Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Краткая морфофункциональная хараісгеристика слизистой оболочки полости рта 10
1.2. Мукозит полости рта как осложнение цитостатической химиотерапии 15
1.3. Морфофункциональная характеристика эпителия слизистой оболочки полости рта при действии цитостатиков 17
1.4. Морфофункциональная характеристика собственной пластинки слизистой оболочки полости рта и подслизистой основы при введении цитостатиков 25
Заключение по обзору литературы и постановка цели исследования 29
ГЛАВА 2. Материал и методика 32
2.1. Организация эксперимента и получение материала 32
2.2. Общегистологические исследования 33
2.3. Морфометрические исследования 34
2.4. Гистохимические и цитофотометрические исследования 35
2.5. Иммуногистохимические исследования 37
2.6. Статистическая обработка полученных данных 38
ГЛАВА 3. Результаты исследования 39
3.1. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при кратковременном введении высоких дозциклофосфана и после его отмены 39
3.1.1. Результаты визуального гистологического исследования 39
3.1.2. Результаты морфометрического исследования 51
3.1.3. Результаты гистохимического и цитофотометрического исследования 77
3.1.4. Результаты иммуногистохимического исследования 98
3.2. Морфофункциональная характеристика слизистой оболочки полости рта при длительном введении умеренных доз циклофосфана 110
3.2.1. Результаты визуального гистологического исследования 110
3.2.2. Результаты морфометрического исследования 114
3.2.3. Результаты гистохимического и цитофотометрического исследования 139
ГЛАВА 4. Обсуждение полученных данных 147
4.1. Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка у животных контрольных групп 147
4.2. Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка при кратковременном введении высоких доз циклофосфана 149
4.3. Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка после отмены циклофосфана 156
4.4. Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка при длительном введении умеренных доз циклофосфана 159
Заключение 165
Выводы 170
Практические рекомендации 173
Литература 174
- Морфофункциональная характеристика эпителия слизистой оболочки полости рта при действии цитостатиков
- Результаты гистохимического и цитофотометрического исследования
- Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка при кратковременном введении высоких доз циклофосфана
- Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка при длительном введении умеренных доз циклофосфана
Введение к работе
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Цитостатическая терапия, широко применяемая для лечения злокачественных новообразований, аутоиммунных заболеваний и в трансплантологии [58, 66], сопряжена с развитием осложнений, связанных с повреждающим действием цитостатиков на различные ткани и органы, в частности, на слизистые оболочки [18, 39, 48, 56]. Из последних наиболее часто поражается слизистая оболочка полости рта (СОПР), в которой развивается особый воспалительный процесс — мукозит, нередко сопровождающийся выраженными клиническими проявлениями (эритемой, болезненностью, отечностью, кровоточивостью, сухостью во рту, атрофией, потерей вкусовых ощущений и нарушением питания) и тяжелыми повреждениями тканей вплоть до обширных изъязвлений и возникновения диссеминированных инвазивных инфекционных поражений. Распространению микроорганизмов, способствуют сопутствующие цитостатической терапии лейкопения и иммуносупрессия [4, 20, 29, 44, 85, 86, 106, 114, 130, 133]. Среди цитостатических препаратов наиболее выраженное стоматотоксическое действие оказывают алкилирующие агенты, алкалоиды, антиметаболиты и противоопухолевые антибиотики [54].
