Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1. Современные представления о селезенке как об органе иммуногенеза 11
1.1. Гистологическое строение селезенки 12
1.2. Нейромедиаторы селезенки 16
1.3. Клеточный состав селезенки 20
1.4. Морфологическое строение селезенки при
иммуномодулирующих воздействиях 26
2. Иммуномодулирующее влияние акупунктуры 27
3. Иммуномодулирующее влияние низкоинтенсивного лазерного излучения 33
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 36
2.1. Материалы исследования 36
2.2. Методы исследования 39
ГЛАВА 3. Собственные исследования 42
3.1. Морфофункциональная характеристика селезенки интактной группы мышей 42
3.2. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 1 ч после иглоукалывания в точку GV 14 52
3.3. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 1 ч после иглоукалывания в точку LI 11 59
3.4. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 1 ч после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 66
3.5. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 6 ч после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 74
3.6. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 8 ч после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 83
3.7. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 24 ч после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 93
3.8. Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 1 ч после инфракрасного низкоинтенсивного лазерного излучения на точку GV 14 102
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 111
Заключение 124
Выводы 127
Практические рекомендации 128
Список литературы
- Нейромедиаторы селезенки
- Иммуномодулирующее влияние низкоинтенсивного лазерного излучения
- Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 1 ч после иглоукалывания в точку GV 14
- Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 8 ч после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11
Введение к работе
Актуальность темы. Среди методов функциональной регуляции организма особое место занимает акупунктура как способ воздействия на биологически активные точки (Табеева Д.М., 2010; Cabioglu М.Т. et al., 2008; Chen J. et al., 2012). С древних времен к нам дошли разные вариации этого метода - воздействие иглой, полынной сигарой, металлическим шариком и др. В XX веке к ним добавились электропунктура и лазеропунктура, в том числе и инфракрасное низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) на точки акупунктуры (ТА) (Вогралик В.Г. и др., 2001; Самосюк И.З. и др., 2004; Kim H.Y. et al., 2010; Vanderploeg, К. et al., 2009).
В последнее время в связи с ухудшением экологической обстановки, увеличением количества аллергических заболеваний и иммунодефицитных состояний усилился интерес практических врачей к акупунктуре как к методу, улучшающему работу иммунной системы и увеличивающему резервные возможности организма (Ding S.S. et al., 2014; Zhang R. et al., 2014). Установлено, что иглоукалывание (ИУ) в зависимости от выбора точек оказывает регулирующее действие на все звенья иммунитета. Однако в большей степени акупунктура действует на клеточный иммунитет и факторы неспецифической резистентности организма (Авдей Г.М. и др., 2006; Hisamitsu Т. et al., 2002). Во многом этот процесс формируется за счет изменения активности лимфоидных органов, в том числе селезенки (Вогралик В.Г., 2001; Гурьянова Е.А. и др., 2009, Табеева Д.М., 2010). Под действием лазерного излучения возникают ответные комплексные адаптационные нервно-рефлекторные и нервно-гуморальные реакции с активацией симпатоадре-наловой и иммунной систем (Гуляр С.А. и др., 2005).
Известно, что одним из звеньев реализации механизма акупунктурной им-муномодуляции является изменение активности биологически активных веществ (нейроаминов), которые играют роль трансмиттеров и участвуют в местной регуляции многих органов (Любовцева Е.В. и др., 2010; Гурьянова Е.А., 2011).
В настоящее время известно значение нейромедиаторных структур в реализации нейрогуморальной регуляции селезенки в первые часы после ИУ (Гурьянова Е.А., 2011). Однако в современной литературе отсутствуют детальные данные об изменении содержания нейромедиаторов, количестве тучных клеток (ТК), Т-лимфоцитов и макрофагов селезенки и об их временной соподчиненности при акупунктурных методах воздействия в 1-е сутки после процедуры.
Таким образом, исследование морфологических характеристик структур селезенки после акупунктурных методов воздействия позволило бы конкретизиро-
4 вать показания к данным методам лечения, стать основой исследования механизма акупунктурной регуляции и выявить роль иммунокомпетентных клеток селезенки в реализации иммуномодулирующего эффекта акупунктуры.
Цель: выявить изменение цитоморфологического и нейромедиаторного статуса селезенки мышей при воздействии иглоукалывания и инфракрасного низкоинтенсивного лазерного излучения во временном аспекте.
