Содержание к диссертации
Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА I. ХИМИЧЕСКИЕ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФЕНАЗЕПАМА 9
1.1. Синтез феназепама, его метаболитов, их химические и физико-химические свойства 9
1.2. Фармакологические свойства феназепама 13
ГЛАВА 2. МЕТАБОЛИЗМ И КИНЕТИКА РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕНАЗЕПАМА 16
2.1. Основные пути биохимической трансформации феназепама в организме экспериментальных животных 16
2.2. Метаболизм 5-бром-2-хлор-2-аминобензофенона 19
2.3. Распределение феназепама и его метаболитов в тканях и органах различных видов животных. 22
ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ОКИСЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВ НА ЦЕЛОСТНОМ ОРГАНИЗМЕ,И30ЛИР0ВАННЫХ КЛЕТКАХ И МИКРОСОМАХ . 27
3.1. Целостный организм 27
3.2. Изолированные гепатоциты 29
3.3. Микросомы 33
РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ГЛАВА 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 38
4.1. Методы исследования окисления феназепама, проводимые на целостном организме 38
4.2. Выделение субклеточных фракций из гомогената печени крыс и мышей 39
4.3. Методика и выделения изолированных гепатоцитов белых крыс 41
4.4. Методы определения активности ферментов окисления ксенобиотиков микросомной
фракции печени крыс 42
4.4.1. Активность НАДШ-цитохром Р-450-редуктазы 43
4.4.2. Определение содержания цитохрома 43
4.4.3. Определение содержания цитохрома Р-450 43
4.4.4. -Гидроксилазная активность 44
4.4.5. Деметилирующая активность 44
4.4.6. Глюкозо-6-фосфатная активность 44
4.4.7. Определение содержания ДіК и FHK 45
4.4.8. Дыхательная активность микросом 45
4.5. Спектральные изменения комплекса цитохрома Р-450 с феназепамом и 3-оксиметаболитом 47
4.6. Постановка опытов 47
4.7. Определение феназепама и его метаболитов в постинкубационных жидкостях и в продуктах экскреции (аналитические методы определения) 48
4.8. Математическая обработка 51
4.8.1. Регрессионный анализ 51
4.8.2. Оптимизация метода экскреции С-феназепама и его метаболитов из гомогенатов печени крыс 52
4.8.3. Дисперсионный анализ 54
4.8.4. Особый вариант двухфакторного дисперсионного комплекса (достоверность различий двух рядов регрессии) 56
4.8.5. Расчет электронной плотности молекул
I,4-бенздиазепинов 57
ГЛАВА 5. ВЫВЕДЕНИЕ ФЕНАЗЕПАМА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ ИЗ ОРГАНИЗМА РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ 58
5.1. Метаболизм и экскреция феназепама у кроликов 59
5.2. Экскреция феназепама и его метаболитов у
диких норок 64
5.3. Метаболизм феназепама в организме кур 67
ГЛАВА 6. ОКИСЛЕНИЕ ФЕНАЗЕПАМА В ИЗОЖРОВАННЫХ ГЕПАТОЩТАХ БЕЛЫХ КРЫС 79
6.1. Распределение феназепама и его метаболитов в субклеточных фракциях гепатоцитов крысмышей 91
ГЛАВА 7. ОКИСЛЕНИЕ ФЕНАЗЕШША МИКРОСОМАМИ ПЕЧЕНИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ 100
7.1. Метаболизм феназепама в микросомах печени экспериментальных животных 100
7.2. Ферментативная кинетика окисления феназепама монооксигеназами микросом печени животных 106
7.3. Механизмы реакций окисления феназепама в биологических мембранах 123
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 136
ВЫВОДЫ 140
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 141
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 142
- Синтез феназепама, его метаболитов, их химические и физико-химические свойства
- Основные пути биохимической трансформации феназепама в организме экспериментальных животных
- Целостный организм
- Методы исследования окисления феназепама, проводимые на целостном организме
- Метаболизм и экскреция феназепама у кроликов
Введение к работе
Коммунистическая партия и Советское правительство уделяют огромное внимание развитию здравоохранения и медицины, с целью дальнейшего улучшения благосостояния советских людей, улучшения условий их труда и быта. В многочисленных материалах съездов и пленумов указывается на необходимость углубления исследований в области молекулярной биологии, физиологии, биохимических основ жизнедеятельности человеческого организма для ускорения решения важнейших медико-биологических проблем борьбы с сердечно-сосудистыми, онкологическими, эндокринными, вирусными и профессиональными заболеваниями, болезнями центральной нервной системы. Одним из средств для решения этих неотложных задач является создание новых высокоэффективных лекарственных препаратов, позволяющих предупреждать и лечить ряд заболеваний.
