Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пасько Надежда Валериевна

Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров
<
Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Пасько Надежда Валериевна. Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04 / Пасько Надежда Валериевна; [Место защиты: Всерос. науч.-исслед. ветеринар. ин-т патологии, фармакологии и терапии].- Воронеж, 2009.- 144 с.: ил. РГБ ОД, 61 09-3/759

Содержание к диссертации

Введение

1. Обзор литературы ' 10

1.1. Пероксидное окисление липидов и системы его регуляции 10

1.1.1. Пероксидное окисление липидов '. 10

1.1.2. Система антиоксидантнои защиты организма 18

1.2. Оксид азота и его биологическая роль в организме млекопитающих 29

1.2.1. Образование и цикл оксида азота 29

1.2.2. Взаимосвязь активных форм кислорода и азота 34

1.2.3. Роль оксида азота в репродукции животных 40

1.2.4. Роль оксида азота в регуляции гладкой мускулатуры 43

1.2.5. Взаимосвязь оксида азота и синтеза эстрогенов и прогестерона... 45

1.3. Этиология и патогенез субинволюции матки 47

2. Объекты и методы исследования 50

2.1. Объекты исследования : 50

2.2. Методы исследования 51

2.2.1. Определение продуктов пероксидного окисления липидов 51

2.2.2. Определение активности супероксиддисмутазы в крови 54

2.2.3. Определение активности каталазы в крови 55

2.2.4. Определение активности глутатионпероксидазы в крови 56

2.2.5. Определение активности глутатибнредуктазы в крови 57

2.2.6. Определение показателей биохемилюминесценции

плазмы крови 58

2.2.7. Определение стабильных метаболитов оксида азота в сыворотке (плазме) крови 59

2.2.8. Статистическая обработка данных 61

3. Результаты собственных исследований 62

3.1. Динамика показателей свободнорадикального окисления липидов и состояния антиоксидантнои системы в крови клинически здоровых коров в последний месяц беременности и ранний послеродовый период 62

3.2. Свободнорадикальное окисление липидов и состояние антиоксидантнои системы у коров с субинволюцией матки 69

3.3. Хемилюминесцентный анализ плазмы крови коров в пред- и послеродовой период 77

3.4. Динамика содержания стабильных метаболитов оксида азота у клинически здоровых и коров с субинволюцией матки 84

3.5. Взаимосвязь.сократительной функции матки и уровня стабильных метаболитов оксида азота в крови у коров 89

3.6. Сократительная функция миометрия при модуляции синтеза оксида азота 93

3.7. Половые гормоны и оксид азота у коров в период беременности и после отёла 98

4. Обсуждение полученных результатов 101

5. Выводы 113

6. Практические предложения 116

7. Список использованной литературы 117

Введение к работе

Актуальность темы. Противоречивые сведения о характере течения инволюционных процессов, этиологии, патогенезе и клиническом проявлении функциональных расстройств в половых органах после родов сдерживают разработку эффективных методов ранней диагностики, лечения и профилактики патологии послеродового периода.

Среди всех акушерских заболеваний, регистрируемых у животных в послеродовый период, одним из наиболее распространенных является субинволюция матки. В основе данного заболевания матки лежат нарушение тонуса и ослабление её сократительной функции (Нежданов А.Г., Мисайлов В.Д., 1996). На фоне субинволюции могут развиваться гнойно-катаральный и гнойный септический эндометриты, различные функциональные расстройства яичников и матки, приводящие к длительному бесплодию животных (Нежданов А.Г., 1982, Шахов А.Г. с соавт., 2006).

Согласно современным представлениям универсальными регуляторами функций любых физиологических систем организма являются процессы свободнорадикального окисления и система оксида азота (Ь-аргинин-гЮ ) и существует тесная взаимосвязь между процессами свободнорадикального окисления (СРО), инициаторами которого являются активные формы кислорода (АФК), антиоксидантной системой и системой оксида азота (Зенков Н.К. с соавт., 2001).

