазы и, как следствие, высыхания адсорбционного слоя; 2) накопления подвижной фазы на поверхности слоя сорбента, приводящей к дополнительному размыванию хроматограифческих зон.
Практическая пригодность новых методов показана на примере анализа ряда соединений, представляющих определенный практический интерес: 1) разделения макролидных антибиотиков, 2)нуклеозидов
На защиту выносятся следующие результаты и положения:
Новые варианты ЭО-ТСХ с улучшенными физико-химическими и аналитическими характеристиками:
1) ЭО-ТСХ с закрытым полиэтиленовой пленкой адсорбционным слоем;
2) ЭО-ТСХ с применением малолетучих фаз в качестве подвижной фазы;
3) новый вариант электроосмотической тонкослойной хроматографии - электроосмотическая круговая хроматография, который характеризуется повышенной эффективностью;
4) методики применения новых вариантов электроосмотической тонкослойной хроматографии для разделения сложных органических веществ.
Апробация результатов работы
Основные результаты работы были представлены на 41th International petroleum conference (Bratislava, Slovak Republic,2003); Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хроматографические приборы» (Клязьма, 2004); the 12th International Symposium "Advances and Applications of Chromatography in Industry" (Bratislava, Slovak Republic,2004).
Публикации
Материалы диссертации опубликованы в 6 статьях и 5 тезисах докладов на конференциях и симпозиумах.
Открытие электроосмотической планарной хроматографии
Авторы современных работ по электроосмотической тонкослойной хроматографии [28, 30-40] ссылаются на работу Преториуса с сотрудниками, опубликованную в 1974 году [41], как на основополагающее исследование в этой области. Однако история открытия ЭО-ТСХ представляется нам более сложной и напоминает, по нашему мнению, историю развития метода Цвета.
Вопрос о приоритете открытия электроосмотической планарной хроматографии был затронут редактором журнала «Journal of Chromatography» в примечании к упомянутой выше статье Преториуса [41]. В примечании указывается, что впервые электроосмотический поток был использован при хрома-тографическом анализе Мулдом и Синжем в 1952 г. [42]. Однако, как удалось выяснить, в действительности идея сочетания электроосмотического потока подвижной фазы с хроматографическим процессом возникла еще раньше. Эта идея в 1949 г обсуждалась в беседе трех выдающихся ученых, каждый из которых внес существенный вклад в развитие хроматографии. Это были А. Мартин, А. Тизелиус и Р.Л.М. Синж [3].
Синж сформулировал идею электроосмотической хроматографии следующим образом [43]: «Весьма ценным представляется сочетание методов хроматографии и миграции под действием электрического поля. Одним из очевидных примеров такого совмещения представляется использование электроосмотического движения жидкости через слой геля, обладающего молеку-лярно-ситовыми свойствами».
Этот вариант хроматографического разделения и был реализован позже в работах Мулда и Синжа в 1952 г. [42,43] на примере разделения полисахаридов на полосках мембран из коллодия. Размер полоски 1,3x8,0 см; толщина 1 мм. Полоска помещалась вертикально в цилиндрическую камеру. Нижняя часть камеры заполнялась 0,2 N раствором уксусной кислоты, в который погружался нижний конец полоски и вводился катод. Большая часть полоски заливалась жидким парафином, а верхний ее конец контактировал с раствором уксусной кислоты, в который вводился платиновый анод. В начале опыта в анодное пространство помещалась проба анализируемой смеси полисахаридов, растворенных в уксусной кислоте. После подачи напряжения на электроды (250 В) анолит проникал в полоску. В течение опыта в анодное пространство непрерывно подавался раствор уксусной кислоты. После окончания опыта полоска извлекалась и обрабатывалась раствором (иод+иодистый калий) для проявления зон разделенных компонентов полисахаридов. Авторы приводят таблицу Rf полисахаридов для четырех полосок из мембран, различающихся радиусом пор (от 8 до 530 мкм). Скорость электроомотического потока измерялась по скорости перемещения фруктозы (10% водный раствор которого непрерывно подавался в анодное пространство).
