Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Ботаническая, фармакогностическая и медико-биологическая характеристика лаванды лекарственной 12
1.1. Ботаническое описание растения 12
1.2. Химический состав 15
1.3. Фармакологические свойства 27
Глава 2. Объекты и методы исследования 33
2.1. Объекты исследования 33
2.2. Методы исследования 33
2.2.1. Микроскопические исследования ЛРС 33
2.2.2. Хроматография 34
2.2.2.1. Тонкослойная хроматография (ТСХ) 34
2.2.2.2. Колоночная хроматография 35
2.2.2.3. Газожидкостная хроматография (ГЖХ) 35
2.2.3. Спектрофотометрия 36
2.2.4. 1Н-ЯМР- спектроскопия 37
2.2.5.Химические методы 37
2.2.6. Технологические способы и методы получения лекарственных препаратов из лаванды 38
2.2.7. Методы фармакологических исследований 39
2.2.7.1. Седативная активность 39
2.2.7.2. Токсичность 40
2.2.8. Микробиологические исследования 40
2.2.9. Математические методы 42
Глава 3. Анатомо-диагностическое исследование цветков лаванды колосовой (LA VANDULA SPICA. L) 43
3.1. Обоснование анатомо-диагностического исследования 43
3.2. Анализ микропрепаратов 43
Глава 4. Фитохимические исследования цветков лаванды колосовой 51
4.1. Изучение химического состава цветков лаванды 51
4.2. Изучение компонентного состава эфирного масла лаванды 63
Глава 5. Аналитические исследования цветков лаванды колосовой 70
5.1. Качественный анализ цветков лаванды колосовой 70
5.2. Количественное определение эфирного масла в цветках лаванды 72
5.3. Количественное определение суммы флавоноидов в сырье и в новом экстракционном лекарственном препарате лаванды колосовой 74
5.4. Количественное определение суммы фенилпропаноидов в ЛРС «Лаванды цветки» 78
Глава 6. Разработка состава, технологии получения и методов стандартизации лекарственных форм на основе цветков лаванды колосовой 83
6.1. Получение лаванды экстракта жидкого (1:1) 83
6.2. Разработка состава и технологии лаванды таблетки 87
6.3. Разработка методик стандартизации ЛФ на основе лаванды колосовой 94
6.3.1. Качественный анализ 94
6.3.2. Количественный анализ 95
6.4. Результаты исследования стабильности ЛФ в процессе хранения 96
Глава 7. Обоснование исследование цветков лаванды колосовой в качестве источника седативных и антимикробных средств 103
7.1. Изучение нейротропной активности «Лаванды экстракта жидкого» 103
7.2. Изучение антимикробных свойств экстракционных препаратов лаванды колосовой 105
Общие выводы 112
Список литературы 114
Приложения 125
- Фармакологические свойства
- Методы фармакологических исследований
- Анализ микропрепаратов
- Изучение компонентного состава эфирного масла лаванды
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время все большее внимание уделяется изучению опыта традиционной медицины, накопленного на протяжении нескольких тысячелетий, в плане использования растительного сырья для лечения многих заболеваний в современной медицинской практике. На сегодняшний день в РФ используется свыше 18 тыс. лекарственных средств, среди которых заметное место занимают препараты, получаемые из лекарственного растительного сырья (ЛРС). Кроме того, наметилась тенденция все более широкого использования фитопрепаратов как для лечения, так и для профилактики различных заболеваний. Учитывая высокий удельный вес зарубежных лекарственных препаратов, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации, целесообразным является изучение вопроса по разработке эффективных, безопасных и доступных лекарственных препаратов, получаемых из растительного сырья России, в том числе, обладающих седативным действием. Это обусловлено рядом факторов, среди которых важнейшими являются напряженный ритм жизни, стрессовые ситуации и, как следствие, повышенное психоэмоциональное напряжение у ряда категорий населения. Лекарственные растения служат уникальным источником для создания лекарственных препаратов, основными преимуществами которых является мягкое воздействие на организм человека и минимум побочных эффектов, что позволяет рекомендовать безрецептурный отпуск разрабатываемых фитопрепаратов, в том числе для применения и в педиатрической практике.
К числу перспективных растений следует отнести эфиромасличное растение - лаванду колосовую (Lavandula spica L., семейство яснотковых – Lamiaceae), цветки которой до недавнего времени в основном применялись только в народной медицине.