Свободнорадикальная природа NO (Halliwell В. el al, 1997) позволяет ему, как активировать цепные свободнорадикальные реакции, так и ингиби-ровать их (Laskin J.D. et al., 2001). При этом защитные эффекты NO связаны с его способностью увеличивать активность антиоксидантных ферментов и экспрессию кодирующих их генов (Gromadzinska J., Zachara В., 1992) и замедлять свободнорадикальное окисление липидов (Wu S. et al, 2000). Оксид азота может быть вовлечен и в механизмы повреждения наряду с процессами свободнорадикальной модификации белков и нуклеиновых кислот активными формами кислорода (Laskin J.D. et al., 2001). В зависимости от природы действующего фактора эти повреждающие эффекты возможно могут быть обусловлены либо гипо-, либо гиперпродукцией АФК, а избыточный или недостаточный синтез N0" в организме является одним из факторов патогенеза различных заболеваний (Зенков Н.К. с соавт., 2001).

Дисбаланс прооксидантных и антиоксидантных процессов в организме приводит к формированию оксидативного стресса (Осипов А.Н. с соавт., 1990; Naziroglu М. et al., 2000), который является основным метаболическим синдромом, способствующим развитию многочисленных морфофункцио-нальных нарушений в организме (Меньшикова Е.Б. с соавт., 1994).

Имеются данные о том, что оксид азота участвует в расслаблении гладких мышц матки, тормозит сокращения матки при беременности и играет роль релаксанта цервикального канала в родах (Garfield R.E. et al., 2001).

Все это позволяют предполагать важную роль процессов свободнора-дикального окисления, состояния антиоксидантной системы, а также системы L-aprHHHH-NO в патогенезе послеродовых нарушений сократительной функции матки у коров. Выяснение этой стороны патогенетических механизмов может быть перспективно и в плане поиска и разработки фармакологических средств снижающих проявление нарушений сократительной функции матки в послеродовый период.

К сожалению работ, посвященных изучению роли процессов пероксид-ного окисления липидов, системы антиоксидантной защиты и интенсивностью образования оксида азота в период беременности и после родов у коров, а также их связи с развитием послеродовой патологии и, в частности, с нарушением сократительной функции матки крайне мало. Это и определило общую направленность работы, выбор методологических подходов и экспериментальных моделей.

Цели и задачи. Основной целью исследования является изучение роли свободнорадикального окисления липидов и антиоксидантной системы, а также оксида азота в развитии послеродовых нарушений сократительной функции матки у коров.

В соответствии с указанной целью на разрешение ставятся следующие задачи:

1.Изучить показатели, характеризующие интенсивность свободноради-кального окисления липидов в разные периоды до и после отела у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

2.Изучить показатели, характеризующие состояние ферментативного звена антиоксидантной системы в разные периоды до и после отела у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

3.Изучить динамику уровня стабильных метаболитов оксида азота в предродовый и послеродовый период у здоровых коров и коров с субинволюцией матки.

4.Выявить характер взаимосвязи динамики половых гормонов и оксида азота у коров с нормальным и патологическим течение послеродового периода.

5.Определить биохимические критерии риска развития у коров нарушений сократительной функции матки в послеродовый период.

Научная новизна. Впервые комплексно изучены процессы пероксидно-го окисления липидов, состояние антиоксидантной системы и генерации оксида азота в течение беременности и в послеродовый период у здоровых коров и животных с послеродовым нарушением сократительной функции матки. Установлено, что по мере приближения родов различия в уровне функционального состояния ферментативного звена системы антиоксидантной защиты и интенсивности течения процессов пероксидного окисления липидов между животными с нормальным и патологическим течением послеродового периода усиливаются. Впервые изучено влияние уровня генерации в организме оксида азота во время беременности и после родов на сократительную активность миометрия у клинически здоровых коров и коров с субинволюцией матки. Выявлена взаимосвязь сократительной функции матки и интенсивности образования оксида азота в организме у коров. Установленные взаимосвязи между оксидантно-антиоксидантным гомеостазом, оксидом азота, половыми гормо 8 нами и сократительной функцией матки позволяют расширить современные представления о молекулярно-биохимических механизмах развития её субинволюции у коров.

Получен патент РФ на способ прогнозирования патологии послеродового периода у коров (№2296507, Бюлл. №10, 10.04.2007).