Таким образом, в работах Мулда и Синжа [42,43] впервые был предложен и реализован метод электроосмотической эксклюзионной тонкослойной хроматографии (гель-фильтрации). Сами авторы предложенного метода использовали для его обозначения следующее название «электрокинетический ультрафильтрационный анализ»
Работа Преториуса фактически явилась повторным открытием электроосмотической хроматографии; она появилась через 23 года после публикации статьи Мулда и Синжа. В этой работе [41] на примере разделения 4-х компонентной смеси (пирен, андрост-4-ен-3,17-дион, 6-тестостерон, андростен-3(3-173-диол) (см. рис.1.1.), было показано, что предложенный метод позволяет в 15 раз сократить продолжительность анализа: от 60 минут для обычной ТСХ до 4-х минут при использовании электрического поля напряженностью 2 кВ/см.
Методика эксперимента описана в статье Преториуса и сотр. [41] очень кратко. Преториус использовал пластинки с силикагелем Кизельгур 60 F254 фирмы «Merck», предварительно силанизированные путем обработки 5%-ным раствором диметилдихлорсилана. Опыты проводили в вертикальной камере, конструкция ее не описана, указано только, что с верхней части пластинки накапливающийся растворитель отсасывался. Разделение 4-х стероидов на предварительно смоченных пластинках происходило в 15 раз быстрее при наложении внешнего электрического поля, чем при помощи традиционной ТСХ.
Наиболее важным результатом этой работы явилось открытие метода электроосмотической капиллярной хроматографии, который начал быстро развиваться. За последнее время опубликовано более 800 работ, относящихся к этому методу. Судьба же ЭО-ТСХ оказалась более трудной - прошло еще более 20 лет, после того как Преториус показал возможности ЭО-ТСХ до появления современных исследований в этой области.
Электроосмос был открыт Ф.Ф. Рейсом в 1809 г. [44], который заметил движение жидкости в трубке, заполненной кварцевым песком, под влиянием приложенного электрического поля. Как известно, электроосмос - течение жидкости в капиллярах и пористых телах, вызванное внешним электрическим полем [27]. Важную роль в возникновении электроосмоса играет двойной электрический слой (ДЭС), который формируется у поверхности раздела фаз жидкость -твердое тело. Рассматривая эту межфазную границу, примем, что на поверхности твердого тела адсорбированы отрицательные ионы, которые «закреплены» неподвижно. Положительные ионы образуют широкую диффузную часть ДЭС. Основной характеристикой ДЭС является дзета-потенциал ( -потенциал), величина которого показана на рис. 1.2. Скорость электроосмотического потока пропорциональна градиенту напряжения прикладываемого электрического поля [45, 46].
Рассмотрим образование ДЭС более подробно. При контакте с жидкостью на поверхности твердого тела возникает избыток заряда определенного знака и формируется потенциалобразующий слой ионов; ионы в этом слое закреплены неподвижно. Возникновение этого слоя происходит в результате адсорбции ионов, способных достраивать кристаллическую решетку и/или диссоциации поверхностных групп. К твердой поверхности из жидкой среды притягиваются ионы, знак которых противоположен знаку по-тенциалобразующего слоя. Часть противоионов непосредственно примыкает к потенциалобразующему слою и образует адсорбционный слой. Положение ионов в этом слое фиксировано.
Хроматография на сухих адсорбционных слоях в ТСХ в электрическом поле
В 1997-1998 году на 9-ом и 10-ом международных симпозиумах по инструментальной планарной хроматографии были представлены сообщения Малиновской и Рожило [51, 52] по электрохроматографии на «сухих» слоях си-ликагеля и окиси алюминия. Метод впервые описан в работе [53]. Это направление развивалось в последующих работах Малиновской и Рожило [54-59]. Авторы изучали влияние внешнего электрического поля на поведение и свойства компонентов хроматографической системы (сорбент - сорбат - подвижная фаза) в условиях традиционной ТСХ - растворитель движется по сухому слою сорбента, в основном под действием капиллярных сил, а не электроосмоса. При этом был изучен и такой вариант, при котором электрическое поле направлено перпендикулярно по отношению к направлению потока подвижной фазы.
Устройство камеры для сухого слоя (рис 1.20.) аналогично описанной выше горизонтальной камере для пластинок, смоченных растворителем. Отличие состоит в том, что электроды помещаются не в растворитель, а устанавливаются по концам пластинки, так чтобы они не имели контакта с подвижной фазой (для предотвращения образования газовых пузырьков и поляризации электродов). В качестве материала электродов использовали серебро.