В наш век - век научно-технического прогресса и большого притока информации - возросли нагрузки на центральную нервную систему, что привело к увеличению числа заболеваний или же увеличению числа эмоционально-стрессовых перегрузок, сопровождаемых страхом, тревогой, напряженностью, раздражительностью, нарушением сна.
Наиболее распространенным средством лечения таких неврозо-подобных состояний является использование транквилизаторов бенз-диазепинового ряда. К числу наиболее распространенных представителей этого ряда относятся седуксен, нитразепам, оксазепам, медазепам, хлоразепам, лоразепам и др.
В Советском Союзе со средины 70-х годов ведется активный поиск новых транквилизаторов бенздиазепинового ряда в Одесском госуниверситете и Физико-химическом институте АН УССР. Этот - б - поиск увенчался успехом. Так, под руководством академика АН УССР, доктора химических наук, профессора Богатского А.В. был синтезирован первый отечественный препарат - 7-бром-5-хлор(фенил)-1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-он, названный по международным правилам феназепамом.
Фармакологические свойства феназепама были изучены Ю.И.Вих-ляевым и Т.А.Ворониной в Научно-исследовательском институте фармакологии под руководством академика АМН СССР В.В.Закусова.
В ходе исследований феназепам показал себя высокоактивным транквилизатором с ярко выраженным противосудорожным и гипносе-дативным действием и по всем параметрам превосходящим большинство других зарубежных препаратов.
Изучение фармакологического действия феназепама в клиниках показало его высокую активность при лечении неврозоподобных состояний, сопровождаемых чувством страха, тревоги, напряжения, раздражительности и нарушениях сна. Кроме этого, феназапам оказался эффективным средством в анастизиологии, благодаря потенцирующему действию на наркотические анальгетики, а также средством обшей анестезиологии при подготовке больных к хирургическим операциям и при лечении алкогольной абстиненции.
Эти качества феназепама позволили внедрить его в широкую медицинскую практику в лечебных заведениях нашей страны. Так, решением Фармакологического Комитета МЗ СССР от 12 октября
1976 года феназепам рекомендован для широкого применения в ме дицинской практике.
Приказом Министра здравоохранения СССР № 966 от 10 ноября года утверждено внедрение феназепама в медицинскую практику и промышленное производство, которое осушествлено на опытном заводе Физико-химического института АН УССР. В сентябре года феназепам поступил для реализации в аптечную сеть. _ 7 -
Значительная часть исследований по метаболизму, фармако-кинетике, распределению феназепама и его метаболитов в организме экспериментальных животных была проведена в нашей лаборатории доктором биологических наук Н.Я.Головенко и старшим научным сотрудником В.Г.Зиньковским.
Благодаря этим исследованиям был изучен метаболизм феназепама в организме экспериментальных животных (крыс и мышей) и установлена структура образующихся метаболитов, причем оказалось, что процессы окисления препарата различаются у данных видов животных. Распределение метаболитов феназепама в органах и тканях в значительное мере зависело от характера метаболизма. Изучение кинетики выведения феназепама и его метаболитов позволило установить двухфазный линейный характер этих процессов, с преимущественным образованием глюкуронконъюгированных метаболитов. При длительном выведении препарата возрастала роль экскреции с желчью свободных метаболитов феназепама.
Разработанные в ходе исследований методы выделения, очистки, идентификации и количественного определения продуктов биотрансформации феназепама, математические методы анализа и моделирования фармакокинетических процессов, а также обнаруженные закономерности фармакодинамики у различных видов экспериментальных животных и в различных условиях эксперимента, несомненно, имеют важное практическое значение, поскольку могут быть использованы непосредственно в клинических испытаниях препаратов данного класса на человеке.