Практическая значимость. Даны биохимические критерии повышенного риска развития субинволюции матки у коров. Полученные данные можно использовать для оценки устойчивости к заболеваниям, прогнозирования возникновения патологических состояний и разработки научно обоснованных методов управления и комплексной профилактики субинволюции матки у коров.

Материалы диссертации вошли в Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике субинволюции матки у коров рассмотренные, одобренные и рекомендованные к изданию секцией «Патология, фармакология и терапия» (протокол № 1 от 24.03.2005).

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на Международных научно-практических конференциях «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях (Воронеж, 2002); «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004); «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, 2005); «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008) и на 1 съезде фармакологов России (Воронеж, 2007).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 15 научных статьях, опубликованных в различных изданиях, в том числе 4 в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ и 1 патенте.

На защиту выносятся следующие положения:

1. У коров с субинволюцией матки до и после отела повышена интенсивность процессов свободно-радикального окисления липидов и имеются нарушения в ферментативном звене системы антиоксидантной защиты организма по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода.

2. Изменению синтеза оксида азота принадлежит важная роль в регуляции сократительной активности миометрия. У коров с субинволюцией матки в послеродовой период интенсивность образования оксида выше, чем у коров с нормальным течением послеродового периода.

3. Оксиду азота принадлежит важная роль регуляции сократительной функции матки у коров. У коров с нормальным течением послеродового периода инволюция матки происходит на фоне снижения образования оксида азота, а отсутствие такой закономерности является одной из причин развития послеродовой субинволюцией матки.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список использованной литературы содержит 255 источников, из них 138 отечественных и 117 иностранных. Иллюстративный материал включает 17 рисунков и 7 таблиц.  

Пероксидное окисление липидов и системы его регуляции

В настоящее время установлено, что реакция организма на молекулярном уровне в ответ на действие экстремальных факторов характеризуется усилением процессов окисления целого ряда биосубстратов. В связи с этим активно обсуждается значение процессов свободноради кального окисления в молекулярных механизмах адаптационных реакций при разнообразных заболеваниях, в том числе и при акушерской патологии. Причем характерной чертой исследований гомеостатических нарушений во время беременности, родов и послеродовом периоде является смещение внимания исследователей к процессам пероксидации липидов, их роли и значению в генезе патологических состояний (Рецкий М.И.,1997; Абрамченко В.В., 2001).

Липиды (жиры) выполняют много функций в животном организме. Главными из них являются: обеспечение функциональной деятельности биологических мембран, обязательной структурной составной в которые они входят (Меерсон Ф.З., 1981; Журавлев А.И., 1982); восполнение энергетического дефицита при физиологической адаптации за счет внутриклеточных липидных ресурсов; выполнение роли основного энергоносителя при стрессовых адаптациях и истощающих нагрузках за счет жировых депо, а сопротивляемость организма влиянию неблагоприятных для здоровья факторов и вероятность возникновения болезни, во многом определяется состоянием физиологических систем неспецифической резистентности, надежностью механизмов адаптации (Соколовский В.В., 1988).

Липиды, участвующие в каждой из этих биологических функций имеют общие физико-химические свойства и особенности. Главной особенностью высокореактогенных мембранных липидов является их большая чувствительность к биологическому окислению, в частности, к пероксидации (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972).

Все многообразие процессов, протекающих с участием кислорода можно, исходя из соответствующих структурных, функциональных и химических признаков свести к нескольким основным типам:

- оксидазные реакции, катализируемые ферментами, расположенными, в основном, во внутренней мембране митохондрий. Митохондриальное окисление является единственным известным механизмом использования кислорода для образования энергии в клетке (Скулачев В.П., 1972).

- реакции оксигеназного типа, связанные с электроннотранспортной системой эндоплазматического ретикулума и использующие кислород с пластическими целями. Эти реакции предполагают включение одного или двух атомов кислорода в молекулу субстрата (Арчаков А.И., 1975).

- в реакциях митохондриального и микросомального окисления в результате неполного восстановления кислорода до воды могут образовываться его активные формы - супероксидный и гидроксильный радикалы, перекись водорода, синглентный кислород. Эти активные формы кислорода, реагируя, прежде всего, с ненасыщенными жирными кислотами, образуют так называемые перекисные соединения. Поэтому весь этот процесс, имеющий сво-боднорадикальный характер получил название перекисного окисления липи-дов (ПОЛ) (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972).

