Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Физические свойства О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК 14
1.2. Получение О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК и особенности его применения 15
1.3. Токсикологическая характеристика О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, клиническая картина и патологоанатомические признаки отравления данным веществом 17
1.4. Идентификация и количественное определение О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК 22
1.5. Изолирование и очистка объекта исследования и родственных ему соединений 29
1.6. Трансформация О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, распределение в организмах теплокровных, сохраняемость в объектах окружающей среды и трупном материале 33
Экспериментальная часть 37
Объект исследования, приборы, посуда, материалы, реактивы 37
ГЛАВА 2. Идентификация о-(2,3-дигидро-2,2-диметил бензофуран-7-ил) -n-метилкарбамата 39
2.1. Идентификация хроматографическими методами 39
2.1.1. Идентификация в тонких слоях нормальнофазного сорбента 39
2.1.2. Идентификация в тонких слоях обращённофазного сорбента 41
2.1.3. Определение в колонках сорбентов (метод ВЭЖХ)
2.2. Идентификация хромато-масс-спектрометрическим методом 46
2.3. Идентификация спектральными методами 48
2.3.1. Электронная спектрофотометрия 48
2.3.2. Колебательная спектрофотомерия 50
2.4. Идентификация с помощью хромогенных реакций 52
2.4.1. Определение после предварительного нитрования на основе реакции с гидроксидом натрия в водной среде 52
2.4.2. Определение на основе реакции азосочетания с солями диазония 54
Выводы ко второй главе 56
Глава 3. Количественное определение о-(2,3-дигидро 2,2-диметил-7-бензофуранил)-n-метилкарбамата 58
3.1. Определение с применением фотометрических методов 58
3.1.1. Определение по собственному поглощению в УФ-области спектра в среде 95% этанола 58
3.1.2. Определение на основе реакции образования нитропроизводного 65
3.2. Хроматографические методы определения 67
3.2.1. Хроматофотометрическое определение на основе реакции образования азокрасителя 67
3.2.2. Определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии 69
Выводы к третьей главе 76
ГЛАВА 4. Моделирование очистки от эндогенных соединений и оценка потерь о-(2,3-дигидро-2,2 диметил-7-бензофуранил)-n-метилкарбамата в колонках и тонких слоях сорбентов 78
4.1. Хроматографические системы для очистки О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N МК методом ТСХ и оценка потерь данного вещества в тонких слоях сорбентов 78
4.2. Особенности хроматографической подвижности и оценка потерь О (2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в макроколонках сорбентов 79
4.3. Оценка эффективности степени очистки извлечений от эндогенных соединений из биоматериала 83
4.3.1. С применением метода макроколоночной хроматографии 83
4.3.2. С применением метода тонкослойной хроматографии 84
Выводы к четвертой главе 85
ГЛАВА 5. Определение о-(2,3-дигидро-2,2-диметил бензофуран-7-ил)-n-метилкарбамата в биологическом материале 86
5.1. Изучение особенностей изолирования О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК
из биологических объектов 86
5.1.1. Сравнительное изучение изолирования О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК из биологической ткани различными изолирующими агентами 86
5.1.2. Определение зависимости степени извлечения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК от кратности изолирования и объема изолирующего агента 88
5.1.3. Определение степени извлечения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в зависимости от времени контакта изолирующего агента и биоматериала 5.1.4. Определение зависимости извлечения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК от соотношения вещества и биоматериала 90
5.1.5. Изучение степени извлечения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК из биоматериала в зависимости от количественного соотношения вещества и крови 91
5.2. Методики определения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в тканях органов и крови 92
5.2.1. Изолирование О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК из биологической ткани и крови 93
5.2.2. Очистка извлечений из ткани трупного органа или крови с применением метода колоночной хроматографии 94
5.2.3. Идентификация О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК 95 5.3. Применение разработанных методик при исследовании экспертного материала 101
5.4. Сравнение результатов определения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в
биологическом материале предлагаемой и известными методиками 105
Выводы к пятой главе 107
Глава 6. Изучение особенностей распределения о-(2,3 дигидро-2,2-диметил-бензофуран-7-ил)-n-метил карбамата в организме теплокровных и его сохраняемость в трупном материале 109
6.1. Сохраняемость о-(2,3-дг-2,2-дм-7-бф)-n-мк в биологическом материале 109
6.2. Распределение о-(2,3-дг-2,2-дм-7-бф)-n-мк в организме теплокровных животных (крысы) 113
Выводы к шестой главе 119
Общая схема исследования биоматериала при отравлении о-(2,3-дигидро-2,2-диметил-бензофуран-7 ил)-n-метилкарбаматом 120
Заключение 129
Список литературы
- Получение О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК и особенности его применения
- Идентификация спектральными методами
- Определение на основе реакции образования нитропроизводного
- Оценка эффективности степени очистки извлечений от эндогенных соединений из биоматериала
Получение О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК и особенности его применения
В работе авторов [58] предложена проверка правильности метода, основанного на моноклональном антителе ферментного иммунологического анализа (ELISA) О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, в очищенных методом твердофазной экстракции выборках и неочищенных выборках перца, помидора, огурца, земляники, яблоках, картофеле, апельсинах. Правильность метода рассматривалась относительно метода HPLC. В очищенных выборках HPLC был более точен, чем ELISA, но результаты ELISA в неочищенных выборках были сопоставимы с HPLC методом. Как показывают результаты, разработанный иммунологический анализ – надежный метод для идентификации и количественного определения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в плодах и овощах даже без типовой очистки, позволяет экономить время.