Однако, несмотря на высокую информативность и прикладное значение имеющихся результатов, оставался неисследованным ряд принципиально важных вопросов, касающихся механизмов ферментативного окисления феназепама. В частности, не установлены причины межвидовых различий биотрансформации данного препарата, ха- рактер и кинетические свойства монооксигеназ, окисляющих фена-зепам. Осталась незатронутой проблема возможного воздействия на окислительные ферменты индукторами и ингибиторами монооксигеназ с целью ускорения их метаболизма или пролонгирования действия данного препарата. Кроме этого, значительный интерес представляет изучение механизмов реакций окисления феназепама на различных уровнях организации биологических систем, поскольку вопрос о возможности сопоставления результатов, полученных в опытах на целостном организме, клеточных системах и субклеточных фракциях имеет практическое значение.
Учитывая все это, нами были поставлены следующие задачи:
Исследовать межвидовые особенности биотрансформации феназепама на целостном организме, изолированных гепатоцитах и микросомах.
Изучить распределение феназепама и его метаболитов в субклеточных фракциях гепатоцитов экспериментальных животных.
Охарактеризовать свойства ферментных систем, катализирующих окисление феназепама в гепатоцитах различных видов экспериментальных животных.
Исследовать процессы взаимодействия феназепама с моноокси-геназами микросом, характеризующие механизмы окисления препарата.
Приношу глубокую благодарность академику АН УССР А.В.Бо-гатскому за научное консультирование по данной работе и доктору биологических наук Н.Я.Головенко за руководство данной работой.
Также хочу поблагодарить кандидата химических наук Л.Н.Якубовскую за любезно предоставленный С-феназепам и его метаболиты.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Синтез феназепама, его метаболитов, их химические и физико-химические свойства
Первый отечественный транквилизатор - феназепам (7-бром-5-(орто-хлор)фенил-І,2-дигидро-ЗН-І,4-бенздиазепин-2-он) является представителем конденсированных гетероциклических систем, относящихся к классу 1,4-бенздиазепинов, состоящих из ароматического ядра (А) и 1,4-диазепинового кольца (Б), содержащего в 5-м положении арильный заместитель с атомом хлора в орто-положении.
Для изучения биотрансформации феназепама в мембранах эндо-плазматического ретикулума печени экспериментальных животных был синтезирован 2- С-феназепам конденсацией 5-бром-2-хлор-2-амино-бензофенона с хлоргидратом хлорагидрида глицина, меченого изотопом С по карбонильной группе [78] . Также были синтезированы предполагаемые метаболиты феназепама - 3-оксифеназепам и хина-золин-2-он [іб8
3-оксифеназепам - основной метаболит биотрансформации 1,4-бенздиазепинов был синтезирован по методу [ IJ , включающему в себя ряд последовательных реакций с получением N-окиси. N-окись образует при действии уксусного альдегида 3-ацетокси-производное, которое превращается в 3-оксифеназепам под действием щелочи.
Хиназолин-2-он - продукт сужения гетерокольца 1,4-бенздиа-зепинов, синтезируется при сплавлении 2-аминобензофенона с мочевиной [ I ] .
По своим физико-химическим свойствам феназепам представляет собой белый кристаллический порошок, практически нерастворимый в воде, что является характерным для большинства 1,4-бенздиазе-пинов, не содержащих в качестве заместителей гидрофильных групп (-С00Н, -NHr ). Растворимость феназепама в этиловом спирте (96%) составляет 1:330, а в хлороформе - 1:30. Столь низкая растворимость феназепама в этих растворителях объясняется наличием в молекуле каждого протонсодержаших групп, склонных к образованию водородных связей или сольватации анионных соединений. Хорошо растворим феназепам в апротонных растворителях (диметилформамид, диметилсульфоксид), которые имеют довольно высокие диэлектрические проницаемости.
Феназепам обладает высокой температурой плавления (225-230С), что объясняется его способностью образовывать за счет водородных связей циклические димеры. Образование циклических димеров характерно для 1-незамешенных производных 1,4-бенздиазепинов [21] .