Хотя вопросам клинической диагностики, лечения и профилактики мукозита полости рта посвящена обширная литература, тканевые и клеточные механизмы повреждения и регенерации СОПР остаются недостаточно изученными. Имеющиеся представления основаны на результатах разрозненных патоморфологических исследований клинического материала и единичных экспериментальных исследований [64, 72, 91, 95, 111, 126, 141]. Отсутствуют сравнительные сведения о характере и динамике изменений в покровном и железистом эпителиях, собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой основе, особенностях повреждения и регенерации тканей СОПР с учетом их топографии. Также нет единого мнения об обратимости наблюдаемых изменений после отмены цитостатиков. Между тем, такие сведения необходимы для поиска оптимальных путей профилактики осложнений химиотерапии, защиты СОПР от воздействия повреждающих факторов и лечения возникающих поражений. Эти данные могут представлять и теоретический интерес для биологии тканей, поскольку позволяют оценить развитие процессов повреждения и регенерации структурных компонентов СОПР в уникальных условиях введения цитостатиков, вызывающих цитотоксический эффект, подавляющих пролиферативную активность тканей, индуцирующих лейкопению, угнетение реакций клеточного и гуморального иммунитета, обусловливающих усиленную микробную колонизацию.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: На экспериментальных моделях провести комплексное изучение структурно-функциональных изменений тканей СОПР при воздействии цитостатиков и оценить их топографические особенности и обратимость.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. С использованием гистологических, морфометрических, гистохимических и иммуногистохимических методов провести морфофункциональную оценку состояния СОПР при кратковременном введении высоких доз цитостатика алкилирующего ряда циклофосфана (ЦФ);
Изучить морфофункциональные изменения СОПР в различные сроки после отмены ЦФ, кратковременно вводимого в высоких дозах;
Дать морфофункциональную оценку состояния СОПР в динамике длительного введения умеренных доз ЦФ;
Провести сравнительный морфофункциональный анализ особенностей повреждения и регенерации покровного и железистого эпителиев, соединительнотканного компонента и сосудов СОПР с учетом топографических особенностей и режима введения ЦФ.
7 НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые анализ морфофункциональных изменений слизистой оболочки полости рта проведен на моделях, дающих возможность одновременной комплексной оценки состояния покровного и железистого эпителиев, собственной пластинки слизистой оболочки, подслизистой основы и сосудов. Впервые на экспериментальных моделях проведено комплексное гистологическое, морфометрическое, гистохимическое и иммуногистохимическое исследование состояния СОПР при введении цитостатика алкилирующего ряда ЦФ. Получены новые данные о динамике изменений покровного и железистого эпителиев в условиях экспериментальной цитостатической терапии, а также об особенностях повреждения и регенерации покровного эпителия в различных топографических зонах. Впервые проведен анализ структурных и гистохимических изменений малых слюнных желез различных типов при воздействии цитостатика. Получены новые сведения об особенностях тканевых и клеточных механизмов повреждения и регенерации СОПР в зависимости от дозы и длительности введения цитостатика. Впервые прослежена динамика сочетанных изменений эпителия, соединительной ткани собственной пластинки и подслизистой основы СОПР, а также сосудистого компонента под воздействием цитостатика. Получены новые сведения о дифференциальной чувствительности и устойчивости морфофункциональных показателей состояния СОПР в условиях острого и хронического введения цитостатика. Впервые оценена степень обратимости изменений СОПР в различные сроки после отмены цитостатика.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Научное значение проведенного исследования состоит в расширении и дополнении имеющихся теоретических представлений о влиянии цитостатиков на морфофункциональное состояние СОПР. Полученные данные уточняют природу и характер ведущих клеточных и тканевых механизмов развития осложнений цитостатической терапии, связанных с нарушением целостности эпителиального тканевого барьера
8 СОПР, его регенерации, метаболизма, деятельности железистого эпителия, подавлением специфических и неспецифических тканевых и клеточных защитных реакций, нарушением васкуляризации и взаимодействия различных клеток слизистой оболочки.
Практическое значение исследования состоит в получении данных о динамике морфофункциональных изменений отдельных структурных компонентов СОПР и их дифференциальной чувствительности к действию цитостатика, которые необходимы для правильной оценки клинических проявлений осложнений цитостатической терапии, проведения их эффективного лечения и профилактики.
Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии, патологической анатомии, терапевтической стоматологии ГОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова Росздрава.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
1. Введение цитостатика алкилирующего ряда циклофосфана вызывает обратимые изменения в покровном и железистом эпителиях, которые по характеру и направленности сходны при кратковременном введении высоких доз и длительном введении умеренных доз препарата. При обеих схемах введения цитостатика в покровном эпителии нарушаются процессы пролиферации, дифференцировки, ороговения и десквамации. В железистом эпителии отмечены структурные изменения, сочетающиеся с угнетением метаболизма и синтетической активности его клеток. Указанные изменения менее выражены при длительном введении умеренных доз циклофосфана, что обусловлено меньшим повреждающим действием препарата на ткани и более активными процессами адаптации на тканевом и клеточном уровнях.
Изменения в соединительной ткани собственной пластинки и подслизистои основы в условиях острого и хронического введения циклофосфана также протекают однотипно и проявляются развитием отека, снижением числа фибробластов, гранулоцитов, агранулоцитов, макрофагов и тучных клеток. При длительном введении препарата эти изменения менее выражены, но имеют более устойчивый характер.
Сопоставление показателей, характеризующих состояние покровного эпителия и соединительной ткани собственной пластинки и подслизистои основы, показало, что процессы повреждения и регенерации протекают в этих компонентах сочетанно в одни и те же сроки и имеют примерно одинаковую общую выраженность, независимо от схемы введения циклофосфана.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: 7-й Всероссийской научной конференции (Бабухинские чтения), г. Орел, 2009; 6-м Всероссийском съезде анатомов, гистологов, эмбриологов, г. Саратов, 2009; 8-й Всероссийской конференции по патологии клетки, Москва, 2010; 10-м конгрессе Международной ассоциации морфологов, г. Ярославль, 2010; Научной конференции учёных-морфологов г. Санкт-Петербурга, посвященной 200-летию со дня рождения проф. Н.И. Пирогова, СПб, 2010.
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликованы 12 научных работ, из них 7 - в журналах, рекомендованных ВАК: 3 статьи и 3 материалов конференций в журнале «Морфология», 1 статья - в журнале «Ученые записки СПбГМУ им. И.П. Павлова».
Морфофункциональная характеристика эпителия слизистой оболочки полости рта при действии цитостатиков
Покровный эпителий. Влияние цитостатической химиотерапии на эпителиоциты. Под влиянием цитостатиков рельеф слизистой оболочки сглаживается, в частности, происходит уменьшение количества и размеров нитевидных сосочков на дорсальной поверхности языка. Эпителиальные гребни становятся менее протяженными и не столь глубоко вдаются в собственную пластинку [111]. Отмечается картина усиленного паракератоза эпителия и нарастающей гидропической дегенерации клеток его росткового слоя [132].
Наиболее характерным морфологическим проявлением одно- или многократного введения цитостатиков служит уменьшение толщины эпителиального пласта — его атрофия [63, 64, 74, 91, 94, 96, 111]. Как показывают исследования, проведенные на пациентах, получающих химиотерапию, заметные гистологические изменения в СОПР развиваются еще до возникновения выраженных клинических проявлений повреждения тканей, таких, как изъязвление [72, 92-95].
Уже в первые дни после введения цитостатических препаратов происходит повреждение эпителиоцитов, которое проявляется уменьшением их размеров, вакуолизацией и зернистостью цитоплазмы, фрагментацией ядер отдельных клеток. Число поврежденных клеток нарастает до 8-10-х суток [63, 64, 49]. Ультраструктурное исследование эпителиоцитов уже через 1-3 сут после введения цитостатиков обнаруживает увеличенное содержание и дезорганизацию тонофиламентов, выраженную вакуолизацию цитоплазмы, вариации ее электронной плотности, явления аутофагии, уменьшение числа органелл, расширение щелей между клетками базального и шиповатого слоев, утрату межклеточных соединений [72, 49].