Поскольку растворитель подается на оба края пластинки, в одном опыте получается две хроматограммы - на анодной и катодной стороне. Размеры пластинок 20x10 см. Опыт заканчивали, когда на любой из хроматограмм перемещение компонента с максимальным Rf не превышало 10 см. направление движения подвижной фазы
КамеВ работе [56] Рожило и Малиновская исследовали влияние горизонтального электрического поля на удерживание (Rf) полициклических ароматических углеводородов и производных хинолина при использовании в качестве адсорбента силикагеля или окиси алюминия. Наибольший эффект наблюдается при хроматографировании хинолинов в присутствии полярных подвижных фаз - метилэтилкетон, этилацетат. Значения Rf для хроматографируемых соединений максимальны для анодной стороны, несколько ниже в отсутствии поля, и минимальны для катодной стороны. В присутствии неполярных растворителей внешнее поле практически не оказывает эффекта.
Скорость движения растворителя на пластинке с силикагелем при повышении напряжения с 18 до 24 кВ повышается примерно в 2 раза на анодной стороне и снижается на катодной.
Изучено влияние градиента электрического поля (1,75 кВ/см) на скорость миграции бинарных растворителей, содержащих тетрахлорметан и в качестве второго компонента неполярный (гептан) или полярный (метиэтилкетон, этилацетат) растворитель [57]. В этой работе было также показано, что для неполярных растворителей скорость движения фронта растворителя практически не изменяется при наложении потенциала, а в полярных растворителях повышается на анодной стороне в два раза. Следует отметить, что на катодной стороне скорость движения фронта подвижной фазы в большинстве случаев ниже, чем на анодной.
Полученные результаты, в основном, согласуются с теорией. На сухих пластинках растворитель движется главным образом под действием капиллярных сил. В неполярных растворителях С, -потенциал близок к нулю, поэтому электроосмотический поток не возникает. В полярных растворителях такой поток может возникать обычно в направлении от анода к катоду. При этом на анодной стороне его направление совпадает с потоком под действием капиллярных сил, а на катодной стороне эти потоки направлены в противоположную сторону.
В работе [54] показано, что под действием электрического поля может происходить изменение формы пиков и их площадь. Для изученных веществ (дифенил, фенантрен, метилхинолин и др.) полученные результаты неоднозначны. Симметрия пиков и их площадь зависят как от природы соединения, так и от неподвижной фазы и типа сорбента. Хроматограммы, полученные для данного вещества, на анодной и катодной стороне пластинки различаются по форме. В некоторых случаях появляются дополнительные пики, происхождение которых остается неясным (рис. 1.18.).
Интересно, что при действии «вертикального» электрического ПОЛЯ (10 кВ) величины Rf изученных соединений несколько снижаются, но этот эффект сохраняется и после выключения напряжения, т.о. проявляется так называемый «эффект памяти» [54].
Исследование нового варианта ЭО-ТСХ на пластинах с закрытым сорбционным слоем
Приведенные в этой таблице результаты свидетельствуют о том, что реализовать ЭО-ТСХ на пластинках с открытым сорбционным слоем невозможно, если используемое напряжение, подаваемое на противоположные края пластинки, составляет 3-4 кВ или превышает этот предел. Воспроизводимые результаты были получены только на пластинках, адсорбционный слой на которых был закрыт полиэтиленовой пленкой.
Для исследования закономерностей хроматографического процесса нового варианта ЭО-ТСХ с закрытым полиэтиленовой пленкой адсорбционным слоем (по сравнению с также закрытым адсорбционным слоем в традиционной ТСХ) были использованы следующие различные по электропроводности и теплоте испарения относительно летучие подвижные фазы - ацетонитрил (Ткип = 81,6С, АНисп = 32,8 кДж/моль) и этанол (Ткип. = 78,4С, ДНисп = 38,74 кДж/моль).
Основные результаты по изменению скоростей движения зон и размыванию красителей на пластинках «Сорбфил ПТСХ-П-В-УФ» при использовании в качестве подвижной фазы этанола приведены в таблицах 3.4.-3.5. и в таблицах 3.6-3.7. на пластинках «Kieselgel-40» . Для сравнения были проведены эксперименты в условиях обычной ТСХ как с открытым слоем, так и с закрытым слоем.
ЭО-ТСХ позволяет регулировать скорость перемещения, время анализа по сравнению с традиционной ТСХ можно уменьшить на порядок.