Задачи:
-
Изучить содержание биогенных аминов (гистамина, катехоламинов (КА), серотонина (СТ)) и количество клеточных элементов (мегакариоцитов, плазмоци-тов, клеток с картинами митоза, ТК) в селезенке через 1 ч после ИУ в одну ТА (GV 14 или LI 11) или одновременно в две ТА (GV 14 и LI 11), обладающие им-мунорегуляторным действием.
-
Исследовать содержание биогенных аминов (гистамина, КА, СТ) и количество клеточных элементов (мегакариоцитов, плазмоцитов, клеток с картинами митоза, ТК) в селезенке после ИУ в точки GV 14 и LI 11 через 6, 8, 24 ч.
-
Определить особенности локализации и количественного распределения СОЗ+-клеток (зрелых Т-лимфоцитов) и СШ8+-клеток (макрофагов) в зонах селезенки мышей после ИУ в точки GV 14 и LI 11 через 24 ч после процедуры.
-
Сравнить содержание биогенных аминов (гистамина, КА, СТ) и количество клеточных элементов (мегакариоцитов, плазмоцитов, клеток с картинами митоза, ТК) в селезенке через 1 ч после воздействия ИУ и инфракрасным НИЛИ на точку GV 14.
Научная новизна. Впервые описана динамика содержания биогенных аминов (гистамина, КА, СТ) в структурах селезенки мышей через 1 ч после ИУ в одну ТА (GV 14 или LI 11) и через 1, 6, 8 и 24 ч после ИУ в точки GV 14 и LI 11, а также через 1 ч после воздействия инфракрасным НИЛИ на точку GV 14.
Выявлены корреляционные связи между биогенными аминами (гистами-ном, КА, СТ) в селезенке мышей через 1 ч после ИУ в одну ТА (GV 14 или LI 11) и через 1, 6, 8 и 24 ч после ИУ в точки GV 14 и LI 11, а также через 1 ч после воздействия инфракрасным НИЛИ на точку GV 14.
Впервые описаны особенности локализации и количественного распределения иммунокомпетентных клеток (CD3+ и CD68+) в зонах селезенки мышей после ИУ в точки GV 14 и LI 11 через 6, 8 и 24 ч.
Впервые изучено в сравнительном аспекте влияние на селезенку ИУ и инфракрасного НИЛИ на точку GV 14.
5 Положения диссертации, выносимые на защиту
-
ИУ в точку GV 14 увеличивает количество мегакариоцитов в красной пульпе, в точку LI 11 - увеличивает число выявляемых адренергических нервных волокон, а в точки GV 14 и LI 11 - вызывает ускорение размножения клеток во всех зонах лимфоидного узелка селезенки через 1 ч после процедуры.
-
Инфракрасное НИЛИ на точку GV 14 увеличивает содержание гистамина в гранулярных люминесцирующих клетках (ГЛК) герминативного центра, тогда как ИУ в точку GV 14 увеличивает содержание гистамина в лимфоцитах периартери-альной лимфоидной муфты (ПАЛМ) селезенки через 1 ч после процедуры.
Теоретическая и практическая значимость работы
Полученные данные дополняют знания об организации лимфоидных узелков селезенки и входящих в их состав клеточных элементов при воздействии ИУ. Выявленные морфофункциональные особенности селезенки после ИУ в разные комбинации точек позволяют объяснить специфичность применения различных ТА в клинической практике.
Полученные в результате настоящего исследования данные о распределении клеток красной пульпы селезенки после акупунктурных методов воздействия могут быть использованы в качестве базовых в научно-исследовательских работах и при проведении экспериментов на лабораторных животных.
Обнаруженная иммуномодулирующая активность акупунктурных методов (ИУ и инфракрасного НИЛИ) подтверждает перспективность их дальнейшего изучения в качестве возможного способа иммунопрофилактики и позволяет расширить показания к данным методам лечения.
Результаты работы являются основанием для продолжения изучения морфогенеза лимфоидной ткани селезенки, ее роли в развитии иммунного ответа на акупунктуру.
Полученные в работе данные представляют интерес для клинической акупунктуры с точки зрения гистофизиологического обоснования преимущества инфракрасного НИЛИ.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на VII Международном конгрессе «Здоровье и образование - XXI век» (Москва, 2007); X, XII Межрегиональном конференции-фестивале научного творчества учащейся молодежи «Юность большой Волги» (Чебоксары, 2008, 2010); XVI Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2009); Международной научно-практической конференции «Урбанизация и Здо-
ровье» (Киев, 2010); 22-й, 24-й Европейской студенческой конференции (Берлин, 2010, 2013); 84-й конференции студенческого научного общества «Мечниковские чтения-2011» (Санкт-Петербург, 2011); 5-й Международной медицинской конференции (ЮМС 2012) (США, 2012); Всероссийской научной интернет - конференции с международным участием «Спектрометрические методы анализа в науке и технике» (Москва, 2013); XII Конгрессе Международной ассоциации морфологов и VII Съезде Российского научного медицинского общества анатомов, гистологов и эмбриологов (Тюмень, 2014).