Причиной начального повреждения тканей и клеток цитостатиками, помимо их непосредственного влияния на ДНК, считают индуцированное ими образование реактивных метаболитов кислорода (РМК), или свободных радикалов, которые запускают цепь биологических процессов. Повреждаются как дифференцированные клетки, так и камбиальные клетки базального слоя эпителия, а также клетки сосудов и соединительной ткани собственной пластинки СОПР.
Химиотерапия, обусловливая первичное летальное повреждения клеток, индуцирует активацию вторых посредников, таких как керамиды и/или транскрипционные факторы, подобные р53 и ядерному транскрипционному фактору кВ. Этот фактор, по-видимому, является ключевой сигнальной молекулой («главной движущей силой» [92]) в развитии мукозита — его активация усиливает экспрессию до 200 генов, связанных с мукотоксичностью. Иммуногистохимическое исследование экспериментального и клинического материала показало, что уже в самые ранние сроки после введения цитостатиков в эпителиоцитах базального и шиповатого слоев усиливается экспрессия ядерного транскрипционного фактора кВ [128], которая достигает пика спустя 2 ч после введения цитостатика, совпадая с начальными гистоло-гическими изменениями СОПР [92, 94]. Активация ядерного транскрипционного фактора кВ вызывает усиление экспрессии провоспалительных цитокинов, которые также обнаруживаются иммуногистохимически в цитоплазме эпителиоцитов и других клеток СОПР [93, 96, 128]. Хотя угнетение клеточного деления вследствие повреждения ДНК и митотического аппарата традиционно описывается в многочисленных обзорах и монографиях, как ведущий патогенетический механизм развития мукозита полости рта, в действительности, изучению клеточной пролиферации (путем подсчета митозов, с использованием авторадиографии или иммуноцитохимических молекулярных маркеров) посвящены единичные работы. В эпителии СОПР при химиотерапии выявляются атипичные фигуры митозов, на 2-е сутки появляются аномальные ядра, их число достигает максимума на 6-е сутки; отдельные клетки увеличены в размерах. Двуядерные и многоядерные клетки составляют 10 и 6% общего числа эпителиоцитов соответственно [63, 64].
Апоптоз клеток покровного эпителия закономерно обнаруживается в разные сроки после воздействия цитостатиков. На экспериментальной модели показано, что уже через 4 ч после введения высоких доз цитостатика, когда морфологические изменения в покровном эпителии СОПР еще отсутствуют; в его ростковом слое обнаруживаются многочисленные клетки, дающие положительную TUNEL-реакцию (демонстрирующую разрывы ДНК на необратимой стадии апоптоза) [38]. Между тем, при ультраструктурном исследовании отмечено, что в поврежденных эпителиоцитах хроматин концентрируется в центральной части ядра [49], что отличает наблюдаемую картину от таковой при классическом апоптозе.
Введение цитостатиков в клинических условиях и при экспериментальном моделировании мукозита не всегда приводит к полному разрушению эпителия с образованием язв, которые обычно формируются лишь при повторном введении высоких доз препаратов, оказывающих выраженное цитотоксическое действие [64, 88]. В этом случае в результате массивной гибели герминативных/стволовых клеток и подавления деятельности остающихся в шиповатый слой образуется меньшее количество дифференцирующихся клеток. Последние также усиленно погибают и в условиях постоянного слущивания клеток (роговых чешуек) поверхностного слоя неспособны поддержать целостность эпителиального пласта СОПР. Таким образом, вследствие повреждения базального слоя эпителия нарушается его способность целиком восполнять убыль клеток поверхностного слоя вследствие десквамации [133].