Основные пути биохимической трансформации феназепама в организме экспериментальных животных
Метаболизм феназепама изучен в нашей лаборатории [іб, 29) и в Институте фармакологии АМН СССР 3б, 37j .В этих работах исследовались продукты экскреции крыс и мышей, которьм вводили 2-С-феназепам.
Радиохроматографический анализ хлороформных экстрактов позволил обнаружить, по крайней мере, четыре пика радиоактивности. Определение их структуры методами УФ-, ИК-спектроскопии, ШР- и масс-спектрометрии показало, что у мышей, кроме исходного соединения (I), образуются продукты окисления гетерокольца - 3-окси-метаболит (П), хиназолин-2-он (Ш), метаболит, содержащий гидро-кси-группу в одном из ароматических колец (ІУ) и неидентифици-рованный метаболит (У). Аналогичные метаболиты были обнаружены у крыс (за исключением - Ш).
Для установления структуры метаболитов ІУ и У животным вводили Н-феназепам, а полученные из мочи метаболиты подвергали
гидролизу до бензофенонов. Физико-химическими методами было установлено, что в соединении ІУ гидроксильная группа локализована в 6-м положении хлорфенильного кольца. Метаболит У оказался не гомогенным соединением, смесью трех веществ, в которых гид-роксигруппа локализована в 9-м положении бромзамещенного ядра (УП), в 3-м положении хлорфенильного кольца (У) и с гидроксиль-ной группой в 4-м и 5-м положении соответственно (УП).
Исходя из полученных результатов, метаболизм феназепама в организме крыс? и мышей был представлен следующей схемой:
Кроме указанных метаболитов,, находящихся в свободном состоянии в моче и кале, также присутствовали, в количествах значительно превышающих свободную форму, глюкуроновые конъюгаты II и ІУ-УІІ..
При длительном введении феназепама крысам на фоне уменьшения количества глюкуронидов происходит уменьшение количества сс&-держания водорастворимых метаболитов, которые не гидролизуются ( -глюкуронидазой и не экстрагируются хлороформом.
Характерной особенностью, отличающей метаболизм феназепама мышей от наблюдаемого у крыс, является различие в направлении реакций окисления феназепама. Так, у крыс феназепам предпочтительнее окисляется по ароматическим ядрам, в то время как у мышей - в направлении окисления гетерокольца, с образованием 3-ок-симетаболита и хиназолин-2-она. У данных видов животных экскреция метаболитов феназепама также осуществляется с различной скоростью. Так, в течение суток у крыс с мочой выделяется 42 % суммарной радиоактивности, а у мышей - 31,1 %.
ИССЛЕДОВАНИЕ ОКИСЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВ НА ЦЕЛОСТНОМ ОРГАНИЗМЕ,И30ЛИР0ВАННЫХ КЛЕТКАХ И МИКРОСОМАХ .
ИССЛЕДОВАНИЕ ОКИСЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВ НА ЦЕЛОСТНОМ ОРГАНИЗМЕ,И30ЛИР0ВАННЫХ КЛЕТКАХ И МИКРОСОМАХ .
Исследование окисления лекарств m vivo включает в себя установление продуктов метаболизма препарата в экскрементах экспериментальных животных. Благодаря таким исследованиям, были определены пути метаболизма многих транквилизаторов бенздиазепи-нового ряда, наиболее распространенными из которых являются диазепам ГЮЗ, 152, 161] , хлордиазэпоксид [121] , оксазепам [67] , флуразепам [l04, 162] , бромазепам [157, 170] , нитра-зепам 7] , лоразепам J60] и многие другие.
Количественная оценка метаболитов и продуктов конъюгации из мочи и кала позволяет на основании скорости выведения препарата судить о времени полувыведения данного препарата и установить фармакокинетичёские параметры [39, 40] . Количественное соотношение метаболитов будет указывать на функциональную активность соответствующих ферментных систем данного вида или генетической линии животных, выявляя их особенности [69, 70, 72] . При этом характер образовавшихся метаболитов позволяет установить тип превращения, которому подвергается данный препарат и сделать предварительное заключение о ферментах или ферментных системах, катализирующих этот процесс [103, 160, 163] .