Внедрение результатов исследования
Основные положения диссертации внедрены в клиническую работу БУ «Первая Чебоксарская городская больница имени П.Н. Осипова», а также используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени П.Н. Ульянова» и АУ Чувашской Республики «Институт усовершенствования врачей» МЗСР ЧР. Рационализаторские предложения №1164 «Способ акупунктурой стимуляции нейромедиаторных структур селезенки крыс в иммунном ответе», выданное 24.12.2010 г., и №1173 «Способ иммунной активации нейромедиаторных структур селезенки при помощи лазерного излучения», выданное 23.06.2015 г., применяются в исследовательской работе кафедры общей и клинической морфологии и судебной медицины ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени П.Н. Ульянова».
Публикации по теме диссертации
По теме диссертации опубликовано 25 печатных работ, в том числе 7 в ведущих изданиях, рекомендованных ВАК России.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 174 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 239 источников (104 отечественных, 135 иностранных публикаций), списка иллюстративного материла, списка сокращений, 9 приложений. Диссертация иллюстрирована 9 таблицами и 72 рисунками, из которых 27 - микрофотографии.
Нейромедиаторы селезенки
ПАЛМ делится на глубокую и периферическую части. В периферической части ПАЛМ преобладают Т-лимфоциты, однако в ней встречаются и В-лимфоциты, поступившие сюда в результате миграции из маргинальной зоны и лимфоидных узелков селезенки, здесь также присутствуют специализированные макрофаги [186].
Лимфоидные узелки представляют собой скопления Т- и В-лимфоцитов, плазмоцитов и макрофагов в петлях ретикулярной ткани [193, 196]. Лимфоидные узелки с герминативным центром называют первичными, а без герминативного центра – вторичными [58].
Вторичные лимфоидные узелки возникают, когда специфические В-лимфоциты принимают участие в иммунных реакциях селезенки, и существуют ограниченный срок. Первичные лимфоидные узелки имеют типичную структуру: состоят из мелких рециркулирующих В-лимфоцитов, экспрессирующих иммуноглобулины (Ig: immunoglobulin) M и IgD. В-лимфоциты проходят через сеть ФДК [212]. У грызунов рециркулирующие В- и Т-лимфоциты первоначально входят в маргинальную зону. Из маргинальной зоны В-лимфоциты направляются в периферическую часть ПАЛМ, а затем в мантийную зону вторичных узелков. Если антиген не встречается, В-клетки покидают селезенку через красную пульпу. T-лимфоциты, напротив, непосредственно направляются в ПАЛМ, где они оседают в течение некоторого времени, прежде чем покинут селезенку через красную пульпу.
Если рециркулирующие В-лимфоциты встречают специфический антиген, который находится на поверхности ФДК в виде иммунных комплексов, они «арестовывают» его в пределах лимфоидного узелка [187].
Т-лимфоциты, активированные дендритными клетками, направляются в периферическую часть ПАЛМ. Там они сталкиваются с предварительно активированными рециркулирующими В-лимфоцитами, которые могут быть связаны со специфическим антигеном в крови через их поверхностные Ig. Кроме дендритных клеток, B-клетки также могут презентировать антиген CD4+ Т-лимфоцитам. Таким образом, активируются В- и Т-лимфоциты «арестованные» в периферической части ПАЛМ, если они распознаются антигеном. Адекватная помощь от Т-клеток приводит к пролиферации и дифференцировке B-лимфоцитов в плазмоциты в периферической части ПАЛМ и вокруг маргинальной зоны. Эти скопления В-клеток называются экстрафолликулярными очагами [209]. В-клетки персистируют в течение короткого периода (около 10 дней), после однократного введения антигена, а потом подвергаются апоптозу [139, 189]. Они формируют условия для развития герминативных центров. Комплексы антиген-антитело, образованные Ig в экстрафолликулярных очагах, локализуются на поверхности ФДК в первичных лимфоидных узелках. ФДК захватывают такие комплексы с помощью Fc-рецепторов комплемента и сохраняют их в течение нескольких месяцев и даже лет. «Арест» рециркулирующих B-клеток, проходящих через лимфоидные узелки, происходит, когда они встречаются с соответствующим антигеном. Происходит процесс пролиферации, и начинается процесс гипермутаций тех частей их генов Ig, которые кодируют антигенсвязывающие белки. Этот процесс может привести к повышению аффинности связывания по отношению к антигену и к позитивному отбору соответствующих В-клеток. Гипермутация генов Ig, как полагают, ограничена герминативным центром. Таким образом, гипермутация генов Ig может быть использована для идентификации В-клеток, поступивших в герминативный центр [209].