В настоящее время цветки и соцветия лаванды включены в фармакопеи 16 стран мира. На основе сырья данного растения за рубежом (Германия, Швейцария, Франция) производится свыше 20 лекарственных препаратов, применяющихся в качестве спазмолитических, седативных и антимикробных средств. В России на основе свежесобранного сырья выпускаются лишь два лекарственных препарата: «Ливиан» и лавандовый спирт, содержащие эфирное масло лаванды, основным компонентом которого является линалилацетат. Данные лекарственные препараты рекомендованы в качестве дерматопротекторных и антисептических средств. Однако использование этого ценнейшего растения только в данном качестве, на наш взгляд, нельзя считать исчерпывающим его потенциал в полной мере. В этой связи актуальной задачей современной фармации является изучение анатомо-диагностических признаков сырья (цветков лаванды колосовой), изучение показателей норм качества нового вида ЛРС «Лаванды колосовой цветки», продолжение поиска новых биологически активных соединений (БАС), внедрение в медицинскую практику нового вида лекарственного сырья «Лаванды цветки» (воздушно-сухое сырье), а также расширение номенклатуры эффективных и доступных по цене широким слоям населения российских лекарственных препаратов из сырья лаванды колосовой.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фитохимическое исследование цветков лаванды колосовой в плане научного обоснования разработки лекарственных препаратов на основе данного сырья.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1) провести сравнительное анатомо-диагностическое и фитохимическое исследование цветков лаванды колосовой, произрастающей в различных климатических зонах России и Марокко;
2) изучить терпеноидный, флавоноидный и фенилпропаноидный состав цветков лаванды колосовой;
3) разработать методики анализа фенилпропаноидов в ЛРС «Лаванды цветки»;
4) разработать состав и технологию лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки»;
5) разработать методики для стандартизации лекарственных препаратов (ЛП) «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки»;
6) обосновать целесообразность создания седативных ЛП на основе сырья лаванды колосовой;
7) разработать проекты нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье «Лаванды цветки» и на лекарственные препараты «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».
Научная новизна. Впервые установлено, что доминирующим компонентом цветков лаванды колосовой является новое природное соединение фенилпропаноидной природы - лавандозид, для которого на основании данных УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов различных химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз) предложена структура: 4-О-b-D-глюкопиранозида 4-гидрокси-3-метоксикоричной кислоты.
Впервые выделены из цветков лаванды колосовой флавоноидные соединения, идентифицированные с использованием классических и современных физико-химических методов анализа, цинарозид (7-О-b-D-глюкопиранозид лютеолина) и космосиин (7-О-b-D-глюкопиранозид апигенина).
Впервые в сравнительном плане изучен терпеноидный состав эфирного масла лаванды колосовой, произрастающей в Марокко, и образцов растений культивируемых в некоторых регионах Российской Федерации. При этом определено, что доминирующими компонентами эфирного масла дикорастущей марокканской лаванды являются камфора (23,68%), линалоол (22,3%), линалилацетат (19,00%) и борнеол (17,83%), тогда как в образцах эфирного масла российского производства количественное соотношение преобладающих компонентов иное: линалоол (32,51%), линалилацетат (28,06%), борнеол (17,74%) и камфора (17,00%).
Определено, что экстракт лаванды жидкий обладает выраженной седативной активностью, что связано с высоким содержанием лавандозида; установлены также антимикробные и противогрибковые свойства данного лекарственного препарата, обусловленные комплексным действием терпеноидного и фенольного комплекса БАС. Полученные результаты показывают перспективность дальнейшего доклинического и клинического изучения полученных лекарственных препаратов с целью их внедрения в медицинскую практику.
Практическая значимость. На основании новых данных по химическому составу цветков лаванды колосовой разработаны методики качественного и количественного анализа фенилпропаноидов в ЛРС и в лекарственных препаратах «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».
Разработаны состав, технология получения и параметры качества жидкого экстракта и таблеток лаванды колосовой. Обосновано применение для получения экстракта жидкого (1:1) метода реперколяции и использование спирта этилового.40 %. Установлено, что в качестве вспомогательного ингредиента при получении таблеток лаванды целесообразно использование лактозы. Это позволило получить продукт методом прямого прессования и исключить нежелательный процесс взаимодействия между биологически активными соединениями и введенным компонентом, что обеспечило в итоге высокую стабильность лекарственного препарата (срок хранения – 2 года).