Особую ценность приобретает исследование интенсивности метаболизма m vivo при различных патологических состояниях организма. Так, оказалось, что инфекция вирусным гепатитом значительно повышает метаболизм ДЦТ у уток, снижая его токсичность
154 , в то время как при инфицировании мышей микобактериями наблюдалось снижение биотрансформации, что проявлялось в удлинении сна животных при введении фенобарбитала и кетамина [85] . Также было показано снижение метаболической активности печени при паренхиматозных заболеваниях у людей для хлордиазэпоксида [24] и у алкогольных больных - для антипирина ІІ49І .
В конечном итоге, изучение окисления лекарств на целостном организме позволяет сделать заключение о конечных этапах и процессах, которым подвергается молекула лекарства, независимо от органов или тканей, ферментов, осуществляющих биотрансформацию. Однако, здесь невозможно учесть влияние различных факторов, участвующих в промежуточных стадиях окисления и определить их вклад в конечный этап метаболизма лекарства.
Методы исследования окисления феназепама, проводимые на целостном организме
С-феназепам вводили кроликам в твиновой эмульсии внутри-брюшинно в дозе I мг/кг, а дикие норки и цыплята-бройлеры получали препарат с пищей в дозе 0,5-1 мг/кг и 3 мг/кг соответственно. Животные содержались в специальных камерах, приспособленных для сбора продуктов экскреции.
Для изучения конечных продуктов окисления феназепама проводился отбор мочи и кала (помета) экспериментальных животных в течение 24 и 48 часов. Образцы кала (помета) высушивали в вакуумном сушильном шкафу при 60С, после чего растирали в фарфоровой ступке до пылеобразного состояния. Образцы мочи и кала подвергали экстракции для извлечения и определения метаболитов феназепама (4,8).
В зависимости от постановки задачи проводилось выделение субклеточных фракций (ядра, митохондрии, микросомы, цитозоль) из гомогенатов печени животных.
С этой целью животных декапитировали, печень промывали изотоническим раствором сахарозы (0,25 М), содержащем 40 мМ буфер трис-НСІ рН 7,4.
Навеску печени I г гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе с фторопластовым пестиком в среде выделения (9 мл) в течение I мин. Гомогенат центрифугировали 3 мин при 600$ в центрифуге ЦЛР-І для удаления обломков плазматических мембран и. соединительной ткани.
Фракцию ядер выделяли по методу [НО] , для чего надосадоч-ную жидкость, полученную после удаления обломков мембран, центрифугировали при 600( в течение 10 мин (0-4С). Надосадочную жидкость сливали, а осадок, содержащий ядра и неразрушенные клетки, дважды промывали в среде выделения. Промытый осадок суспендировали в сахарозе с конечным объемом 2,5 мл и обозначали как ядерную фракцию. Полученные по этому методу ядра содержали неразрушенных клеток и 5 % митохондрий.
Фракцию митохондрий получали дифференциальным центрифугированием при температуре 0-4С [iio] . Надосадочную жидкость, полученную после осаждения ядерной фракции, центрифугировали в течение 20 мин при 12000$ . Супернатант сливали, а осадок дважды промывали 0,25 М сахарозой по 5 мл с целью удаления части растворимых белков и подвергали повторному центрифугированию при 9000$ в течение 10 мин. Чистоту фракции контролировали с помощью ферментного теста с использованием в качестве ферментного индикатора сукцинатдегидрогеназы, активность которой определяли в суспензии митохондрий по методу [l7l] .
Качество митохондрий также оценивали по дыхательной активности, где скорость дыхания митохондрий измеряли амперометричес-ким методом, с помощью закрытого электрода Кларка [43, 46 ] .
В экспериментах, когда микросомная фракция использовалась для изучения метаболизма и кинетики окисления феназепама, печень животных промывалась холодной смесью 0,25 М сахарозы, приготовленной на 50 мМ буфере трис-HCI рН 7,4. Гомогенат центрифугировали на центрифуге К-24 (ГДР) при 9000$ . Надосадочную жидкость подвергали дальнейшему центрифугированию при 105000$ 60 мин на центрифуге ВАК-602 или " Ехгск Ф" (США).