Функцией герминативного центра селезенки является антиген зависимая пролиферация и дифференцировка В-лимфоцитов [141, 239]. Возможно, ФДК направляют рециркулирующие В-лимфоциты к первичным лимфоидным узелкам и играют решающую роль в клеточной дифференцировке внутри герминативного центра [209]. В каждом первичном лимфоидном узелке присутствуют макрофаги, тогда как во вторичных узелках обнаруживаются лишь их «остатки». CD4+ Т-лимфоциты внутри первичных узелков распределены равномерно, внутри вторичных – локализуются на границе герминативного центра и мантийной зоны [67].
ПАЛМ и лимфоидные узелки окружены маргинальной зоной, которая отделяет их от красной пульпы. Маргинальная зона отделятся от ПАЛМ и лимфоидных узелков кровеносными сосудами (маргинальным синусом). Эндотелий маргинального синуса, обращенный к лимфоидному узелку – перфорирован, обеспечивая свободный доступ антигенов, эритроцитов, рециркулирующих В-лимфоцитов в маргинальную зону [194]. Маргинальная зона отличается от окружающей ее красной пульпы более плотным расположением лимфоцитов. Пространство маргинальной зоны не выстлано эндотелиальными клетками, хотя она содержит эритроциты. Таким образом, маргинальная зона может рассматриваться как часть «открытого» кровообращения селезенки [79].
Среди В-лимфоцитов маргинальной зоны различают В-клетки памяти, которые образовались в ходе ответа на антигены, а также незрелые В-лимфоциты, поступившие из кровотока [114]. В случае встречи с антигенами незрелые В-клетки мигрируют в герминативный центр и ПАЛМ, где подвергаются процессам пролиферации и дифференцировки [177].
«Соединительные мостики», представленные плазмобластами, соединяют тяжи красной пульпы с глубокой частью ПАЛМ [185]. Эти соединения указывают путь, по которому происходит миграция плазмобластов в красную пульпу. Следует отметить, что в ходе этой миграции плазмобласты дифференцируются в плазмоциты [151].
Основной функцией красной пульпы селезенки является удаление чужеродных веществ из кровотока [209]. Красная пульпа представлена селезеночными тяжами (тяжами Бильрота), а также системой синусов, расположенной между ними. Тяжи Бильрота представлены лимфоцитами, плазматическими клетками, макрофагами, гранулоцитами, эритроцитами и тромбоцитами, расположенными в соединительной ткани. Терминальные артериолы красной пульпы, вытекающие из центральных артерий, непосредственно открываются в селезеночных тяжах. Тяжи Бильрота являются частью «открытого» (медленного) кровообращения селезенки. Синусы селезенки представляют собой специализированные сосуды, которые могут быть соединены с другими терминальными ветвями центральной артерии. Они рассматриваются как «закрытая» (быстрая) часть кровообращения селезенки [79]. Следует отметить, что селезенка мышей является органом кроветворения, в котором, в отличие от человека, происходит дифференцировка не только клеток лимфоидного, но и гранулоцитарного, эритроцитарного и мегакариоцитрного ростков [98].
При люминесцентно-морфологических методах исследования среди ретикулярной ткани красной пульпы селезенки встречаются ГЛК [83]. Большинство лимфоцитов сети ретикулярных волокон представлены CD8+-клетками [223]. Эти клетки участвуют в регуляции иммунного ответа, уничтожают опухолевые и вирусные клетки [147, 223].
Иммуномодулирующее влияние низкоинтенсивного лазерного излучения
Корреляционная связь по гистамин/гистамин между люминесцирующими структурами селезенки мышей между ГЛК красной пульпы и лимфоцитами герминативного центра изменила знак и стала сильной положительной (Таблица 3). Сильные отрицательные корреляционные связи обнаружены в парах ГЛК герминативного центра/лимфоциты герминативного центра и ГЛК герминативного центра/ГЛК красной пульпы.
По взаимодействию КА/КА в парах: лимфоциты герминативного центра и лимфоциты ПАЛМ, ГЛК красной пульпы и лимфоциты герминативного центра, ГЛК красной пульпы и клетки красной пульпы выявлены сильные положительные связи.
В парах: лимфоциты герминативного центра/клетки красной пульпы, лимфоциты ПАЛМ/клетки красной пульпы, ГЛК красной пульпы/лимфоциты ПАЛМ обнаружены сильные отрицательные связи.
По взаимодействиям СТ/СТ выявлена сильная положительная связь ГЛК герминативного центра/лимфоциты герминативного центра. В парах: ГЛК герминативного центра/лимфоциты ПАЛМ, лимфоциты герминативного центра/лимфоциты ПАЛМ обнаружены сильные отрицательные корреляционные связи.
Таким образом, через 1 ч после ИУ в точку GV 14 увеличивается количество мегакариоцитов и появляются незрелые формы клеток миелоидного ряда. Вслед за этим усиливаются взаимосвязи между ГЛК, что свидетельствует о возможном усилении синтеза нейроаминов в этих клетках с увеличением выброса квоты нейроаминов в межклеточное пространство.
После ИУ в точку LI 11 в срезах селезенки мышей, окрашенных гематоксилином и эозином, выявлены лимфоидные узелки разных размеров.
Количество мегакариоцитов в красной пульпе по сравнению с контрольной группой не изменяется, однако, по сравнению с группой мышей после ИУ в ТА GV 14 – уменьшена в 9,98 раз (Приложение 1).
Количество клеток с картинами митоза в красной пульпе больше на 22,77% по сравнению с контрольной группой животных (Приложение 1).
В срезах селезенки мышей, окрашенных по А. Унна, ТК не выявляются. Однако, в мантийной и маргинальной зоне выявляются шарообразные группы лимфоцитов.
В срезах селезенки мышей, обработанных по методу Кросса, количество ГЛК в герминативном центре больше по сравнению с контрольной группой в 2,04 раза. Количество ГЛК в красной пульпе больше по сравнению с контрольной группой в 3,35 раза и увеличивается по сравнению с группой мышей после ИУ в ТА GV 14 – в 2,07 раза (Приложение 4).
В красной пульпе ГЛК образуют группы до 16 в одном поле зрения. ГЛК светятся тускло, гранулы не всегда различимы. Есть клетки, в которых светятся 1-2 гранулы, в других – светятся все, но очень тускло. В герминативном центре выявляются до 6 слабо светящихся ГЛК в одном поле зрения. Ярко люминесцирует стенка центральной артерии, в ПАЛМ встречаются 2 ГЛК в одном поле зрения (Рисунок 21). Между лимфоидными узелками определяются ТК до 5 в одном поле зрения, они имеют цельные ядра, которые не светятся.
Содержание гистамина по сравнению с контрольной группой больше в лимфоцитах герминативного центра и в клетках красной пульпы – на 34,32% и на 62,09% соответственно, а в лимфоцитах ПАЛМ – меньше в 3,19 раза. По сравнению с группой мышей после ИУ в точку GV 14 содержание гистамина уменьшается: в ГЛК герминативного центра – на 19,31%, в ГЛК красной пульпы – на 46,24%, в лимфоцитах ПАЛМ – в 4,35 раза, в клетках красной пульпы – на 25,31% (Рисунок 22, Приложение 5).
В срезах селезенки мышей, обработанных по методу Фалька-Хиларпа, на границе красной и белой пульпы определяется цепочка из ГЛК (Рисунок 21). Одновременно здесь увеличивается число выявляемых адренергических нервных волокон до 6 в одном поле зрения (Рисунок 20). Содержание КА по сравнению с контрольной группой меньше: в ГЛК красной пульпы – на 18,46%, в клетках красной пульпы – на 28,01%, а в лимфоцитах ПАЛМ больше – на 68,88%. Содержание КА в ГЛК и лимфоцитах герминативного центра уменьшается по сравнению с группой мышей после ИУ в ТА GV 14 – в 2,27 раза и на 22,46% соответственно, а в ГЛК красной пульпы и в лимфоцитах ПАЛМ – увеличивается на 16,90% и в 2,45 раза соответственно (Рисунок 23, Приложение 5).
Содержание СТ по сравнению с контрольной группой меньше: в ГЛК герминативного центра – на 17,76%, в лимфоцитах герминативного центра – на 22,49%, в клетках красной пульпы – на 36,17%, а в лимфоцитах ПАЛМ – увеличивается на 59,43%. Содержание СТ по сравнению с группой мышей после ИУ в точку GV 14 в ГЛК и в лимфоцитах герминативного центра меньше в 2,49 раза и на 19,15% соответственно, а в ГЛК красной пульпы и в лимфоцитах ПАЛМ больше на 19,54% и на 98,93% соответственно (Рисунок 24, Приложение 5). Is остается выше единицы. По сравнению с группой мышей после ИУ в точку GV 14 Is увеличен во всех структурах, кроме лимфоцитов ПАЛМ, где он уменьшен на 20,90% (Рисунок 25, Приложение 5).
Содержание катехоламинов в структурах селезенки мышей через 1 ч после иглоукалывания в точку LI 11 (контрольной и опытной групп) и через 1 ч после иглоукалывания в точку GV 14 (по оси ординат: у.е.) ИУ – иглоукалывание, ГЛК – гранулярные люминесцирующие клетки; p0,01 по сравнению с показателями в контрольной группе, ## p0,01 по сравнению с показателями в группе мышей после ИУ в GV 14 120 90 60 30 ГЛК герминативного центра
Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 1 ч после иглоукалывания в точку GV 14
Содержание гистамина по сравнению с контрольной группой больше: в герминативном центре и в красной пульпе – на 56,84% и на 94,12% соответственно. Содержание гистамина увеличивается по сравнению с предыдущим сроком: в ГЛК герминативного центра – в 3,85 раза, в ГЛК красной пульпы – в 3,68 раза, в герминативном центре – в 5,15 раза, в ПАЛМ – в 3,98 раза и в красной пульпе – в 9,07 раза (Рисунок 57, Приложение 9).
Содержание КА по сравнению с контрольной группой больше: в ГЛК герминативного центра – на 66,18%, в ГЛК красной пульпы – на 81,15%, в красной пульпе – на 25,62%, а в ПАЛМ – меньше в 2,00 раза. По сравнению с группой мышей через 8 ч после ИУ содержание КА уменьшается в ГЛК красной пульпы на 33,57% (Рисунок 58, Приложение 9).
Содержание СТ по сравнению с контрольной группой больше: в ГЛК герминативного центра – на 71,16%, в ГЛК красной пульпы – на 50,67%, в красной пульпе – на 37,79%, а в ПАЛМ – меньше на 48,59%. По сравнению с группой мышей через 8 ч после ИУ содержание СТ уменьшается в ГЛК красной пульпы на 31,16% (Рисунок 59, Приложение 9).
Значения Is остаются выше единицы и практически не изменяются по сравнению с предыдущим сроком (Рисунок 60, Приложение 9).
В паре между ГЛК красной пульпы и лимфоцитами ПАЛМ обнаружена сильная положительная корреляционная связь по гистамин/гистамин. Между ГЛК герминативного центра и лимфоцитами ПАЛМ, а также между ГЛК герминативного центра и ГЛК красной пульпой выявлены сильные отрицательные корреляционные связи гистамин/гистамин (Таблица 8).
По корреляционным взаимодействиям КА/КА сильная положительная связь выявлена между ГЛК герминативного центра и лимфоцитами ПАЛМ. Сильные отрицательные корреляционные связи выявлены между: ГЛК герминативного центра и лимфоцитами герминативным центром, ГЛК герминативного центра и ГЛК красной пульпы, ГЛК красной пульпы и лимфоцитами ПАЛМ. По СТ/СТ выявлены слабые корреляционные связи.
В срезах контрольной группы животных отмечается системное расширение венозных сосудов красной пульпы.
Маргинальная зона Красная пульпа ч после ИУ в ТА GV 14 и LI 11 Контрольная руппа ч после ИУ в ТА GV 14 и LI Рисунок 55 – Распределение CD3+-клеток в селезенке мышей через 8 ч и через 24 ч (контрольной и опытной групп) после иглоукалывания в ТА GV 14 и LI 11 (по оси ординат: количество клеток/мм2)
ПАЛМ – периартериальная лимфоидная муфта, ИУ – иглоукалывание p0,01 по сравнению с показателями в контрольной группе; ## p0,01 по сравнению с показателями в предыдущей группе
Клетки красной пульпы ч после ИУ в GV 14 и LI Контрольная группа ч после ИУ в GV 14 и LI Рисунок 56 – Распределение CD68+-клеток в селезенке группы мышей через 8 ч и через 24 ч (контрольной и опытной групп) после иглоукалывания в ТА GV 14 и LI 11 (по оси ординат: количество клеток/мм2) ПАЛМ – периартериальная лимфоидная муфта, ИУ – иглоукалывание. p0,01 по сравнению с показателями в контрольной группе; ## p0,01 по сравнению с показателями в предыдущей группе
Клетки красной пульпы ч после ИУ в GV 14 и LI Контрольная группа ч после ИУ в GV 14 и LI Рисунок 58 – Содержание катехоламинов в структурах селезенки мышей через 8 ч и через 24 ч (контрольной и опытной групп) после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 (по оси ординат: у.е.) ИУ – иглоукалывание, ГЛК – гранулярные люминесцирующие клетки; p0,01 по сравнению с показателями в контрольной группе; ## p0,01 по сравнению с показателями в предыдущей группе Клетки красной пульпы ч после ИУ в GV 14 и LI Контрольная группа ч после ИУ в GV 14 и LI Рисунок 59 - Содержание серотонина в структурах селезенки мышей через 8 ч и через 24 ч (контрольной и опытной групп) после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 (по оси ординат: у.е.) ИУ— иглоукалывание, ГЛК - гранулярные люминесцирующие клетки; р 0,05; р 0,01 по сравнению с показателями в контрольной группе; ##р 0,01 по сравнению с показателями в предыдущей группе
Серотониновый индекс структур селезенки мышей через 8 ч и через 24 ч (контрольной и опытной групп) после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11 (по оси ординат: у.е.) ИУ— иглоукалывание, ГЛК — гранулярные люминесцирующие клетки; р 0,05; р 0,01 по сравнению с показателями в контрольной группе; #р 0,05; ##р 0,01 по сравнению с показателями в предыдущей группе
Таким образом, остается неизменной отрицательная герминативного центра и ГЛК красной пульпы по гистамин/гистамин, что еще раз подтверждает антагонизм ГЛК разной локализации. Содержание гистамина остается увеличенным в ГЛК герминативного центра и в ГЛК красной пульпы. Происходит дальнейшее формирование лимфоидных узелков.
Морфофункциональная характеристика селезенки мышей через 8 ч после иглоукалывания в точки GV 14 и LI 11
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о специфичности изучаемых ТА, так ИУ в GV 14 в большей степени влияет на кроветворную функцию селезенки, проявляющееся увеличением количества выявляемых мегакариоцитов и клеток миелоидного ряда, а при ИУ в LI 11 – увеличивается число выявляемых адренергических нервных волокон и усиливается влияние вегетативной нервной системы на биоаминное обеспечение селезенки. В свою очередь одновременное ИУ в GV 14 и LI 11 приводит к усилению иммуномодулирующего эффекта, проявляющегося ускорением размножения клеток во всех зонах лимфоидного узелка.
После того, как нами были изучены изменения, происходящие в селезенке после ИУ в разные комбинации ТА, появилась возможность выявить особенности реакции структур селезенки мышей через 6, 8 и 24 ч после одновременного ИУ в ТА GV 14 и LI 11.
Через 6 ч после ИУ в ТА GV 14 и LI 11 осуществляется усиленное размножение клеток в ПАЛМ, т.е. образование Т-лимфоцитов. Герминативные центры лимфоидного узелка наоборот, «оголяются», за счет выброса лимфоцитов в кровь. Через 8 ч герминативные центры лимфоидных узелков расширены, в них, а также в ПАЛМ наблюдается неравномерное размножение лимфоцитов. Около центральной артерии наблюдается разрежение стромы, подтверждающее выброс лимфоцитов в кровеносные сосуды. Через 24 ч после ИУ идет образование новых лимфоидных узелков: происходит обновление всей клеточной популяции В- и Т-лимфоцитов.
Количество мегакариоцитов постепенно увеличивается через 6 ч после ИУ, достигает максимальных значений через 8 ч после процедуры, а к 24 ч – приближается к значениям контрольной группы.
Плазмоклеточная реакция (увеличение числа плазматических клеток по сравнению с контрольной группой) появляется через 8 ч после процедуры, не является постоянной и меняет свою локализацию. Так, по истечении 8 ч после ИУ плазмоклеточная реакция наблюдается в красной пульпе, через 24 ч после эксперимента – в маргинальной зоне селезенки. Увеличение числа плазматических клеток связано с интенсивностью гуморальных иммунологических реакций [26, 73]. Кроме того, максимальное количество плазмоцитов через 8 ч после ИУ совпадает с увеличением количества эозинофилов. Известно, что эозинофилы обладают высокой восприимчивостью к антигенным влияниям, их формирование опережает формирование плазмоцитов [22, 106].
Количество клеток с картинами митоза в красной пульпе увеличивается через 6 ч после ИУ, достигает максимума к 8 ч после процедуры, а к 24 ч – приближается к значениям интактной группы.
Через 6 ч после ИУ увеличивается количество -метахроматичных ТК как под капсулой, так и около трабекул, что говорит о созревании ТК, а преобладание тотально дегранулированных форм ТК – об их активации [29, 50, 100]. К 24 ч после процедуры популяции ТК начинают восстанавливаться, их количество максимально в эксперименте.
Поскольку гепарин является инактиватором нейроамиов, ТК вырабатывается гепарин и происходит его выброс в межклеточное пространство вследствие выброса нейроаминов [231].
В герминативном центре лимфоидного узелка количество CD3+-клеток уменьшается через 6 ч после ИУ, через 8 ч – увеличивается и приближается к значениям интактной группы, а через 24 ч – вновь уменьшается. Количество СD3+ лимфоцитов в ПАЛМ и маргинальной зоне увеличивается по сравнению с контрольной группой через 6 ч после ИУ, через 8 ч – уменьшается, а к 24 ч – увеличивается и достигает максимальных значений в эксперименте. Количество CD3+-клеток постепенно нарастает в красной пульпе, достигая максимальных значений к концу эксперимента. В герминативном центре, ПАЛМ и маргинальной зоне происходит волнообразные колебания количества CD3+-клеток, что говорит о синусоидальном изменение количества лимфоцитов, подчиняясь общему физиологическому ритму.
Кроме того, уменьшение количества CD3+-клеток в герминативном центре через 24 ч после ИУ, очевидно связано с выбросом зрелых, дифференцированных лимфоцитов в кровь, т.к. как на микрофотографиях можно обнаружить «оголение» стромы в красной пульпе селезенки (Рисунок 70).
Изменения количества CD3+- и CD68+-клеток в герминативном центре носят реципрокный характер в течение 24 ч после ИУ (Рисунок 69).
В герминативном центре лимфоидного узелка количество CD68+-клеток увеличивается через 6 ч после ИУ, через 8 ч – уменьшается, а через 24 ч – увеличивается и приближается к значениям интактной группы. Количество CD68+-клеток постепенно нарастает в ПАЛМ и в красной пульпе, достигая максимальных значений к концу эксперимента. В маргинальной зоне количество CD68+-клеток постепенно увеличивается, достигает максимума к 8 ч после ИУ, а через 24 ч – уменьшается, но остается выше значений интактной группы (Рисунок 69). Увеличение количества CD68+-клеток в герминативном центре через 24 ч после ИУ свидетельствует с одной стороны об усилении иммунного процесса, а с другой – о появлении гибнущих лимфоцитов.
Возможно, снижению уровня гистамина через 6 ч после ИУ в ТА GV 14 и LI 11 может способствовать антагонистическое влияние протеинкиназы Р38 – фермента, участвующего в процессе дифференцировки незрелых дендритных клеток в зрелые и препятствующего их апоптозу [104].
Минимальная концентрация иммуносупрессирующего медиатора гистамина в лимфоцитах герминативном центре лимфоидного узелка селезенки мышей по истечении 8 ч после ИУ совпадает с уменьшением его выработки ГЛК герминативного центра, что оказывает благоприятное влияние на развитие и дифференцировку В-лимфоцитов [62].
Известно, что гистамин, взаимодействуя с Н2-рецепторами макрофагов, подавляет перекисное окисление НАДФ-Н оксидазы, тем самым, защищая NK-клетки и Т-лимфоциты от апоптоза [149]. Кроме того, в сочетании с другими медиаторами (СТ) и гепарином, гистамин оказывает иммуномодулирующее влияние на лейкоцитарную реакцию при воспалении [41]. Можно предположить, что повышение содержания гистамина в ГЛК герминативного центра, в ГЛК красной пульпы, в лимфоцитах герминативного центра селезенки, в лимфоцитах ПАЛМ и в клетках красной пульпе через 24 ч после ИУ является одним из регуляторных механизмов подавления апоптоза Т-лимфоцитов в селезенке, тем самым оказывая иммуномодулирующий эффект.