Результаты диссертационного исследования включены в электронное учебно-методическое пособие «Атлас по ботанике», разработанное на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ.
Внедрение результатов исследования в практику.
Разработаны проекты ФСП «Лаванды цветки», «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки», получена приоритетная справка на "Способ получения лавандозида" № 2008116406 от 24.05.2008, материалы исследований используются в учебном и научном процессе в ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава» (акты внедрения).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Результаты анатомо-диагностического, фитохимического исследования цветков лаванды колосовой.
2. Результаты исследований по стандартизации сырья лаванды колосовой, а также лекарственных препаратов на его основе.
3. Результаты исследования по разработке состава, технологии и показателей качества жидкого экстракта и таблеток цветков лаванды колосовой.
4. Методики качественного и количественного анализа ЛРС «Лаванды цветки» и лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».
5. Результаты исследований нормируемых показателей качества ЛРС «Лаванды цветки» и лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».
Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007 г.);II Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы - Казахстан, 2007 г.); VII Международном симпозиуме по химии природных соединений (Ташкент – Узбекистан, 2007 г.); XII Конгрессе « Экология и здоровье человека» (Самара, 2007 г.); VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); XIV Медико-фармацевтическом конгрессе «Аптека, 2007» (Москва, 2007 г.); Межвузовской конференции молодых ученых «Аспирантские чтения» (Самара, 2007 г.); XXIV Международной конференции по полифенолам (Саламанка- Испания, 2008 г).
По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.
Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (государственная регистрация № 012001053332).
Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц, 42 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (1 глава), и экспериментальной части, включающей описание объектов и методов исследования (2 глава) и обсуждение результатов собственных исследований (3-7 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 115 источников, из которых 28 - на иностранных языках, и приложения.
Фармакологические свойства
Лаванда широко применяется сегодня как антисептик, особенно в парфюмерии [65,66]. Цветки лаванды обладают широким спектром биологической активности: антисептическое, желчегонное, седативное, мочегонное действие [65,66,78]. Более богатый опыт применения цветков лаванды имеется в народной медицине [71]. Как ценнейшее ароматическое растение, с незапамятных времен использовалось людьми для различных целей, в том числе и медицинских. Древние греки утверждали, что лаванда помогает против воспаления желудка, головокружения, водянки, а также является средством борьбы с заразными болезнями [25,70,112]. Еще 2000 лет назад римляне получали лавандовое масло и применяли его для лечения ушибов, ожогов, гнойных ран, болезней желудка и верхних дыхательных путей, ревматоидных состояний и различных венерических заболеваний [21,74,95]. Рейзии Авиценны (Ибн-Сина) упоминали о лечебных свойствах лаванды в своих книгах "Составляющие" и "Канон" [91,107,111,115]. В медицинских системах "Айюр - Веда" и "Чжуд -Ши" лаванда рекомендуется в качестве антиспастического средства [19]. Упоминание о лаванде, как о ценном для медицины лекарственном растении, встречается в произведениях Hildegord, относящихся к XII столетию. Об этом сообщает Fluckiger в 1879 г. в своем труде "Pharmacographia"[38]. В первом издании "Dispensatorium" от 1543 г. Valerius Cordus описывает эфирное масло лаванды под названием "oleum spica", а в издании 1583 г. оно уже встречается под названием "oleum Lavandulae". В народной медицине Болгарии настой цветков лаванды лекарственной употребляют при мигрени, неврастении, стенокардии, болях в области желудочно-кишечного тракта. Эфирным маслом растирают больные места при невралгии и суставном ревматизме. В народной медицине Австрии листья лаванды, собранные до цветения, применяют как успокаивающее, антиспастическое средство. В польской народной медицине настой цветков лаванды применяют при воспалении среднего уха, в смеси с цветками ромашки - при бронхите. Народные целители во Франции и других странах
Средиземноморья применяют отвар цветков лаванды как успокаивающее, болеутоляющее, диуретическое средство [37,82]. В иранской народной и традиционной арабской медицине настой цветков лаванды лекарственной используется как ветрогонное, диуретическое, противосудорожное, болеутоляющее средство, особенно при невротической головной боли и мигрени. В некоторых областях Ирана листья этого растения применяются как эффективное средство от боли и воспалений при ревматизме и люмбаго [96]. В народной медицине Марокко лаванда известна как растение, обладающее следующими эффектами: болеутоляющее, диуретическое, ранозаживляющее и антимикробное действие [78,81]. Эфирное масло лаванды широко применяется в ароматерапевтических системах различных регионов мира [16,72].