Полное восстановление эпителиального пласта происходит лишь после прекращения химиотерапии; вместе с тем процессы регенерации могут медленно осуществляться и на фоне введения низких доз цитостатиков, при этом их скорость определяется степенью угнетения пролиферативной активности эпителия и влиянием ряда клеточных и неклеточных факторов его микроокружения. Наиболее ярким проявлением репаративной регенерации служит восстановление целостности эпителия (реэпителизация) участков изъязвления. Фаза реэпителизации (заживления), как правило, продолжается у человека 12-16 сут и также зависит от многих факторов: скорости пролиферации эпителия, восстановления гемопоэза, нормализации слюноотделения, микробной флоры, отсутствия факторов, мешающих заживлению тканевого дефекта (например, инфекции и раздражения) [127].
Хотя особенности заживления изъязвлений при мукозите полости рта описаны в обширной клинической литературе, восстановительные процессы в эпителии на тканевом, клеточном и молекулярном уровне исследованы лишь фрагментарно. При этом клеточная кинетика репаративной регенерации значительно более подробно изучена на моделях мукозита, вызванного облучением: показано, что угнетение пролиферативной активности, приводящее к резкой атрофии эпителия, быстро сменяется ее активацией. [63, 65, 117].
Результаты гистохимического и цитофотометрического исследования
При этом доля этих клеток в глубоких отделах собственной пластинки возрастает в 1,2 раза (см. рис.24). В слизистой оболочке на ВП языка после 3-ей инъекции ЦФ доля тучных клеток в подслизистой основе снижается в 2 раза по сравнению с контрольными значениями, одновременно доля тучных клеток в непосредственной близости от базальной мембраны возрастает в 1,5 раза (рис. 25). На фоне отмены препарата количество тучных клеток в подслизистой основе увеличивается и на 20-е сутки после отмены превышает данный показатель в контрольной группе в 1,3 раза. Доля тучных клеток в непосредственной близости от базальной мембраны достигает контрольных значений наЮ-е сутки после отмены ЦФ, а затем уменьшается в 1,7 раза на 15-е и 20-е сутки после отмены препарата (см. рис. 25).
При кратковременном введении высоких доз цитостатика изменяется относительное содержание тучных клеток с различной степенью дегрануляции. После 3-й инъекции доля тучных клеток с сильной дегрануляцией увеличивается в 2,5 раза в слизистой оболочке на обеих поверхностях языка. Одновременно уменьшается доля тучных клеток с отсутствующей дегрануляцией почти в 3 раза на ДП и почти в 2,5 раза на ВП языка (рис. 26, 27). На 20-е сутки после отмены препарата доля клеток с сильной дегрануляцией в соединительной ткани ДП превышает данный показатель в контрольной группе в 1,5 раза, на ВП значение показателя возвращается к контрольной величине. Доля тучных клеток с отсутствующей дегрануляцией превышает контрольные значения почти в 2 раза на ДП языка и почти в 1,5 раза на ВП. Доля тучных клеток с умеренной дегрануляцией почти в 2,5 раза снижается по сравнению с контролем на 20-е сутки после отмены препарата как на ДП, так и на ВП (см. рис.26, 27). Относительный объем кровеносных сосудов. При введении высоких доз ЦФ относительный объем кровеносных сосудов в соединительнотканном компоненте достоверно уменьшается на обеих поверхностях. После 3-й инъекции цитостатика происходит снижение относительного объема кровеносных сосудов на 16% и 26% по сравнению с величиной показателя в контрольной группе на ДП и ВП соответственно (рис. 28, табл. 11). Максимальное снижение относительного объема кровеносных сосудов на 30% наблюдается на 10-е сутки после отмены препарата в соединительной ткани ВП языка. На 15-е и 20-е сутки после отмены цитостатика относительный объем кровеносных сосудов возрастает в обеих локализациях и значимо не отличается от контрольных показателей (см. рис. 28, табл. 11).
Группа контроля. Покровный эпителий. Активность СДГ. В группе контрольных животных продукты выявления СДГ определяются в виде мелкозернистого серого осадка диформазана, который равномерно распределён в цитоплазме клеток базального, шиповатого слоев покровного эпителия (рис. 29, 31). В роговом слое активность СДГ не определяется. Продукты реакции не выявляются в ядрах клеток. В базальном слое эпителия активность СДГ выше, чем в шиповатом. Активность СДГ статистически не различается на ДП и ВП языка.