Молекулярно-энзимологическая специфика и функциональная значимость первых двух типов реакций достаточно хорошо изучена. Что касается биохимической и физиологической роли процессов ПОЛ, как в нормальной жизнедеятельности, так и при взаимодействии организма с изменяющимися условиями среды, то данные о них начали систематизироваться только в последние 30 лет.

Реакции перекисного окисления липидов, имея,универсальный характер, являются показателем устойчивости стационарного режима превращений в организме (Wills E.D., 1971; Арчаков А.И. с соавт., 1973) и, оказывая влияние на его адаптивные возможности, определяют возможность развития патологии (Меерсон Ф.З., 1981; Журавлев А.И., 1982; Кожевников Ю.Н., 1985; Жданов Г.Г. с соавт., 1989). Это обусловлено высокой биологической активностью соединений, образующихся в реакциях ПОЛ, комплексом системных перестроек метаболизма, изменениями характера межклеточных и межсистемных взаимоотношений, потенцируемых ими, а также признанием решающей роли в жизнедеятельности организма биомембран, в структуре которых важное место занимают липиды с высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот (Куликов В.Ю. с соавт., 1988).

Перекисное окисление липидов является типичным цепным процессом с вырожденным разветвлением, протекающим по свободнорадикальному механизму в несколько стадий (Храпова Н.Г., 1981; Бурлакова Е.Б. с соавт., 1998). Общая скорость окисления липидов определяется соотношением скоростей этих стадий и в большинстве случаев является стационарной. Модификация какой-либо из стадий этих реакций изменяет скорость окисления липидов и физико-химические свойства клеточных мембран.

Появление в различных типах реакций активированных форм кислорода - один из главных и необходимых этапов в инициировании реакций ПОЛ. Можно выделить несколько форм кислорода и путей их превращения в клетке, играющих основную роль в потенцировании перекисных реакций, определяя их регуляторную и патофизиологическую значимость (Лукьянова Л.Д. с соавт., 1982). Эти формы кислорода образуются в ходе его ступенчатого восстановления. При потере кислородом одного электрона образуется супероксидный анион - 02. Этот радикал может генерироваться при аэробном дыхании в митохондриях вследствие недостаточной эффективности переноса электронов во всех компонентах дыхательной цепи (Nohl Н., 1990; Каган В.Е. с соавт., 1986).

Оксид азота и его биологическая роль в организме млекопитающих

Оксид азота (NO ) обладает широким спектром биологического действия. Однако при рассмотрении каждого конкретного действия обнаруживается, что NO" и здесь характеризуется полифункциональностью проявлений: как усиливает процессы ПОЛ в мембранах клеток и липопротеинах сыворотки, так и ингибирует их. Оксид азота также вызывает расширение сосудов, но может вызывать и вазоконстрикцию (Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., 1997; Ванин А.Ф., 1998; Ванин А.Ф., 2001). Известно также, что оксид азота индуцирует апоптозную гибель клеток и оказывает защитный эффект в отношении апоптоза, индуцированного другими агентами. Известна его способность модулировать развитие воспалительной реакции и ингибировать окислительное фосфорилирование в митохондриях и синтез ATP (Drapier J.-С, Hibbs J.b., 1988; Kurose I. et al., 1993). Благодаря таким свойствам оксид азота нередко называют «двуликим Янусом» (Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., 1997). Главным источником NO в организме в настоящее время считают систему синтеза окиси азота, катализируемую специальными ферментами - N0- синта-зами, субстратом для которых служит L-аргинин. Согласно O.W. Griffiths весь цикл азота, катализируемого NO-синтазой, протекает исключительно в пределах одного железосодержащего гемм-тиолового центра и включает ряд последовательных стадий превращения аргинина, в результате которых синтезируется окись азота и образуется цитруллин (Griffiths О. W., 1995). В качестве других источников N0 в организме можно рассматривать многие азотсодержащие вещества, которые попадают в организм из внешней среды. Примером таких веществ могут служить органические нитраты, подвергающиеся в организме ферментативным превращениям или спонтанному распаду с генерацией при этом окиси азота, а также ряд сложных соединений, содержащих легко отщепляющиеся нитрозильные группы и, таким образом, становящиеся в организме донорами N0". К числу таких соединений относятся нитроглицерин, нитро-сорбид и др. Считается, что основным фармакологическим эффектом органических нитратов является вазодилатация, вызываемая расслаблением гладко-мышечных клеток сосудов, опосредованным через NO" (Зеленин К.Ы., 1997; Петренко Ю.М., Шашурин Д.А., 2001). Сходной с органическими нитратами активностью обладают нитропруссид натрия и мол си домин, которые способны непосредственно спонтанно высвобождать NO (Feelish М., Noack Е.А., 1987).

Вместе с тем в литературе появились данные, из которых следует, что NO-синтаза может быть не единственным ферментом, выступающим в роли эндогенного источника окиси азота в организме. Оказалось, что помимо NO-синтазы генерировать окись азота практически на регулярной основе в организме может ксантиноксидаза. Данный фермент может осуществлять в орга низме функцию источника окиси азота, используя для этого в качестве субстрата нитрит-ионы (Zhang Z. et al., 1997; Zhang Z. et al., 1998). Ксантинокси-даза может функционировать в качестве нитрит-редуктазы только в присутствии НАДН (Zhang Z. et al., 1998), но в бескислородных условиях, в отличие от NO-синтазы. Следовательно, значимость ксантиноксидазы как источника N0 в организме при гипоксии резко возрастает. Этот фермент способен синтезировать окись азота как непосредственно из нитрит-ионов, так и из нитрат-ионов через восстановление последних до нитритов (Fridovich I. et al., 1962). Это не единственный источник NO , действующий на нитрат-нитритной основе, а окись азота может генерироваться также в процессах окисления гемоглобина и миоглобина, индуцированных нитрит-ионами (Реутов В.П с соавт., 1998 ).

Предполагается, что окислительный процесс превращения гемоглобина в метгемоглобин или миоглобина в метмиоглобин под действием нитрит-ионов может быть сопряжен с синтезом оксида азота (Петренко Ю.М., Шашу-рин Д.А., 2001). Помимо источников окиси азота, действующих на нитрат-нитритной основе, имеются источники N0", функционирующие на другой близкой основе - на основе гидроксиламина. Гидроксиламин, являясь продуктом жизнедеятельности клеток млекопитающих, обладает выраженными вазо-дилататорными свойствами (Huang Y., 1998). Механизм сосудорасширяющего действия этого соединения опосредован действием окиси азота, освобождаемой при его метаболических превращениях. По этой причине гидроксиламин часто называют эндогенным донором окиси азота в организме (Huang Y., 1998; Moncada S. et al., 2001). Каков механизм генерации окиси азота гидро-ксиламином и где протекает этот процесс, до конца невыяснено. Сходными с NO физико-химическими свойствами и действием на гуанилатциклазу обладает другое соединение - оксид углерода.

Определение продуктов пероксидного окисления липидов

Опыты проведены в зимне-стойловый период (октябрь-апрель) на 120 коровах в возрасте 2-8 лет, средней упитанности, массой тела 500-700 кг в ОАО "Воронежпищепродукт" Новоусманского района Воронежской области, в соответствии с рабочей программой отдела на 2001-2005 г.г. "Изучить на мо лекулярно-биохимическом, структурно-функциональном, системно физиологическом и экологическом уровнях и определить причины и механизмы перехода организма из нормального состояния в патологическое и на этой основе разработать средства, методы и технологии защиты здоровья и продуктивности животных" (№ гос. регистрации 01.200.117018). Была изучена роль дисбаланса активных форм кислорода и биологически активных веществ в нарушении обмена веществ, снижении резистентности и возникновении заболеваний продуктивных животных.

Кормление коров проводилось по общепринятым в хозяйстве рационам. В работе была изучена динамика показателей интенсивности свободноради-кальных процессов, состояние системы антиоксидантной защиты и системы оксида азота у здоровых коров и коров с синдромом субинволюции матки.