Предложен специфический вид иммунологического анализа с маркировкой моноклонального антитела частицами коллоидного золота. Разработанная методика позволяет определять О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в воде с пределом обнаружения 0,25 мг/л в течение 10 минут [66].
В исследованиях [134], используя модифицированную ацетилхолинэстеразу, авторы разработали мультиферментный биодатчик, позволяющий определять карбаматные соединения в детском питании с пределом обнаружения ниже 10 мкг/кг.
Авторы исследования [143] разработали иммуноферментный анализ карбаматов на основе ферментного торможения более высокочувствительных эстераз, полученных из Bacillus subtilis (BS2) и печени кролика. Методика оказалась на два порядка чувствительнее обычного иммунноферментного анализа с холинэстеразой. Полученные результаты были хорошо сопоставимы с контрольными измерениями, полученными методом LC-MS/MS.
Шорманов В.К. и соавторы [32] использовали пластины «Силуфол» с люминисцентным индикатором UV-254 и пластины «Силуфол» с привитой поверхностью С14-С15 для разделения карбаминатных пестицидов тетраметилтиурамдисульфида, тетраэтилтиурамдисульфида, О-(2,3-ДГ-2,2 ДМ-7-БФ)-N-МК и бенсултапа. В качестве подвижной фазы применяли различные растворители и их смеси. Лучшей подвижной фазой для нормальнофазового варианта ТСХ стала система растворителей гексан диоксан-пропанол-2 (8:3:0,6), для варианта обращённофазовой тонкослойной хроматографии – диоксан-вода (6:4) и ацетонитрил-вода (5:5). О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК хроматoграфировали также в приcутствии двух других произвoдных моноамида угольной киcлоты – БМК и беномила, в качестве внутреннего стандарта при этом рассматривался беномил [44].
Продукты щелочного гидролиза О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК реагировали с даизотированным паранитроанилином, оптическую плотность образовавшегося азокрасителя через 15 минут измеряли на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 10 мм с зелёным светофильтром (530 нм). График светопоглощения подчинялся линейному закону в интервале концентраций О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК от 0,5 до 20 мкг в анализируемом растворе [21].
Предложена методика, которая основана на определении О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК с помощью метода ВЭЖХ с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из анализируемых проб растений смесью растворителей н-гексан-ацетон (4:1), из почвы – ацетоном и, затем, хлористым метиленом с последующей очисткой экстракта в колонке с оксисью алюминия. Методом абсолютной калибровки проводится количественное определение. В описанных параметрах определения метод избирателен в присутствии пестицидов, используемых в интенсивной технологии выращивания растений (симм-триазины, хлор- и фосфорорганические пестициды, пиретроиды, фенилмочевины) [29].
Остаточные количества О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в воде, почве и сельскохозяйственных культурах определяют методом ВЭЖХ, используя колонку Symmetry Shield RP-8 либо Symmetry Shield RP-18, подвижную фазу – ацетонитрил-вода (4:5) и длину волны 210 нм. Время удерживания составляет: для колонки Symmetry Shield RP-8 - 7,75-7,90 мин, для колонки Symmetry Shield RP-18 - 7,95-8,10 мин [31].