Фармакологические исследования показали, что эфирное масло лаванды проявляет седативное, антиконвульсивное, антиспастическое действие, способствует активному заживлению ран с полной регенерацией клеток эпидермиса, а также химических ожогов [99]. Обладает местным обезболивающим [39, 94, 96], антисептическим [89, 109], антиоксидантным действием, тормозит процессы клеточной дегрануляции [39, 98, 100, 105, 106]. При приеме лавандового масла внутрь снижается внутричерепное давление, повышается тонус кишечника, увеличивается кислотность желудочного сока, улучшается аппетит [73]. Отмечено также гепатопротекторное действие масла лаванды [ПО]. Оно не менее эффективно и при лечении воспалительных заболеваний почек и мочевыводянщх путей, почечнокаменной болезни [ПО]. Лаванда содержится в 13 разных лекарственных препаратах (arkogellules lavande, Aromasol, Balsofumine, Ephydrol, Hepatosolutine и др.), эфирное масло лаванды входит как вспомогательное вещество в 55 разных лекарственных форм (мази: Arnican 4%, Decontractyl, voltarene emugel 1%, Profenid 2,5% и др), а также лаванда содержится в 17 разных препаратах парафармации и применяемых в парфюмерии .
Некоторые примеры современных препаратов на основе цветков лаванды колосовой представлены в табл. 8 [23, 36].
Таким образом, из вышеизложенного следует, что ассортимент седативных лекарственных средств на основе цветков лаванды не достаточен.
Цветки лаванды не применяются в виде воздушно-сухого сырья. Поэтому для расширения ассортимента седативных лекарственных средств растительного происхождения весьма актуальным является разработка седативных препаратов на основе воздушно-сухого сырья - цветков лаванды колосовой.
Методы фармакологических исследований
Седативная активность препаратов изучали на моделях тиопенталового и хлоралгидратного сна [55,84]. Тиопентал-натрий вводили внутрибрюшинно крысам в дозе 50 мг/кг. Хлоралгидрат вводили подкожно мышам в дозе 350 мг/кг. Продолжительность снотворного эффекта оценивали с момента наступления бокового положения до момента пробуждения, показателем которого считался выход животного из бокового положения.
Эффект каждой дозы любого исследуемого препарата изучали при однократном введении за 30 минут до введения анализатора.
Исследовали острую токсичность экстракта лаванды жидкого (1:1) на крысах массой около 200 г при внутрижелудочном введении. Экстракт лаванды жидкий вводили при помощи зонда и шприца в желудок крысам в дозах 1000 мг/кг- 12000 мг/кг.
Испытания на микробиологическую чистоту различных препаратов из цветков лаванды колосовой проводили в установленном порядке: ГФ XI, вып. 2, стр. 193 и Изменение № 3 к ГФ XI. в плотной и жидкой питательной среде применялся для определения чувствительности микроорганизмов к фитосубстанциям.
При работе с бактериями в качестве плотной среды использовался мясо-пептон ный агар (МПА), среда Сабуро - при определении антигрибковых свойств. Среда бралась в объеме 20 мл на стерильную чашку Петри.
При работе с плотной средой готовились рабочие разведения препаратов нужной концентрации, которые вносились в расплавленный раствор агара в отношении 1/9 (2 мл препарата на 18 мл агара). Среда тщательно перемешивалась и разливалась по чашкам Петри. Толщина слоя питательной среды не превышала 3-4 мм [10].
Для приготовления бактериальной суспензии использовали агаровую культуру исследуемых микроорганизмов. Для получения бульонной культуры отбирали одну или несколько четко изолированных колоний. Легким прикосновением стерильной петли к центру колонии переносили незначительное количество материала в пробирку с 5 мл мясо-пептонного бульона. Приблизительно через 5-6 часов инкубации при температуре 37±0,1 С мутность суспензии соответствовала 0,5 стандарту McFarland. Концентрация доводилась точно до 0,5 стандарта McFarland под визуальным контролем путем добавления стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Также оптическая плотность 0,5 стандарта McFarland достигалась разведением в 2 раза бактериальной суспензии оптической плотности 5 ед. стандарта ГИСК им. Л.А. Тарасевича, что будет соответствовать 1-2x10 КОЕ/мл типовых колоний Е. coli АТСС 25922. Грибковый инокулят для посева готовился путем внесения агаровой культуры в изотонический раствор хлорида натрия с последующим доведением до определенной концентрации в камере Горяева.