Так в условиях ТСХ с закрытым порядок зон по увеличению удерживания выглядит следующим образом родамин С (К=0,39)-родамин Ж (Rf=0,19) -бриллиантовый зеленый (Rf=0,ll) (с открытым слоем соответственно 0,43; 0,20; 0,10), для ЭО-ТСХ родамин Ж- бриллиантовый зеленый - родамин С, т.е. родамин В имеет наибольшую подвижность. Однако порядок движения не меняется при изменении прикладываемого напряжения. Следует предположить, что для родамина С и бриллиантового зеленого некоторый вклад в составляющие скорости вносит электрофоретический эффект, так как данные соединения является ионными. Сопоставим данные для одного из сорбатов, например, для родамина С. При прикладываемом напряжении 1 кВ скорость будет равной 0,38 мм/мин. Такая же скорость наблюдается для данного сорбата в условиях традиционной ТСХ. При увеличении прикладываемого напряжения происходит увеличение скорости движения зоны родамина С с 2,3 раза (2 кВ) до 6,2 раз (3 кВ) по сравнению с ТСХ с закрытым слоем. Наибольшее увеличение скорости наблюдается для бриллиантового зеленого (более чем в 10 раз). Следовательно, использование высоких напряжений (порядка 2 кВ и выше) актуально для увеличения экспрессности. В условиях ЭО-ТСХ с открытым слоем сорбента разделение веществ было невозможно из-за нестабильности процесса.
Важно отметить, что скорость увеличивается нелинейно прикладываемому напряжению, что не согласуется с уравнением Смолуховского, в котором скорость прямо пропорциональная напряжению. Однако Говард и сотр. в одной из своих статей [36] показали, что скорость движения этанола возрастает приблизительно линейно с ростом напряжения. Так для родамина Ж средняя скорость движения зоны составляла при напряжении 1 кВ 0,70 мм/с, при 2 кВ -1, 58 мм/с, при 3 кВ - 4, 39 мм/с или в относительных величинах 1: 2,25: 6,27. При увеличении напряжения до 2 кВ скорость увеличивается в 2,25 раза, а при увеличении до 3 кВ в 2,78 раза. средней скорости родамина С от приложенного напряжения
Линейный график, изображенный на данной диаграмме представляет собой линейную зависимость согласно уравнению Смолуховского. Зависимость, полученная Говардом [36] имеет более высокий коэффициент корре-ляции линейной функции ( R =0,94). Пересечение с осью 0Х (напряжений) происходит не в точке «0», а в точке около 1 кВ, как для зависимости, полученной Говардом [36], так и в данной работе. Отличие от линейной зависимости происходит в связи с двумя факторами: 1) изменением силы тока в ходе эксперимента, причем неравномерно в зависимости от прикладываемого напряжения.
Изучение особенностей ЭО-ТСХ при применении малолетучих подвижных фаз
До настоящего времени в электроосмотической тонкослойной хроматографии (ЭО-ТСХ), в качестве подвижной фазы использовались только два органических растворителя - этанол и ацетонитрил или их смеси с водой. Поэтому расширение круга подвижных фаз в ЭО-ТСХ весьма актуально Существенным недостатком изученных подвижных фаз является их летучесть. Неизбежно нагревание сорбционного слоя в результате прохождения электрического тока через слой жидкой подвижной фазы, и, как следствие, интенсификация процесса испарения традиционно используемых летучих жидких фаз вплоть до образования сухих областей на пластинке и прерывание потока, в результате чего прекращается процесс электроосмотической хроматографии.
Отличительной особенностью ТСХ является то, что в хроматографиче-ской системе присутствует газовая фаза. Нидервизер и Хоннегер [95] предложили рассматривать хроматографию в тонком слое как процесс, протекающий в 3-х фазной системе газ-жидкость-твердое тело. Данное высказывание основано на том, что присутствие газовой паровой фазы оказывает значительное влияние на результаты хроматографирования, хотя не участвует в транспорте и распределении разделяемых веществ. В результате получить воспроизводимые результаты разделения сложно из-за постоянного изменения условий разделения во времени и трудности их повторного воспроизведения вследствие обменного взаимодействия, происходящего между газовой фазой, жидкой фазой и сорбентом на пластинке.
При использовании малолетучих фаз можно проводить разделение в режиме традиционной ТСХ в стабильных условиях, когда влияние паровой фазы на хроматографический процесс отсутствует [96,97].