Метод ВЭЖХ был предложен Rouberty F. и Fournier J. для разделения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, гидроксикарбофурана и альдикарба, также были представлены уравнения второго порядка для зависимости объёма введённой пробы, скорости элюирования и состава элюента [131]. Лопатухиным Э.Ю. и соавторами [18] разработана методика определения остаточных количеств ряда гербицидов в лекарcтвенном раcтительном cырье из надземных и подземных oрганов раcтений. Для разделения исследуемых веществ и их количественного определения использовался газохроматографический метод. Предложенная методика позволяет обнаруживать 83-88% гербицидов в сырье лекарственных растений.
Идентификация спектральными методами
Изучались особенности поглощения электромагнитного излучения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в интервале длин волн 190-360 нм. Оптическую плотность анализируемых растворов О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7 БФ)-N-МК (0,0005 % – 0,008 % концентрации) замеряли на СФ-56 в кюветах с толщиной рабочего слоя 10 мм. Для растворения исследуемого вещества были использованы 95% этанол, ацетонитрил, трихлорметан и 0,1 М раствор HCl. Проводили измерения на фоне чистых растворителей. По результатам опытов строили спектральную кривую для каждого из растворителей и определяли основные оптические характеристики (положение максимумов, удельный и молярный коэффициенты поглощения). Итоги исследований представлены в таблице 5. Как подтверждают представленные данные, в интервале длин волн 190-360 нм спектральные кривые О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, в различных растворяющих средах, выражаются наличием нескольких полос поглощения излучения: первой - с максимумами в интервале длин волн 201-206 нм, второй – с максимумами в области 217-220 нм и третьей – с максимумами в области длин волн 278-281 нм. Коэффициент удельного поглощения, рассчитанный для максимумов первой полосы, находится в интервале 473-609, второй –129-248, третьей – 47-225.
Так как оптимальные условия спектрофотометрического определения достигаются с применением в качестве растворителя 95% этанола, то в дальнейшем, для идентификации и количественного определения, использовался данный растворитель.
Поглощение электромагнитного излучения в УФ-спектре 0,002% раствором О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в 95% этаноле представлен на рисунке 5. А 1,4
Проведены исследования возможности использования колебательной спектрофотометрии (ИК-спектрофотометрии, описывающей колебательные формы движения атомов и групп атомов в молекулах) для идентификации О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК.
Исследуемое вещество вместе с бромидом калия прессовали в таблетки и исследовали в интервале частот 4000 – 400 см-1. Для исследования был использован ИК-Фурье-спектрофотометр «Nicolette Magna 750». Полученные данные изучения специфики поглощения ИК-излучения, соответствующих определённым видам колебаний, приведены в таблице 6. Спектральная кривая О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, полученная в интервале частот 4000 – 400 см-1, представлена на рисунке 6.
Анализируя колебательный спектр О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в выбранном диапазоне частот, можно заключить, что спектральная кривая достаточно информативна, содержит целый ряд специфических для исследуемого соединения полос поглощения, отражающих различные виды колебательных движений в его молекуле: валентных N-H (3364 см-1), валентных С=О (полоса «Амид 1») (1720 см-1), деформационных N-H и СN у вторичных амидов (полоса «Амид 2») (1529 см-1), ароматических С=С связей (1619 см-1, 1601 см-1, 1478 см-1, 1444 см-1), симметричных деформационных –СН3 (гемм-диметильная группа) (1387 см-1, 1372 см-1), колебания кольца (для бензофуранов) (876 см-1). Приведённое сочетание характеристических полос позволяет с приемлемой для исследований степенью селективности идентифицировать О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК методом ИК-Фурье спектрофотометрии.
При обработке О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК 10% раствором нитрата калия в серной кислоте концентрированной при нагревании образуются нитропроизводные, которые в условиях водно-щелочной среды образуют интенсивно окрашенные ацинитросоли. С целью проведения эксперимента, 2 мг О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N МК переносили в фарфоровую выпарительную чашку, в неё вносили 0,5 мл 10% раствора нитрата калия в серной кислоте концентрированной и оставляли на 10 минут. По истечении указанного времени смесь нагревали над пламенем газовой горелки в течение 1 минуты. Остаток в выпарительной чашке разбавляли 1 мл воды и обрабатывали 8,5 мл 10% раствора гидроксида натрия, обеспечивая тем самым щелочную реакцию среды. Наблюдали появление интенсивного желто-оранжевого окрашивания раствора.