Метаболизм и экскреция феназепама у кроликов
Для исследования биотрансформации феназепама у кроликов, животным, массой 1,0-1,5 кг вводили внутрибрюшинно феназепам 14 С (І) в твиновой эмульсии. Мочу и кал отбирали через 24 и 48 часов и подвергали обработке для проведения качественного и количественного анализа образующихся продуктов (4.3).
Анализ радиохроматограмм хлороформных экстрактов свободных метаболитов мочи показал (рис. I, А), что в организме кроликов препарат подвергается реакциям окисления гетерокольца, в ходе которых образуется 3-оксиметаболит (П) , продукт сужения гетерокольца - хиназолин-2-он (Ш) и сумма продуктов ароматического гидроксилирования, обозначенная как (ІУ). Наличие реакции сужения гетерокольца указывает на высокую интенсивность процессов окисления гетерокольца и делает метаболизм феназепама у кроликов, в качественном отношении сходным с наблюдаемым у мышей.
Радиохроматограммы хлороформных экстрактов кала кроликов показали (рис. I, Б) наличие трех пиков радиоактивности, соответствующие метаболитам I, 11 и ІУ. Отсутствие пика Ш (хиназолин-2-он) объясняется трудностью его обнаружения и извлечения вследствие небольшого растягивания пика II и ІУ. Этому способствует большое количество коэкстрактивных веществ растительного происхождения, присутствующих в кале кроликов. Эти вещества не удается полностью отделить длительной отмывкой в обратном токе четы реххлористого углерода.
На радиохроматограммах хлороформных экстрактов, полученных после обработки мочи в-глгакуронидазой отмечаются пики радиоактивности, соответствующие гидроксиметаболитам П и ІУ (рис. I, В), что аналогично радиохроматограммам глюкуронидов у крыс и мышей, для которых характерно высокое содержание конъюгатов этого типа.
Радиохроматограммы хлороформных экстрактов мочи кролика, обработанных арилсульфатазой (рис. I, Г) показали, что метаболиты П и ІУ также образуют серные конъюгаты.
Количественный анализ продуктов экскреции феназепама и его метаболитов с мочой и калом показал (табл. 4, 5), что в течение 48 часов из организма животных выделяется 15.92 % введенной дозы препарата, что в 4 раза меньше, чем у крыс и в 4,8 раза меньше, чем у мышей за данный интервал времени. При этом экстракция с мочой в 6,5 раз превышает экскрецию с калом. Это отличает кроликов от крыс и мышей, у которых отношение эффективности выведения этими путями равна соответственно 1,6 и 1,75. Следовательно, у кроликов феназепам и его метаболиты в большей степени выводятся с мочой, чем с калом.
Для сравнения эффективности процессов экскреции в целом и для каждого метаболита в отдельности расчет количества метаболитов представлен в % выведенной радиоактивности.
Так, на долю свободных метаболитов (табл. 4), экскретирую-шихся с мочой, за 48 часов приходится 22,41 % обшей радиоактивности. При этом метаболита ІУ выводится 11,96 %9 Ш - 6,79 %9 П- 1,83 % и I - 1,83%. С калом выводится свободных метаболитов 9,32 %, из которых на долю метаболита ІУ приходится 3,1 %, П - 2,07 % и I - 4,11 %.
Значительные количества метаболитов ароматического гидро-ксилирования в моче и кале указывают на их большую водорастворимость по сравнению с I, П и Ш.
Рассматривая процесс глюкуроновой конъюгации гидроксилиро-ванных метаболитов феназепама (табл. 5), отмечается его большая роль в выведении этих продуктов. Так, глюкурониды составили 22,21 % общего радиоактивного материала, выведенного за 48 часов. При этом в первые сутки они выделяются в большем количестве, чем во вторые. Характерным для образования глюкуронидов является то, что глюкуроновая кислота предпочтительнее присоединяется к третьему углеродному атому, чем к гидроксильным группам ароматических ядер феназепама. Так, у кроликов глюкуронида П образуется в 3,7 раза больше, чем глюкуронида ІУ.