Введение к работе
1.1. Актуальность теш:
Одной иэ основных проблем современной генетики в плаке решения прикладных задач селекции, является выяснение закономерностей работы генов,: возникновения их устойчивых ассоциаций, обуславливающих формирование генотипов с желаемым комплексом признаков. В установлении закономерностей формирования таких устойчивых ассоциаций, а такте функционирования генных комплексов ведуюшув роль должны сыграть генетические модели, раскрывающие.функциональные свяви на макро-, микро- и молекулярном уровне. '
Изучение структуры генов связанных с полезными признаками
сельскохозяйственных животных представляет несомненный интерес
как в теоретическом плане, так и для практического применения.
— Особо в этом,отношении;привлекают; внимание исследователей белки
' '.Чаолока,"как потенциальные генетические маркеры.' Наиболее надежные
„ у-^реэультаты были.получены яри оценке,полиморфизма .белков молока- ;
Jr кааеинов ; <Сп),бета-лактоглоСудинов (Цг), алъфа-лактоалъбуминов
(tab) оказывающих определенное влияние на качество продукта, его
;' выход..'...- ' ,';.'..' :"..;'.'' '-.
- Белок.'бета-дакто глобулин проявляет полиморфные -свойства,
имея генетические варианты А. В. По данным ряда учен ыэс указанные'
генотипы обнаруживают связь 'с 'молочными качествами животных.
-- Установлено^ что.селективная ценность; коров по типам бета-дактог-
: лобулина. - лльфа Ч и каппа-казеина определяется отбором по удою и
количеству-. молг>'-іного: жира , преимущество имеют коровы с'типами
бета-ЦВБ. альфа" -СпАА, каппа-СпАА / Иаршчук Г. В..'! 1979/. ;.
... В то же Время некоторые авторы /маринчук Г\Е., 1992; . Qraml
R. et al,, 1986; ;Hiries НІС. et al:. .1981/: высказали предположение
о нетесном сцеплении .между казеиновым комплексом и локусом Об:-
та-дакто глобулина.L .' ': ':.'..,_'
''.і Достижения молекулярной генетики, позволившие конструировать и клонировать'рекомбинэдные JDJK. вводить эту генетическую ин<ор-мздию в геном, открыли принципиально новые возможности :
НАУЧАЯ БИБЛИОТЕКА ft.JocK. соль-;:а;0з ачадвиии
направленного изменения наследственности. При этой особый интерес
представляют приемы создания .и интегрирования в геном животных
. ' различных генных конструкций, в первую очередь анологичных имею
щимся в их наследственной информации,', т.е. гены той же специали-;..
аации, но.других видов животных и человека с разными регулятор- ;:
ними последовательностями. .'.'
При целенаправленном переносе генов, к примеру, под молоч-ио-специфнчесюш промотором, их экспрессия будет происходить В UO-. дочной железе трансгенных животных, и вместе с молоком будут ВЦ-! * . являться необходимые белки. Дри' этом выделенные из молока реком- бинантные бедки, как зго уже отмечено, обладаю специфической активностью, что указывают на способность ферментных систем клеток': молочной железы к посттрансляционнЬй модификации -. _ '.','
Исходя из этих предпосылок изучение структуры генов' и. их
представительства в геномной ДИК данной популяции, контролирующей-
синтез лактопротеинов, ученые считают важной задачей современной
генетики, с. другой ; точки врения актуальны работы по созданию и !
клонированию молекулярных ; зондов,; повйоляющих идентифицировать
изучаемые - последовательности, а также .исследовать ' ііолиморфность ^. ...