Определение на основе реакции образования нитропроизводного
В описанную ранее методику были внесены изменения, связанные с различным содержанием анализируемого вещества. В ряд стаканов с содержанием по 100 г мелкоизмельчённой ткани печени добавляли различные количества О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК (2,5; 5,0; 12,5; 25,0; 50,0 мг). Далее использовали методику, описанную в разделе 5.1.2.
При исследовании индивидуальные объёмы смесей и контрольных образцов (по 5,00 г каждая) дважды настаивали в течение 30 минут, используя каждый раз по 10 г этилацетата. Полученные индивидуальные извлечения соединяли. По 0,5 мл каждого извлечения наносили на линию старта пластины «Силуфол» UV-254 и далее поступали так, как указано в разделе 5.1.2.
Данные исследований приведены в таблице 24. Увеличение cодержания О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в пределах концентраций 2,5 – 50,0 мг для модельных смесей при неизменном количестве биоматериала влечёт за собой лишь небольшое изменение среднего значения уровня извлечения, находящееся в пределах 3 %. Таким образом, при взаимодействии О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК с тканью печени не сопровождается образованием прочных связей. 5.1.5. Изучение степени извлечения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК из биоматериала в зависимости от количественного соотношения вещества и крови
Для исследования крови, ввиду наличия в ней высокого содержания воды, предложен двухкомпонентный изолирующий агент этилацетат-ацетон (1:1), одним из составляющих которого является гидрофильный органический растворитель ацетон. Этилацетат-ацетон (1:1) позволяет увеличить процент извлечения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК из крови по сравнению с этилацетатом. Механизм извлекающего эффекта данной смеси растворителей связан с тем, что она не только хорошо проникает через липидный слой клеточных мембран, но и значительно лучше, чем этилацетат смешивается с водой плазмы и цитоплазматического матрикса. К положительным аналитическим характеристикам данной смеси относится также её лёгкая летучесть и способность осаждать белки биологических тканей.
В ряд стаканов содержащих по 100 г крови добавляли разные, возрастающие количества О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК: 2,5, 5,0, 12,5, 25,0 и 50,0 мг. Один химический стакан с кровью оставляли без О-(2,3-ДГ 2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК для получения образца, используемого в контрольных опытах. Модельные образцы выдерживали при комнатной температуре в течение 2 часов. Далее к отдельным порциям (по 25 г) искусственных смесей прибавляли по 50 г системы этилацетат-ацетон (1:1) как изолирующий агент и настаивали при периодиеском перемешивании в течение 30 минут. Полученное извлечение по истечении указанного времени отделяли, а процедуру извлечения повторяли еще раз в ранее указанных условиях. Полученные индивидуальные извлечения соединяли в фарфоровой чашке. Процедуру осуществляли для каждой из модельных смесей и контрольного образца. По 0,5 мл каждого извлечения переносили на линию старта пластины «Силуфол» UV-254. Процесс хроматографирования осуществляли в камерах объёмом внутри порядка 600 см3. Использовали фазу гексан – ацетон (6:4). Проявляли полученные хроматограммы в ультрафиолетовом свете. О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК детектировали в виде пятна тёмно-фиолетового на более белом фоне пластины c Rf =0,56 ± 0,02. Пятно из пластины вырезали, и исследуемое соединение при помощи 10 мл 95% этанола из сорбента элюировали в течение 15 минут. Измерение оптической плотности полученного элюата осуществляли, используя длину волны 278 нм при помощи СФ-46 с применением кварцевых кювет, рабочим слоем 10 мм. Измерения проводили на фоне элюата из контрольного опыта.
Количество О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в пробе определяли спектрофотометрическим методом по уровню оптической плотности, применяя уравнение градуировочного графика, приведённое в разделе 3.1.1 диссертации и осуществляли пересчет на внесённую навеску в модельную смесь. Данные исследований приведены в таблице 25. Использование системы состава этилацетат-ацетон (1:1) как изолирующий агент и установленные параметры изолирования помогают получить высокую степень изолирования О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК из крови.