Концентрация суммарных белков. В группе контрольных животных продукты реакции выявления суммарных белков окрашивают цитоплазму эпителиоцитов базального, шиповатого и зернистого слоев покровного эпителия, чешуйки рогового слоя (рис. 33,35) в желто-коричневый цвет. Продукты реакции выявления суммарных белков в роговом и шиповатом слоях эпителия на ДП в области сосочков языка и между ними, а также на ВП статистически не отличаются друг от друга. Наиболее интенсивная окраска отмечается в роговом слое эпителия во всех топографических зонах и превышает таковую в шиповатом слое на 50%.
Железистый эпителий. Активность СДГ. Продукты выявления СДГ определяются в в эпителиоцитах белковых и слизистых слюнных желез (рис. 37, 39), при этом в эпителиоцитах слизистых желез активность СДГ выше, чем в клетках концевых отделов белковых слюнных желез. Концентрация суммарных белков. Продукты реакции выявления суммарных белков окрашивают цитоплазму клеток концевых отделов белковых слюнных желез (рис. 41) в желто-коричневый цвет, содержание которых в сероцитах сопоставимо с их концентрацией в шиповатом слое покровного эпителия.
Концентрация гликопротеинов. ШИК-реакция выявляет высокое содержание гликопротеинов в мукоцитах слизистых и смешанных концевых отделов слюнных желез в группе контрольных животных (рис. 43).
Концентрация гликозаминогликанов. Окраска срезов альциановым синим обнаруживает синтетическую активность в мукоцитах слизистых и смешанных концевых отделов слюнных желез, вырабатывающих высокие концентрации гликозаминогликанов (рис. 45).
Экспериментальная группа. Покровный эпителий. Активность СДГ. После 3 инъекций ЦФ наблюдается значимое снижение активности СДГ как в базальном, так и шиповатом слоях эпителия (рис. 30, 32). Более выраженные изменения происходят на ДП языка в шиповатом слое в области сосочков, где активность фермента снижается на 30%, по сравнению с 25% в межсосочковой области и 15% на ВП языка (рис. 47, табл. 12). Активность фермента в базальном слое снижается на 26%, 25%, 18% в области сосочков, между сосочками и на ВП соответственно (рис. 48,табл. 13).
Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка при кратковременном введении высоких доз циклофосфана
Группа контроля. При визуальном анализе слизистой оболочки языка животных контрольной группы К2 не отличается от таковой у животных контрольной группы Кі(см. раздел З.1.1.).
Экспериментальная группа. Покровный эпителий. В слизистой оболочке языка на 16-е сутки введения умеренных доз ЦФ толщина эпителиального пласта изменяется на ВП и на ДП между сосочками языка и увеличивается в области сосочков языка. Утолщение эпителия происходит, преимущественно, за счет расширения зернистого слоя до 3-4 рядов и разрыхления рогового слоя. Кератогиалиновые гранулы зернистого слоя увеличиваются в размере. На 48-е сутки эксперимента отмечается атрофия и более редкое расположение сосочков языка на ДП, базофилия рогового слоя эпителия (рис. 64). Толщина эпителиального пласта уменьшается на обеих поверхностях языка, в большей степени на ВП. Истончение эпителиального пласта связано с выраженной редукцией шиповатого слоя во всех локализациях. Ядра клеток базального слоя лежат неупорядоченно, граница эпителия с соединительной тканью неотчётлива. Количество фигур митоза в базальном слое эпителия уменьшается во всех локализациях. На ДП наблюдается инфильтрация базального слоя эпителия лейкоцитами при одновременной инфильтрации соединительно ткани собственной пластинки (рис. 65). На 70-е сутки эксперимента сохраняется истончение эпителия на обеих поверхностях языка, более выраженное на ВП, однако, на ДП увеличивается количество фигур митоза в базальном слое эпителия. Роговой слой в области сосочков языка на ДП истончается, однако сохраняются участки с его разрыхлением.