Посев осуществлялся бактериальной петлей с предварительным определением количества петель в 1 мл. Посевная доза для плотной питательной среды составляла 2x10 микробных клеток, для жидкой - 2x10 микробных клеток.
Пробирки и чашки Петри с разведенными препаратами и засеянные микроорганизмами помещались для инкубирования в термостат для бактерий на сутки при температуре 37С, для грибов - на 7 дней при температуре 29 С. Учет результатов производили визуально. За минимальную подавляющую концентрацию (МІЖ) препарата принимали ту концентрацию, которая вызывала полную ингибицию видимого роста.
Контролем при титровании служили пробирки с мясо-пептонным бульоном и чашки Петри с мясо-пептонным агаром, не засеянные микроорганизмами, а также разведения спирта, используемые для приготовления настоек и экстрактов [3,15,27,54].
Анализ микропрепаратов
Анализ микропрепаратов позволил выявить следующие закономерности [11,12]: Поверхность (эпидермиса) чашечки и венчика цветков лаванды колосовой в двух пробах (марокканское и российское сырье) густо покрыта простыми многоклеточными, ветвящимися волосками (кроющие волоски), полностью покрывающими эпидермис (рис. 4). Как видно из представленных рисунков, на эпидерме чашечки и венчика расположены желёзки, типичные для эфиромасличных растений семейства Яснотковых (Lamiacae) (рис. 5 и 6), что согласуется с имеющимися литературными данными [78]. Характер расположения всех производных эпидермы сходен в обеих пробах сырья. На трубках чашечек и венчиков и желёзки, и волоски располагаются вдоль ребер, по тонки части трубок в несколько рядов, чередуясь. В средней части чашечки волоски расположены в основном на ребрышках, и их много. Волосков в верхней части чашечки и её основании меньше. На отгибах венчика расположены только простые волоски. Кроме волосков в покровной ткани чашечки обнаруживается множество эфиромасличных железок, отличающихся по размерам, как с кутикулярностью оболочки, содержащей эфирное масло, так и без оболочек. Ряды желёзок локализованы, как правило, ближе к ребрам чашечки. Ряд кроющих трихом -между ними. Кроющие волоски густо расположены по ребрам трубок чашечки и венчика и на их отгибах и полностью закрывают эпидермис (рис. 7). На поверхности отгибов венчика определенной закономерности в расположении производных эпидермиса проследить не удалось, но очевидно наличие обоих типов трихом (рис. 7). Рисунок 7 - Поверхность отгиба венчика (вид сверху увеличение хЮО). Форма кроющих волосков и характер их ветвления в пробах сырья из Марокко и России сходны (рис. 8 и 9). равнительный анализ строения простых ветвистых волосков в двух пробах сырья, рассмтренных при одинаковом увеличении (хЮО) показывает, что волоски отличаются по габитусу. Для марокканского сырья (первая проба) характерны волоски, имеющие крепкие в их основании членики. Каждый членик волоска ветвится к верхушке как бы дихотомически на членики неравных размеров, сравнимых по длине с члеником в основании (рис. 10). Рисунок 10 - Форма волосков (увеличение х400) (Марокко). Волоски на поверхности цветков из пробы российского сырья схожи по строению с трихомами из первой пробы, однако они заметно меньше, их членики более тонкие (рис. 11). ш ш Рисунок 11- Форма волосков (увеличение х400) (Россия). В обеих пробах по жилкам чашечек изредка встречаются кроющие волоски, имеющие длинные плоские лентовидные членики второго, третьего порядка. «Ленты» как бы сламываются и скручиваются вокруг своей длинней плоскости в нижней части недалеко от основания или предыдущего членика (рис. 12). Рисунок 12 - Волоски с лентовидном члеником (увеличение х400) . Анализ строения железистых трихом желёзок показывает: это типичные по строению эфиромасличные желёзки. Желёзка имеет одноклеточную ножку и многоклеточную (8 клеток) головку, состоящую из крупных клеток, защищенных сверху слоем кутикулы (место накопления секрета - эфирное масло) (рис. 13). Иногда кутикула лопается и тогда капля секрета не просматривается. Рисунок 13 - Железки, содержащие эфирное масло (увеличение х400). Желёзки в эпидерме цветков первой пробы (Марокко) крупные, с мощным слоем кутикулы. Размеры их во второй пробе (Россия) очевидно меньше. Это доказывается сравнением рисунков изучаемых структур, сделанных при одинаковым увеличении. В обеих пробах сырья встречаются желёзки с неповрежденной кутикулой, когда просматривается капля эфирного масла, иногда - железки с нарушенным кутикулярным слоем головки.