В соответствии с анамнестическими данными коровы были распределены на следующие группы: клинически здоровые, с острой, подострой и хронической субинволюцией матки. Было учтено общее клиническое состояние, характер течения родов, послеродовых инволюционных процессов в половых органах и сроки их завершения.

Субинволюция матки подтверждена клиническими и лабораторными исследования, глубину стельности определяли акушерско-гинекологичес-кими методами.

У опытных животных проводили исследования крови в разные периоды до и после отела. Конкретные сроки исследования крови для удобства указаны в соответствующих главах раздела «Результаты собственных исследований» при изложении результатов отдельных опытов. Ход определения сократительной активности миометрия, объекты и методы описаны в главе 3.6.

Работа была выполнена совместно с д. вет. наук В.И. Михалевым, кан. биол. наук Г.Н. Близнецовой, в связи с чем, автор выражает им свою благодарность.

Содержание в крови конъюгированных диенов (Б2зз/мг липидов) и кетодиенов (D27g /мг липидов) определяли спектрофотометрически при 232 нм в гептановой фазе липидного экстракта крови (Стальная И.Д., 1977; Ши-лина Н.К. с соавт., 1978).

К 1,0 мл крови приливали 7,0 мл экстрагирующей смеси гептан-изо-пропанол (в соотношении 1:1) и интенсивно встряхивали 2 минуты. Пробы центрифугировали при 3000 об/мин и температуре 0...+4С в течение 15 минут. Затем 2,0 мл верхнего гептанового слоя переносили в чистые химические пробир ки и выпаривали в токе азота на водяной бане при +40...+50С. К сухому остатку на дне пробирки приливали 3,0 мл этилового спирта, пробирки интенсивно встряхивали, оставляли на 10-15 минут при комнатной температуре.

Измеряли оптическую плотность опытных проб на длинах волн 232 нм и 278 нм против контрольной, содержащей этиловый спирт.

Содержание диеновых конъюгатов (ДК) и кетодиенов (КД) рассчитывали по формуле: Е232(278) Сдк(кд) = , где А Сдк(кд) - содержание диеновых конъюгатов (кетодиенов) в единицах оптической плотности на мг липидов; Е2з2 - оптическая плотность пробы для диеновых конъюгатов; Е278 - оптическая плотность пробы для кетодиенов; А - содержание общих липидов в пробе (г/л).

Принцип определения малонового диальдегида основан на реакции взаимодействия малонового диальдегида (МДА) с 2-тиобарбитуровой кислотой (2-ТБК) при высокой температуре в кислой среде с образованием окрашенного триметинового комплекса, имеющий максимум поглощения при длине волны 532 нм (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977; Двинская Л.М., Никифорова Л.Н., 1980).

К 2,5 мл гепариновой крови прибавляли 1,0 мл 17 % ТХУ, перемешивали, оставляли в холодильнике на 15 мин и после этого центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин.

К 2,0 мл надосадочной жидкости прибавляли 1 мл 0,8% раствора 2-ТБК и помещали на кипящую водяную баню на 15 мин. После этого пробы охлаждали до комнатной температуры, центрифугировали 20 мин при 5000 об/мин и измеряли оптическую плотность при 532 нм против контрольной пробы, обработанной аналогичных образом, но содержащей вместо надосадочной жидкости 2,0 мл смеси 2,5 мл дистиллированной воды и 1 мл 17% ТХУ.

Динамика показателей свободнорадикального окисления липидов и состояния антиоксидантнои системы в крови клинически здоровых коров в последний месяц беременности и ранний послеродовый период

На второй день после родов у коров первой группы содержание в крови конъюгированных диенов превышает дородовый уровень на 16,1%, малонового диальдегида- на 75,0 % и оснований Шиффа- на 68,8 %. У заболевших после родов коров, уровень конъюгированных диенов возрастает на 70,5 %, малонового диальдегида - в 2,6 раза, а оснований Шиффа - в 3,3 раза.

В группе животных, предрасположенных к субинволюции матки, по сравнению с коровами с нормальным течением послеродового периода, на 2-ой день после отела значительно снижается мощность ферментативного звена системы АОЗ организма. В этот период активность СОД у них ниже более чем в 2 раза, каталазы - на 27,6 %, глутатионпероксидазы - на 38,2% и глутатионредуктазы — на 39,8 %.