После 8 инъекций ЦФ (16-е сутки опыта) визуально отмечается некоторое уменьшение размеров белковых концевых отделов и снижение высоты сероцитов. После 24 инъекций препарата данные изменения более выраженны, а также наблюдается уменьшение диаметра слизистых и смешанных концевых отделов желез. На 70-е сутки эксперимента (35 инъекций цитостатика) сохраняются выше описанные изменения, появляется вакуолизация цитоплазмы мукоцитов.
Собственная пластинка и подслизистая основа. На 16-е сутки введения цитостатика отмечается утолщение соединительнотканного компонента на ВП, тогда как его толщина на ДП не изменяется. В соединительной ткани на ВП значительно возрастает диаметр кровеносных сосудов и их кровенаполнение. На 48-е сутки эксперимента соединительнотканный компонент на ВП остается утолщенным, наблюдается разрыхление волокон соединительной ткани. Появляется некоторое утолщение собственной пластинки на ДП. Кровеносные сосуды расширены на обеих поверхностях, в большей степени на ВП (рис. 66). Значительно реже, чем в группе контроля, встречаются фибробласты и лейкоциты. Снижается количество тучных клеток, преобладают клетки с сильной и умеренной дегрануляцией. Тучные клетки часто располагаются вблизи базальной мембраны на обеих поверхностях языка (рис. 67). На 70-е сутки опыта сохраняется утолщение соединительнотканного компонента и расширение кровеносных сосудов на ВП. Утолщение собственной пластинки на ДП слабо выражено. Количество фибробластов и лейкоцитов и тучных клеток остается сниженным. Преобладают тучные клетки с умеренной дегрануляцией, сохраняется преимущественное расположение вблизи базальной мембраны на ДП и в глубоких отделах собственной пластинке на ВП.
Группа контроля. Покровный эпителий и собственная пластинка и подслизистая основа. Данные морфометрического исследования в группе К2 аналогичны данным в группе Кі(см. раздел 3.1.2.).
Экспериментальная группа. Покровный эпителий. Толщина эпителиального пласта в ответ на длительное введение умеренных доз ЦФ после 8 инъекций препарата значимо увеличивается на 17% на ДП в области сосочков языка и достоверно не изменяется в межсосочковой области на ДП на ВП (рис. 68, табл. 21). После 24 инъекций цитостатика толщина эпителиального пласта статистически значимо уменьшается во всех топографических зонах: на 21% - между сосочками и на сосочках языка на ДП, на 28% - на ВП. После 35 инъекций ЦФ сохраняется истончение эпителия на 18%, 17% и 20% в области сосочков, между сосочками языка и на ВП соответственно (см. рис. 68, табл. 21).
Толщина шиповатого слоя эпителия на обеих поверхностях языка не изменяется после 8 инъекций ЦФ и достоверно уменьшается после 24 инъекций препарата на 42%, 27%, 50% между сосочками языка, на сосочках языка и на ВП соответственно (рис. 69, табл. 22). После 35 инъекций сохраняется статистически значимое уменьшение толщины шиповатого слоя эпителия во всех топографических зонах: на 29%, 23%, 41% между сосочками языка, на сосочках языка и на ВП соответственно (см. рис. 69,табл. 22).
Толщина зернистого слоя эпители увеличивается на 50% в области сосочков языка на ДП после 8 инъекций препарата (рис. 70, табл. 23). После 24 и 35 инъекций статистически значимых отличий от контроля не наблюдается. Между сосочками языка на ДП и на ВП во все сроки эксперимента значимых различий с группой контроля нет (см. рис. 70, табл. 23).
