Введение к работе
Актуальность проблемы. Тромбоз является наиболее частой причиной эсложнений сердечно-сосудистых заболеваний, а результаты эпидемиологических исследований свидетельствуют о том, что . ряд компонентов системы гемостаза: фибриноген (Фг), фактор VII, тканевой зктиватор гшазминогена (тАП) и его ингибитор (ИАП-1) могут эассматриватъся и как факторы риска развития атеросклероза. Это зтимулирует разработку новых методов исследования системы гемостаза, поиск фармакологических препаратов, позволяющих корректировать выявленные нарушения, и совершенствование схем их применения.
Протеолиз является основной биохимической реакцией системы гемостаза, обеспечивающей активацию проферментов и "кофакторов", превращение Фг в фибрин, растворение фибрина и ингибирование факторов. По механизму действия все ферменты системы гемостаза за исключением фактора XIII являются трипсиноподобными протеазами, ко гидролизуют только очень ограниченное количество связей в белках-субстратах и из-за низкого содержания в плазме прямое измерение их активности представляет зобой трудную задачу. Синтез хромогенных субстратов в середине 70-х годов збеспечил значительный прогресс коагулологических исследований, т.к. ггозволил использовать фотометрию для измерения компонентов системы -еыостаза. Однако, широкое использование хромогенных субстратов, представляющих собой р-нитроанилиды три- и .тетрапептид'ов, привело к накоплению данных, свидетельствующих о том, что синтетические субстраты не обеспечивают необходимой селективности измерений и проблема зазработки новых подходов к определению компонентов системы гемостаза эстается актуальней и на сегодняшний день.
Цепи и задачи исследования.
Целью настоящей работы было: 1) изучить возможности использования фотометрии для исследования лизиса фибрина; 2) разработать методы зпределэния компонентов системы фибринолиза; 3} исследовать тАП и его ічгибитор у больных сердечно-сосудистой патологией.
Исходя из поставленной цели предполагалось выполнить следующие задачи:
-
Выделить фибриноген, обладающий высокой свертываемостью и не содержащий примеси плазминогена. Оценить его свойства.
-
Разработать способ получения фибрин-мономера.
-
Разработать метод фотометрической регистрации лизиса фибрина.
-
Оценить состояние системы фибринолиза у больных с различными проявлениями атеросклеротических поражений сосудов.
Научная новизна и практическая значимость разультатов.
Предложен метод турбидиметрической регистрации лизиса фибрина и на его основе разработаны метод определения концентрации плазминогена (Пг), отличающийся более высокой специфичностью по сравнению с широко используемым амидолитическим, и метод тестирования препаратов стрептокиназы (СК), который может использоваться для подбора наиболее оптимальных схем введения препарата. Разработанный простой способ солюбилизации фибрина открывает возможность определения у больных тАП и ИАП-1 без использования импортных диагностикумов. Определение этих показателей у больных острым инфарктом миокарда (ОИМ) и с различной выраженностью атеросклеротических поражений сосудов позволило выявить корреляции между уровнем активности ингибитора и временем от появления симптомов ОИМ, что может быть одной из причин низкой эффективности тромболизиса при более позднем его начале; между уровнем Д-димера и возрастом, а также между уровнем Д-димера и активностью тАП и ИАП-1, которые ' помогают понять взаимосвязь между внутрисосудистыми отложениями фибрина и изменениями в системе фибринолиза при атеросклерозе.
Апообания работы и публикации.
Материалы работы были доложены на IV Всесоюзной научной конференции "Противотромботическая терапия в клинической практике. Вопросы фибринолиза и тромболиза", Москва, 1990 г.; на Всесоюзной конференции "Физиология и патология гемостаза", Полтава, 1991 г.; на 2-ой Международной школе ангиологов, Монте-Карло, 1993 г.; на. XIV Конгрессе
Международного общества по тромбозам и гемостазу, Нью-Йорк, 1993 г.; на II Научной конференции Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром: современное состояние проблемы", Москва, 1995 г.; а также на межлабораторном семинаре НИИ экспериментальной кардиологии КНЦ РАМН 21 марта 1996 г.. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, включая авторское свидетельство.
Объем и структура работы, .