Оценка эффективности степени очистки извлечений от эндогенных соединений из биоматериала
Сухой остаток из выпарительной чашки № 4 растворяли в 10 мл хлороформа. 2 мкл хлороформного раствора использовали для хромато-масс-спектрометрического исследования по схеме, описанной в разделе 2.2. О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК с высокой селективностью определяли используя характерную аутентичность времени его удерживания в используемой колонке и характерных осколков с аналогичными показателями стандарта О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК. Как свидетельствуют данные таблицы 29, минимальные открываемые количества О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК (мг в 100 г) методом ГХ/МС составляет в ткани печени 0,012, в гнилостно изменённой ткани печени 0,0160, в ткани желудка 0,011, в крови 0,010. Г. Определение методом спектрофотометрии в ультрафиолетовой области спектра По окончании хроматографирования исследуемого извлечения методом тонкослойной хроматографии по методике, изложенной ранее в пункте «А», часть пластины хроматограммы содержащее пятно вещества, значение Rf которого соответствует Rf стандарта О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, вырезали и помещали в пробирку с 10 мл 95% этанола для элюирования. По истечении 15 минут полученный элюат помещали в кювету с рабочим слоем 10 мм, осуществляли определение для полученного элюата поглощения в интервале длин волн 190-360 нм, применяя для этого спектрофотометр СФ-46. Исследования выполняли на фоне элюата из контрольного опыта. В случае необходимости фотометрируемый этанольный элюат разбавляли 95 % этанолом. О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК определяли по совпадению характерной спектральной кривой и специфичных точек экстремумов при сравнении с аналогичными показателями стандарта О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК.
Как видно из таблицы 29, открываемый минимум данного соединения (мг в 100 г) методом УФ-спектрофотометрии составляет в ткани печени 0,425, в гнилостно изменённой ткани печени 0,640, в ткани желудка 0,405, в крови 0,360.
Используя данные оптической плотности, определённой при длине волны 278 нм, находили количество О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, применяя уравнение градуировочного графика, приведённое в разделе 3.1.1 диссертации и осуществляли пересчёт, учитывая навеску биоматериала.
Итоги определения О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК в различных биологических объектах с использованием метода УФ-спектрофотометрии представлены в таблицах 26-28.
Исходя из плученных результатов, разработанная методика позволяет определять (n=5; Р=0,95) в тканях свежих трупных органов (печень, желудок) – (89,15 – 93,79) ± (1,84 – 4,49) % О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК (стандартное отклонение – 1,48 – 3,61, относительное стандартное отклонение – 1,58 – 4,05 % ), крови – (88,04 – 92,34) ± (1,89 – 4,25) % данного соединения (стандартное отклонение – 1,52 – 3,42, относительное стандартное отклонение –1,65 – 3,89 %), в гнилостно изменённой ткани органа (печени) – (87,86 – 90,98) ± (2,28 - 4,85) % рассматриваемого вещества (стандартное отклонение - 1,83 – 3,90, относительное стандартное отклонение – 2,01 - 4,44 %). Как свидетельствуют данные таблицы 29, при использовании разработанных схем изолирования и очистки О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК его определяемый минимум (мг в 100 г) методом УФ-спектрофотометрии составляет в ткани печени 0,64, в гнилостно изменённой ткани печени 0,960, в ткани желудка 0,600, в крови 0,560.
Этанольный элюат, оставшийся после проведения определения методом спектрофотометрии в ультрафиолетовой области спектра (пункт Г), переносили в фарфоровую чашку и выпаривали растворитель при комнатной темепратуре в токе воздуха до момента получения остатка в сухом виде. К остатку добавляли 1 мл 15% раствора гидроокиси калия в этаноле (6:4), в реакционную смесь вносили 9 мл 0,1% раствора диазотированного 2-(n-аминобензолсульфамидо)-тиазола и выдерживали реакционный раствор в течение 5 минут. В присутствии О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК реакционный раствор приобретал красное окрашивание.
Изучали специфичность светопоглощения полученного окрашенного раствора, применяя для этих целей СФ-46 и кварцевые кюветы с рабочим слоем на 10 мм в интервале длин волн 300-600 нм. Исследования выполняли на фоне раствора из контрольного опыта. Электронный спектр азокрасителя, получаемого на основе О-(2,3-ДГ-2,2-ДМ-7-БФ)-N-МК, характеризовался наличием широкой полосы поглощения с максимумом в области 482 нм.
Как видно из таблицы 29, открываемый минимум данного соединения (мг в 100 г) по реакции азосочетания с солью диазония составляет в ткани печени 0,225, в гнилостно изменённой ткани печени 0,350, в ткани желудка 0,215, в крови 0,190.