рестрикткых фрагментов изучаемых генов. * : .* ,',ч
В наши работе была предпринята попытка получения представи- \ тельных кДНК- библиотек из ткани делегирующей молочной железы овт . ;цы, и выделения клона комплементарного к мРНК*бета-'лактоглобулина,-' изучения его структурных последовательностей' методом рестриктного. анализа, бдот-гибридизации и секвенировання. , . v>:
". !Ш* и задачи исследований .,..-. */ ''' \-у-\
'."Целью ваши работыявлялось'выделение и изучение структуры .. кДНК: гена о^та-дактоглобулина : овцы. Для :доститеш!Я этой целиї л . предполагалось решить' сдедушие задачи: ..'-'"-.*.':;..-''-''.:':';.-;.Ч
,1. Еыделение поли -1А) + ИЗК молочной железы овцы и>аракте-..л =
ристика транскрипции гена бета-Цг с помощью~якозерн*,^йпт~гибРи"'А '
, дизации. " '.'. :^-.:.",;ч*.'V' л''-"-'.. *-'V::' -:'" ";:;- .'.. 'Л-/^'-^-'-" V:.V'i"'v''
. г..; синтез и клонирование полворазмерной кДШ молочі^ "белков у-овец в фаговом векторе дамбда-вМО^'Л-У.У'-''' 'Л'/'.'І-.І:^''";'.^, '?;:"-3. Проведение скрининга для выделения; из'':кдШ-бибатотеки,. Фрагментов гомологичных последовательностям кДНК бета-лактргдобу-' .'. лина.' -"..' ' '. '_'(..'/ '.-''. .\ / -".:' .'./ -- \;.":':';-.;;V:"';T ''}''':,'',::
: . ':'-.' ' '.''.'-б - ; -,-. .;-.-. .;...;
4. Структурная '[ характеристика выделены* фрагментов кДНК ее-
та-лактоглобулина с' помощь» рестрикции, блот-гиОридизации и сек-
вевирования. ':\:"'. .:....' '"';'"'..''',
. б. использование кДШ* фрагментов в качестве молекулярных зондов для . изучения ІШРФ { полиморфизма длины рестрикционных фрагментов) гена бета-лактоглобулина'раэньа пород овец. (* V
.Научная новизна и практическая ценность работы ',':..
.'у:'-В фаговом векторе лямбда-etio былдсоздана кДНК библиотека из молочной желевы овцы.; аіделен один клон, 'имевший последовательность, ; гомологичную кДНК бета-лактоглобулина "овеы, ' Были охарактеризованы- последовательности ДНК этого клона методом рестрикцией-ного анализа и на этой основе -построена рестрикционная карта., [ Гестрикционная карта соответствует данным, которые приведены в работе;Gaye et:'аЬ ( 1988). Были частично.секвенированы'поеледо- * вательности ДНК этого клона. V Впервые изучен полиморфизм гена бе-; та-лактоглобулина овцы ві межпородном и вяутрипородном аспекте.
. ;ДНК породы эдильбаевскмх;;"каракульскйх* и романовских овец после расщепления рестркктаэамиЕсоШ її] Pvullгибридизовались с : кДНК ;: бета- лактоглобулина.; і У романовской породы овец был выявлен полиморфизм длин рестриктныхфрагментов при ;.использование'реет-" рюсгазы, EcoRI (фрагменты 2800;пар нуклеотидов'"иі^4600 пін.)-и при использовании ІРуиІІ .- 3000|п.;и.-.1';.'и:у'190Ь';'п.-а.;-.\;Т;'::ЭДИльбаевских.;-.-' овец; ^посде,^
два'фрагмента; г'2800 п.-|'.-и:'4бЬ0 ііи.кІі^П&й. использовании", эндонук-леазы "* Pvull ".найден* только один Фрагменте' длиной І900 п. н; Г-А у.'. каракульских, овец при;рестрикцииEcoRI -'.найден^ один -." фрагмент'. -. -. 2800п.н;*и при рестрикции Pvull -1900 п, н.; '"-; :; л,' -*"
>'': Апробация-работы -Ч:'.: .- М- '-'{' '.'' ?.' '-'.Х-'/"- "'''
--%';": Основные" результаты^работы докладывались .'на 44-я научно-методической .конференции аспиранток, и .на семинаре-от дела; биотехноло-
'гии'БИЖа^.";",Шлученныи,экспе^йМ',-!тальный "материал.представлялся на' Всесоюзном'научно-техническим совещании по проблеме"; развития; би- '
^технологии в. животноводстве -;\і ': Дубрбвицы .'.l990V.r.) ,V'. Республи- : канской' научно-практической конференции!молодых ученых и слециа-, листов ( Алма-Ата-1991. г). \?^*:v.. ''"',".'. V":-'^ ,-(' '.''.
Публикация
По теме диссертации опубликовано 3 печатных работы.
Объем и структура работы .