Структурно-функциональная характеристика слизистой оболочки языка при длительном введении умеренных доз циклофосфана
На основании сравнительного анализа результатов гистологического, морфометрического и гистохимического анализа установлено, что СОПР у животных контрольных групп (Ki и Кг) по строению сходна с таковой у интактных животных. Это дает основание исключить влияние стресса, вызванного манипуляциями с животными, в качестве одной из возможных причин наблюдаемых изменений. Также нами были сопоставлены результаты исследования СОПР в двух контрольных группах (Ki и К2). По данным визуального анализа различия отсутствуют, количественные показатели также большей частью значимо не различались. Имеющиеся небольшие отличия, по всей видимости, связаны с естественной биологической вариабельностью.
Изучение морфофункциональных особенностей СОПР у животных контрольных групп показало, что по общей структурной организации и характеристикам отдельных компонентов она целиком соответствует описаниям, представленным в литературе. Так, в целом, эпителий ВП и ДП языка у исследуемых животных имеет структуру, типичную для этого органа у млекопитающих, и обладает некоторыми особенностями, характерными для мышей и крыс [30, 77, 97, 101]. В частности, ороговение эпителия в тех участках, где он в норме не ороговевает у многих млекопитающих животных и человека (например, на вентральной поверхности), отражает особенности питания грызунов и, по-видимому, является защитным приспособлением, препятствующим повреждению эпителия грубой пищей [9, 11,61, 123]. Барьерные свойства эпителия СОПР обеспечиваются благодаря особенностям его морфофункциональной организации, в частности, многочисленным межклеточным соединениям [123] и значительной толщине эпителиального пласта. Показатели толщины эпителиального пласта у исследованных мышей примерно совпадают с описанными в литературе [77, 78]. Целостность эпителиального пласта поддерживается благодаря его интенсивному обновлению. Митотическая активность эпителия на ДП и ВП языка, по нашим данным, значимо не различается и также лежит в пределах величин, приводимых различными исследователями [30, 52, 77, 78].
Наряду с покровным эпителием, в настоящей работе изучен железистый эпителий, расположенный в малых слюнных железах двух типов - задних белковых (Эбнера) и задних смешанных - преимущественно слизистых (Вебера). Последние у человека описаны как чисто слизистые, однако у мышей они содержат белковые полулуния и поэтому относятся к смешанным.
Важной характеристикой состояния собственной пластинки СОПР и подслизистой основы являются сведения о плотности расположения (концентрации) в них клеток различных типов. Полученные в настоящей работе количественные данные о плотности расположения фибробластов, гранулоцитов и агранулоцитов в соединительной ткани слизистой оболочки языка мышей контрольных групп, а также об относительном объёме сосудов в ней сравнимы с соответствующими данными литературы [50, 138]. Целостность эпителиального покрова, отсутствие клеточных инфильтратов в эпителии и соединительнотканном компоненте позволяют исключить вероятность воспалительных или дегенеративных заболеваний у изученных животных. Плотность расположения тучных клеток в соединительной ткани слизистой оболочки языка мышей согласуется с описанной в литературе [102]. Большая часть тучных клеток находятся вблизи сосудов, что соответствует сведениям об их преимущественной периваскулярной локализации [12]. Преобладают клетки с отсутствующей и слабо выраженной дегрануляцией, что свидетельствует об их умеренной функциональной активности [12, 23].
Представленные сведения позволяют считать слизистую оболочку языка изученных животных адекватной моделью для анализа изменений, развивающихся в СОПР под влиянием цитостатиков. Необходимо отметить, что исследование слизистой оболочки языка даёт уникальную возможность одновременного учета на одном объекте изменений, возникающих в различных топографических зонах СОПР (ВП, ДП языка, участки в области нитевидных сосочков и между ними), сравнительного анализа перестройки покровного и железистого эпителия (с учетом особенностей в малых железах клеток двух различных типов), сопоставления динамики тканевых и клеточных изменений в эпителии, собственной пластинке и подслизистой основе.