Изучение компонентного состава эфирного масла лаванды
Исследование эфирного масла лаванды проводили методом газовой хроматографии на хроматографе «Цвет 500» с пламенно-ионизационным детектором. Использовалась капиллярная колонка длиной 30 метров с внутренним диаметром 0.32мм, заполненная неподвижной жидкой фазой DB-5 (5% дифенилполисилоксан, 95% диметилполисилоксан). Температурное программирование осуществлялось следующим образом: 40С 3 минуты, далее температура поднималась до 200С со скоростью 5С в минуту и оставалась на этом значении до конца эксперимента. Давление 0.7 кгс/см , ввод пробы с делителем потока 1/10, объем пробы 0.5 мкл.
Анализ каждой пробы проводили 3 раза. Концентрации веществ рассчитывались по методу внешнего стандарта по формуле : Ci=(hj/hCT)-CCT, где Сст - концентрация раствора гексанола-1, Сст=0.72 г/л, hCT=23.5 мм - средняя высота пика стандарта из 8 опытов, hj - высота пика /-того вещества в мм. Приведенные линейные индексы удерживания рассчитывались по формуле: I =((trirz)/(trz+irz)+Z)-100. Для лаванды из Марокко было получено 58 веществ, концентрации и линейные индексы удерживания которых приведены в табл. 9. Для сравнения проводили анализ эфирного масла лаванды российского производства фирмы «Floria pharma», в котором идентифицировали 76 веществ (табл. 10). Кривые ГЖХ обоих образцов представлены на рис. 24 и 25 [58, 59, 60, 62, 63].
С целью определения подлинности сырья «Лаванды цветки» использовали ТСХ-анализ, основанный на обнаружении и идентификации доминирующего феиилпропаноида (лавандозид), а также флавоноидов (цинарозид).
В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющий эффективно разделять основные компоненты сырья [34]., и однозначно идентифицировать доминирующее БАС - лавандозид, а также цинарозид.
В результате проведенных опытов с различными хроматографическими системами, предпочтение было отдано системе растворителей хлороформ-этанол (2:1), обеспечивающей наиболее четкое разделение фенилпропаноиов и флавоноидов. При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 254 нм обнаруживается в виде доминирующего пятна имеющих оранжевую и желтую окраску с Rf около 0,4 - лавандозид и Rf около 0,2 - цинарозид (рис. 26).
При проведении качественного анализа цветков лаванды колосовой методом УФ-спектроскопии были установлены 2 характерных максимума поглощения 280±2 нм и 315±2 нм, которые совпадают со спектром доминирующего БАС (рис. 23 и 29).
Полученные результаты заложены в проект НД «Лаванды цветки» (раздел «Подлинность»).
Для определения эфирного масла методом 1 (ГФ СССР XI издания) 50 г сырья помещают в широкогорлую круглодонную или плоскодонную колбу вместимостью 1000 мл, приливают 300 мл воды и закрывают резиновой пробкой с обратным шариковым холодильником. В пробке снизу укрепляют металлические крючки, на которые при помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный приемник так, чтобы конец холодильника находился над воронкообразным расширением приемника, не касаясь его. Приемник должен свободно помещаться в горле колбы, не касаясь стенок, и отстоять от уровня воды не менее чем на 50 мм. Цена деления градуированной части приемника 0,025 мл. Колбу с содержимым нагревают и кипятят в течение не менее трех часов (табл. 11).
Объем масла в градуированной части приемника замеряют после окончания перегонки и охлаждения прибора до комнатной температуры. После 6-8 определений холодильник и градуированный приемник необходимо промыть последовательно ацетоном и водой [80]. Содержание эфирного масла в объемно-весовых процентах (X) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле