Введение к работе
Актуальность темы. Одной из актуальных задач российской фармацевтической науки и практики является расширение арсенала эффективных и безопасных отечественных лекарственных средств, в том числе растительного происхождения.
Растительные препараты, содержащие природный комплекс полифеноль-ных соединений, полисахаридов, органических кислот и других биологически активных веществ (БАВ), обладают широким спектром фармакотерапевтиче-ского действия: антиоксидантным, антигипоксантным, ангиопротекторным, ан-тиатеросклеротическим и многими другими.
В качестве импортозамещающих отечественных сырьевых источников комплекса БАВ, содержащего полифенольные соединения, органические кислоты и тритерпеновые сапонины представляют интерес широко распространенные на территории РФ растения рода Primula - первоцвет весенний (Primula veris L., или P. officinalis (L.) Hill.) и его подвид первоцвет крупночашечный (Р. macrocalyx Bunge). В отечественной официнальной медицинской практике разрешено к применению 10 зарубежных препаратов на основе корневищ первоцвета весеннего в качестве отхаркивающих средств. Листья первоцвета весеннего применяются в качестве поливитаминного пищевого растительного сырья. Первоцвет крупночашечный широко используется в народной медицине. Однако в химическом отношении надземная часть первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного изучены недостаточно. Существующая отечественная нормативная документация (НД) на листья первоцвета весеннего (ГОСТ 3166-76) не позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья (ЛРС), поскольку не предусматривает определение содержания действующих веществ.
Таким образом, изучение отдельных представителей рода Primula, произрастающих на территории РФ, первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного как сырьевых источников для расширения арсенала отечественных
эффективных и безопасных препаратов, определение их химического состава,
спектра фармакологического действия, критериев оценки качества сырья, изучение сырьевой базы является актуальной проблемой.
Цель и задачи исследования. Фармакогностическое изучение первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного с целью расширения номенклатуры официнального импортозамещающего лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе.
Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:
провести анализ результатов современных исследований по биологическим, химическим и фармакологическим свойствам первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;
изучить химический состав исследуемых видов рода Primula и разработать методики определения содержания основных групп БАВ;
провести морфолого-анатомическое изучение сырья двух видов первоцвета в сравнительном аспекте и установить его диагностические признаки;
разработать характеристики подлинности и показатели качества сырья;
провести ресурсные исследования травы первоцвета крупночашечного в некоторых районах республики Башкортостан;
разработать технологию получения густого экстракта из травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ) и гранул сухого экстракта из травы первоцвета весеннего (СЭТПВ);
- изучить специфическую фармакологическую активность ГЭТПВ.
Научная новизна. Впервые проведено фармакогностическое изучение
травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте, обоснована целесообразность использования сырья обоих видов производящих растений в качестве источников соединений фенольной природы и органических кислот.
Хроматографически (ТСХ, ВЭЖХ) идентифицировано:
- в траве первоцвета весеннего - 17 соединений фенольной природы, из
которых 14 обнаружены впервые: арбутин, умбеллиферон, галловая, хлороге-
новая, кофейная, цикориевая, феруловая, коричная кислоты, рутин, апигенин, лютеолин-7-гликозид, дигидрокверцетин, витексин, байкалин;
- в траве первоцвета крупночашечного - 23 соединения фенольной природы, обнаруженных впервые: арбутин, катехин, галловая, хлорогеновая, о-кумаровая, кофейная, цикориевая, феруловая, неохлорогеновая, салициловая, коричная кислоты, кверцимеритрин, дигидрокумарин, о-метоксикумарин, рутин, гиперозид, витексин, кумарин, байкалин, яцеин, кверцетин, дигидрокверцетин, апигенин.
Впервые в сырье обоих видов первоцвета методом ВЭЖХ обнаружены свободные органические кислоты: щавелевая, лимонная, винная, маликовая, янтарная, фумаровая; определено количественное содержание их суммы; обнаружены полисахариды, дубильные вещества, тритерпеновые сапонины; впервые количественно определено содержание урсоловой кислоты.
Впервые изучен аминокислотный состав травы первоцвета весеннего и крупночашечного, установлено наличие 13 аминокислот, из них 8 незаменимых; проведено исследование макро- и микроэлементного состава, определено количественное содержание 10 элементов.
Впервые проведено морфолого-анатомическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте и установлены диагностические признаки сырья. Разработаны критерии оценки и числовые показатели, регламентирующие его качество. Полученные данные включены в проект ФС «Первоцвета листья».
Впервые разработана технология получения отечественных растительных препаратов на основе травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ и СЭТПВ); установлена антиоксидантная активность, ангиопротекторное и антигипоксантное действие ГЭТПВ. Таким образом, в результате комплекса проведенных исследований разработаны научно обоснованные составы, технология, критерии и методы оценки качества новых отечественных препаратов и исходного сырья отечественных представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета
крупночашечного.
Практическая значимость. Полученные результаты позволили обосновать возможность и целесообразность расширения отечественной номенклатуры официнального сырья за счет двух представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного, а также расширить сведения об их морфолого-анатомическом строении, химическом составе, биологической активности. Результаты выполненных фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для проведения дальнейшего комплекса исследований с целью создания современных импортозамещающих препаратов на основе сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.
На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
- проект ФС «Первоцвета листья» подготовлен и принят к рассмотрению
в установленном порядке;
-разработанные ТУ «Трава первоцвета весеннего», утверждены в установленном порядке и включены в ТУ «Сырье растительное» № 9700-014-26795008-2005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа);
методики количественного определения суммы флавоноидов (акты внедрения - № 35 от 18.11.2009 г. - ОКК ООО «Травы Башкирии»; № 25 от 20.11.2009 г. - «Центр контроля качества лекарственных средств» ГОУ ВПО БГМУ) и аскорбиновой кислоты (соответственно, акты № 36 от 18.11.2009 г. и № 26 от 20.11.2009 г.) в траве первоцвета весеннего;
методики и результаты анализа сырья «Трава первоцвета весеннего» по морфолого-анатомическим признакам и критериям оценки качества (Акт ОКК ООО «Травы Башкирии» № 34 от 18.11.2009 г.);
патент на изобретение № 2342942 «Средство растительного происхождения, обладающее антиоксидантной активностью» от 10.01.2009 г.
Положения, выдвигаемые на защиту:
результаты изучения фитохимического состава травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;
результаты исследований по разработке методик количественного определения суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты;
результаты морфолого-анатомических исследований и диагностические признаки сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;
результаты исследований и обоснование показателей качества с целью стандартизации ЛРС изучаемых видов;
результаты проведенных ресурсных исследований травы первоцвета крупночашечного;
результаты фармакологических исследований ГЭТПВ и обоснование возможности создания новых лекарственных форм (ГЭТПВ и СЭТПВ).
Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на итоговых научных конференциях молодых ученых и студентов, итоговых научных сессиях БГМУ и отделения медико-биологических наук Уфимского филиала НЦ РАМН «Химия и медицина» (Уфа, 2006, 2008 г.г.); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской (Томск, 2006 г.); на научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА (Ярославль, 2007 г.); на VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); на V Всероссийской конференции-школе «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008 г.).
Публикации. Основные положения диссертации отражены в 18 научных работах, из них 1 - в журнале, рекомендуемом ВАК, и одном патенте на изобретение.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (4 глав), общих выводов, списка литературы и приложений. В тексте содержится 35 таблиц, 16 рисунков. Список цитируемой литературы включает 158 источников, из них 31 - на иностранных языках.