Через 15 дней после родов у коров с нормальным течением послеродового периода наблюдается тенденция к нормализации состояния ферментативного звена системы АОЗ. Это выражается в повышении активности СОД, каталазы, глутатионпероксидазы и некотором снижении активности ГПО, повышенной в первые дни после родов.

Следствием более адекватной реакции всех звеньев системы АОЗ и ее достаточного запаса надежности животных первой группы является снижение почти до исходного дородового уровня содержания начальных и конечных продуктов ПОЛ. У коров с субинволюцией матки к этому времени, не происходит снижения повышенного уровня конъюгированных диенов и оснований Шиффа. Содержание малонового диальдегида, являющегося промежуточным продуктом ПОЛ, хотя и несколько снижается, но остается еще достаточно высоким, превышая уровень перед родами в 1,5 раза. Такая высокая интенсивность течения процессов ПОЛ и накопление его продуктов в крови у больных коров связан с низким уровнем функционирования обеих звеньев системы АОЗ, что можно характеризовать как ее недостаточность. Наряду с этим несколько возрастает активность ГР и СОД и понижается активность ГПО. Однако уровень активности этих ферментов у коров с субин 74 волюцией матки остается статистически достоверно более низким, чем у здоровых животных.

Следует особо отметить, что у больных коров на 15-й день после отела активность каталазы не снижается, как у коров с нормальным течением послеродового периода, а продолжает нарастать и превышает активность этих ферментов у здоровых животных на 20,0 %. По всей вероятности, это связано с развитием воспалительного процесса, сопровождающегося высокой метаболической активностью нейтрофилов и макрофагов, продуцирующих активные формы кислорода, в обезвреживании которых одну из основных ролей играет каталаза.

Таким образом, проведенный сравнительный анализ состояния системы АОЗ и процесса ПОЛ у коров с нормальным и патологическим течением послеродового периода свидетельствует о том, что у животных, у которых в дальнейшем развилась субинволюция матки, уже за 1,5-2 месяца до родов отмечается тенденция к снижению потенциала системы АОЗ и более активному протеканию процессов переоксидации липидов. По мере приближения родов различия в уровне функционального состояния системы АОЗ и регуляции течения процессов ПОЛ между животными с нормальным и патологическим течением послеродового периода усиливаются и к моменту родов, которые являются экстремальным фактором, вызывающим развитие состояния «физиологического» стресса (Ruiz R. J. et al., 2001) у коров с субинволюцией матки имеются существенные нарушения в системе АОЗ. Это не позволяет адекватно контролировать и удерживать в физиологических пределах, нарастающий при стрессе уровень активных форм кислорода, сдерживать чрезмерную активацию процессов ПОЛ и накопление в организме его токсических продуктов, оказывающих повреждающее воздействие на биомембрапы и инактивирующих большинство мембраносвязанных и липидзависимых ферментов. В этом может заключаться одна из причин метаболических нарушений в организме коров в ранний послеродовый период и снижения их иммунологической сопротивляемости, на фоне чего возрастает риск возникновения субинволюции.

По мере приближения родов различия в уровне функционального состояния системы АОЗ и регуляции течения процессов ПОЛ между животными с нормальным и патологическим течением послеродового периода усиливаются и к моменту родов, которые являются экстремальным фактором, вызывающим развитие состояния «физиологического» стресса (Ruiz R. J. et al., 2001). У коров с субинволюцией матки имеются существенные нарушения в системе АОЗ. Это не позволяет адекватно контролировать и удерживать в физиологических пределах, нарастающий при стрессе уровень активных форм кислорода, сдерживать чрезмерную активацию процессов ПОЛ и накопление в организме его токсических продуктов, оказывающих повреждающее воздействие на биомембраны и инактивирующих большинство мембра-носвязанных и липидзависимых ферментов. В этом может заключаться одна из причин метаболических нарушений в организме коров в ранний послеродовый период и снижения их иммунологической сопротивляемости, на фоне чего возрастает риск возникновения субинволюции.

Похожие диссертации на Пероксидное окисление липидов, антиоксидантная система и оксид азота при послеродовых нарушениях сократительной функции матки у коров