В ходе проведения ЭО-ТСХ происходит нагревание пластинки за счет выделения Джоулевого тепла, что впервые было описано Ковальчуком для электрофореза на бумаге [98,99]. Однако данный эффект в определенном интервале температур играет в случае использования малолетучих подвижных фаз положительную роль. При повышении температуры подвижной фазы уменьшается вязкости жидкости, что приводит к увеличению скорости процесса. Сильное нагревание малолетучего растворителя может привести к нарушению стационарного режима.
Следует отметить некоторые особенности хроматограмм с малолетучими подвижными фазами. После окончания разделения и извлечения пластинки из хроматографической камеры происходит дополнительное размывание пятен за счет молекулярной диффузии. Так в работе [97] отмечено, что при обработке хроматограмм через 20 часов после разделения наблюдалось размывание зоны сорбата Судана красного (82% при использовании деканола и 203% для гекса-нола. Таким образом, обнаружение хроматографических зон и количественное определение в ТСХ с малолетучими жидкостями следует проводить непосредственно после разделения, чтобы избежать искажения хроматограмм. Однако, в случае необходимости, хроматографируемую пластинку с малолетучей подвижной фазой можно хранить в холодильной камере ниже температуры плавления подвижной фазы.
При анализе термостабильных веществ может быть проведено испарение малолетучей подвижной фазы путем нагревания пластинки, например, на термостоле. В этом случае не следует использовать сушильный шкаф, так как требуется отведение паров испаряющейся подвижной фазы. Для того, чтобы оценить размывание пятна в процессе сушки, сразу после проведения эксперимента была проведена оценка зоны с неудаленной малолетучей фазой и после испарения малолетучей фазы на термостоле УСП-1. Измерения проводились на пластинках с силикагелем «Merck 60». В качестве подвижной фазы был использован ДМСО. Размер зон сорбата регистрировали непосредственно после разделения, и после сушки пластинки (в течение 30 мин при температуре 120С).
Полноту высушивания пластинки контролировали визуально. Относительное увеличение зоны в продольном направлении (у) хроматографируемых соединений после сушки пластинки составило 0,7% для родамина Ж и 1,4% для кристаллического фиолетового (в продольном направлении измеряется ВЭТТ). Относительное увеличение зоны красителей существенно ниже доверительного интервала определения размера зоны красителя после проведения хромато-графического эксперимента, который составлял 4% и 3% для родамина Ж и кристаллического фиолетового, соответственно.
Кроме того, как показали Альт и Секели [100], для термолабильных веществ, малолетучая фаза может быть удалена из слоя сорбента при нагревании в вакууме. Основные критерии пригодности растворителей при их применении в ЭО-ТСХ вытекают из уравнения Смолуховского (1) для скорости электроосмотического потока. Из уравнения следует, что при переходе от одного растворителя к другому скорость потока изменяется пропорционально диэлектрической постоянной и обратно пропорционально вязкости. Дзета-потенциал зависит сложным образом, как от состава подвижной фазы так и от природы поверхности сорбента. Для неполярных жидкостей дзета-потенциал равен нулю. На практике значение дзета-потенциала можно изменять в широких пределах, вводя в состав подвижной фазы добавки электролитов (в частности, буферных смесей). Для индивидуальных растворителей (без электролитов) определяющими являются значения диэлектрической проницаемости и вязкости. Для изученных подвижных фаз - этанола и ацетонитрила значения диэлектрической проницаемости є(25С) равны 24,3 и 36,2, а вязкости Г (25С) - 1,08 мПа с и 0,345 мПа с, соответственно. Помимо основных критериев при выборе растворителей учитывались общие требования - химическая инертность, доступность и экологические требования. В приведенной таблице дан перечень растворителей, которые были испытаны в качестве подвижных фаз. Первые члены этого ряда - пропионитрил и (3,Р-оксидипропионитрил (ОДПН) являются аналогами ацетонитрила. Показана возможность применения для ЭО-ТСХ М,Ы-диалкиламидов: N,N-диметилформамида (ДМФА), К,М-диметилацетамида (ДМАА), циклического амида К-метил-2-пирролидона, а также диметилсульфоксида (ДМСО). Температуры кипения этих растворителей на 70 и более градусов выше температуры кипения известных подвижных фаз, использованных ранее в ЭО-ТСХ.