Введение к работе
Актуальность проолемы. идкж из методических подходов при поиске оиохшических нарушении, связанных с развитпек заболевания." является сравнительный анализ оелковых спектров оагькых и здоровых индивидов. Такие исследования ведутся достаточно длительное время, к хотя кардинальных изменений шелкового спектра напден:' н- "иле (Comings et ai, 1987), удалось покэзать, что интенсивность оио-. логической фуккцки часто связана не с изменениям! ооцего количества бежа, а с рзгуллцией активности, присутствующего в клетке фермента '.Нейфах, Тимофеева, 1977).
имеются многочисленные данные о нарушениях пстреовения глюкозы и регионального кровотока при шизофрении lAnd-easen N, 1989;. Поскольку креатинкиназная система играет важную рагь в поддержании постоянства концентрации /.ТФ при гипоксии и пгаоглтамии, несомненный . интерес представляет изучение' ФункшїонироваЕйя этой системы при психической патологии. Ранее Г.Ш.Буроаэвой и М.В.АхсенсЕСП было показано серьезное сникенис. КФК активности в водорастворимой фракши экстрактов лооных долей оольпых шизофренией, подтвержденное юдаунологически (Бурбаеиа-и соэвт, 1987; 1990; Аксенова, 1У39), поэтому актуальным представляется дальнейшее изучение креь-тинкиназвой систеїяі мозга.
Целью данной раоотк оыло изучение внутриклеточных изменений креатинкиназной системы мозга человека, состоящей из нескольких1 Функционально различащихся изоферментов, при шизофрении, и поиск причин таких изменений.
Для достиїзеия поставленной цели решали следующие задачи: 1. очистка В- изоформы креатинфэсфокиназы из мозга человека и получение антител к ней. а.. Измерение КФК активности ь лооных долях мозга оольных шизофренией.
а. Определение изоферментного спектра КФК в лооных долях мозга
здоровых людей и больных шизофренией.
4. Иммунологическое определение изоферментов КФК е различных
клеточных фракциях.
5. Изучение внутриклеточного распределения КФК активности в норме
и при шизофрении.
б. Определение экспрессии изоформ КФК на уровне мРНК с примене
нием синтезированнных ДНК-зондов.
7. Определение влияния на КФК активность мозга крыс лекарств и стрессовых воздействий.
Научная новизна. Количественно охарактеризовано снижение активности и количества КФК в водных экстрактах лооных долей мозга оольных шизофренией, определен изоферментный спектр креатинкиназной активности мозга при шизофрении. Показано, что изменение изоферментного спектра при шизофрении вызвано уменьшением в водном экстракте ВВ изоформы КФК за счет перехода этого изофермента в мвмораноассоцпфованную форму. При сравнении свойств расворимой и мемораноассоцюфованной форм ВВ КФК не найдено существенных различий в степеня фосфорилирования. шределена экспрессия генов ВВ и' мит-КФК в лобных долях мозга человека. Исследовано влияние лекарств и стресса на креатинкиназную активность мозга крыс..
з Научно-практическое значение. Полученные в раооте данные оо . изменении Енутриклеточной локализзцім ВВ изоформы 5ФК Е мозге, сольных шизофренией расширяют представления : механизмах нарушения энергообеспечения мозга при этом заболевании, и могут служить основанием для проведения прижизненных исследований кргзткнкинззной реакции методом спектрографии ядерного магнитного резонанса.*Полу-
iiairuc.c ттг. ^0^^111^^^3^0^ ^\?"г* ЕНДЄЛЄ-КИЯ 5Ь H30?*"OTSSS. К'І*К ИГП0ЛЇ—
гуется для создания, совместно с кардиологическим--научным центром РАМН, диагностических наборов для иммунсферменткса даагнсстики ин-
mcvnv»T>g MHO-Ha1"17^.
. wJk_^..^ П-.П-.-1* w.. „I.^I^JMl'. llw»l>*
; , Пг.и тт*=и.і-*-~іхілї, H^/-wnjr,HQWTunp-'' ллотьрь Uri.i. аьяг^зп WPO СНТІиї——
> , 111..1 .ii.iil.b._.llll. liuw^. ьГиіГі.Ііиі ^ .. Чи 1 и— и 1.1.. 11 1^1 . і , . .... , . — —' ^........
ниє осщей КФК активности связано со снижением активвэсти и содержания ВВ, но не Мит-изофермента. Такое снигениэ пркэодит к тому, что в ЕодорастЕоримой фракции мозга сольных шизофренией соотношение кзоферментов реципрокно го" сравнению с соотношением - изоферментов е водорастворимой фракции мозга гдоровпг людей.
2) Снижение вктивносіа 33 КФК сеязэно с дереходоа оелка в ьнзимз-тически неактивную, мемОраноассоциироЕанну» фор*!у. Ранее для Ь изоформы тзкез состояние фермента в мозге человека не описано. 3) Показано совпадение физико-химических свойств сзствсримсй и ^ мемсраноассоциирсвзнной фрэкциЕ МЖ.
4) С использованием синтезированных фрагментов генов ВВ и
МитІМК показано, что транскрипция етих генов в лоожй коре не
изменяется при шизофрении.
5) Показано, что'воздействие лепонекса, галоперидас? и стрес
совое Бездействие не кзіленяот активность ї.ревтинкгавзн в мозге
клыс.
4 Апробация диссертационного материала. Результаты исследования были доложены на:
Всесоюзной совещании "Наследственность человека: белковые продукты экспрессии генов" (Москва, 1989г.).
Зой конференции Европейского нейрохимического общества (Лейпциг, ГДР. 1990).
2ом Всесоюзной совещании "Теоретическая и прикладная молекулярная биология" (Москва, 1991).
23ей конференции Американского нейрохимического общества (Хьюстон, США, 1992).
межлабораторном семинаре ВДПЗ РАШ 16 июня 1993г.
По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ в цетрзльной и зарубежной научной печати.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 99 стра
ницах машинописного текста и состоит, из 6 разделов, включающих
введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты иссле
дований и. и обсуждение, указатель литературы". Обзор литературы
посвящен организации и функционированию креатинкиназной системы в
норме и при патология. Список цитируемых работ состоит из 200 пе
чатных работ в.- отечественной и зарубежной литературе. Диссертация
содержит рисунков и таблиц, помещенных в тексте.