Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Разработка способа получения субстанции антимикробного действия на основе ройлеанонов из корней шалфея лекарственного Булушева Мария Константиновна

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Булушева Мария Константиновна. Разработка способа получения субстанции антимикробного действия на основе ройлеанонов из корней шалфея лекарственного: диссертация ... кандидата Фармацевтических наук: 14.04.02 / Булушева Мария Константиновна;[Место защиты: ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет)], 2018

Введение к работе

Актуальность темы исследования Препараты антибактериального действия в настоящее время занимают большой удельный вес среди всех медикаментозных средств и потребность в них не только не уменьшается, а с течением времени растет. Инфекционные болезни на протяжении всей истории были огромной проблемой для человечества. После того, как было установлено, что инфекции вызываются болезнетворными микроорганизмами, вектор борьбы с такими болезнями переместился в направлении создания антибактериальных средств. Однако, в течение почти 100 последних лет эффективных в этом направлении средств практически не было. Положение изменилось в 30-х годах прошлого столетия с созданием сульфаниламидов, а десятилетие спустя – антибиотиков. Была получена возможность направленного и эффективного лечения. Однако, антибиотики, принеся избавление от одних проблем, вызвали новые. Одна из них – самая труднопреодолимая и глобально масштабная – антибиотикорезистентность. В настоящее время существует уже несколько поколений антибиотиков, и к большинству из них появляются новые резистентные штаммы микроорганизмов. Меры преодоления, предлагаемые в нашей стране и за рубежом – комбинации антибиотиков, замена на отдельных этапах лечения одних антибиотиков другими, ограничение применения антибиотиков в тех случаях, когда без них можно обойтись. Другой путь решения проблемы – обращение к препаратам растительного происхождения. Антимикробные препараты из лекарственного растительного сырья (ЛРС), такие как Эвкалимин (из листьев эвкалипта), Сангвиритрин (из травы маклеи), разработанные в ВИЛАР как аналоги антибиотиков, имеют широкий спектр действия, практически не имеют побочных эффектов и, что самое главное, к ним не вырабатывается устойчивость микроорганизмов. Одним из перспективных растений для создания препарата антимикробного действия является шалфей лекарственный.

Шалфей лекарственный (Salvia officinalis L.) является официнальным растением и часто применяется в медицинской практике разных стран мира. Он включен в фармакопеи Англии, США, Германии, Франции, Польши, Австрии и Китая. Экстракты шалфея обладают противовоспалительным, антимикробным, желчегонным, тонизирующим и целым рядом других действий. Традиционно считалось, что биологическая активность растения связана с наличием эфирного масла. В последнее время интерес для исследователей представляют нелетучие компоненты. Одной из основных групп действующих веществ являются дитерпеноиды абиетанового ряда с ароматическим кольцом С, содержащиеся в траве шалфея (корназоловая кислота и ее производные), проявляющие сильное антимикробное действие. В корнях также найдены абиетановые дитерпеноиды, где кольцо С имеет строение хинона: ройлеанон, 7-гидроксиройлеанон (горминон) и 7-ацетоксиройлеанон. Эти соединения обладают высокой

антимикробной активностью. В настоящее время создание субстанции антимикробного действия из корней шалфея лекарственного является актуальным.

Потребность в препарате антимикробного действия растительного происхождения сохраняется.

Возможно комплексное использование растения без дополнительных экономических затрат, т.к. корни шалфея лекарственного являются отходами после использования растений для заготовки листьев в течение нескольких вегетационных периодов.

Помимо антимикробной активности в последнее время у ройлеанонов обнаружено цитотоксическое действие на клетки опухоли кишечника и печени (Мастеров с соавт., 2004 г.).

Степень разработки темы исследования В лаборатории антимикробных исследований ВИЛР (Вичканова С.А. с сотр., 1969 г.) впервые показано наличие у ройлеанонов антимикробного действия и на основе этих данных (Романова А.С. с соавт.) была разработана субстанция под рабочим названием «Донелвин» как полуфабрикат для получения лекарственных форм. Действующими веществами субстанции являлась сумма горминона и 7-ацетоксигорминона. Балластными веществами были неполярные компоненты липофильного характера, стерины, линейные углеводороды типа козана. Состав субстанции отличался нестабильностью: доля горминона и 7-ацетоксигорминона колеблется от 20 до 80 % в зависимости от сырья. Другими недостатками технологии являются необходимость нагрева пожароопасных растворителей (петройленый эфир), а также трудновоспроизводимый и длительный процесс кристаллизации целевого продукта с возможностью образования смолистой субстанции, поэтому работа были приостановлена, а субстанция не зарегистрирована.

В связи с вышеизложенным разработка субстанции антимикробного действия из корней шалфея лекарственного по новой технологии является актуальной.

Цель исследования – разработать способ получения субстанции антимикробного действия на основе углубленного изучения химического состава корней шалфея лекарственного и метод стандартизации субстанции.

Задачи:

  1. Изучить морфолого-анатомическое строение корней шалфея лекарственного, установить локализацию ройлеанонов в корнях, диагностические признаки сырья.

  2. Определить количественное содержание и химический состав ройлеанонов в корнях шалфея лекарственного, включая минорные компоненты.

  3. Разработать новый способ получения субстанции антимикробного действия, основанный на преобразовании суммы ройлеанонов в наиболее активный горминон.

  4. Изучить химический состав веществ, сопутствующих горминону в субстанции антимикробного действия.

5. Установить числовые значения параметров контроля подлинности и качества субстанции антимикробного действия, оформить нормативную и технологическую документацию на субстанцию антимикробного действия и на стандартный образец горминона для количественного определения (проект НД, методики количественного определения, лабораторный регламент).

Научная новизна

Впервые выделены биологически активные вещества: 7-оксоройлеанон, таксохинон и 6,7-дегидроройлеанон в дополнение к ранее известным горминону, 7-ацетоксигорминону и ройлеанону в ходе углубленного изучения содержания ройлеанонов в корнях шалфея лекарственного.

Установлена связь строения молекул и биологической активности ройлеанонов, содержащихся в корнях шалфея. Наиболее активный горминон предложен в качестве основы для субстанции антимикробного действия.

Изучена стабильность горминона в щелочной среде и реакция гидролиза ацетоксигорминона как обоснование нового способа получения субстанции антимикробного действия из корней шалфея лекарственного.

Оптимизированы параметры экстракции сырья на головной стадии и на стадии жидкофазных экстракций в ходе технологического процесса.

Впервые выделены из корней шалфея лекарственного пентациклические тритерпены: эускафиковая, 19-дезоксиэускафиковая кислоты и новое соединение 2, 21, 22-тригидроксиолеаноловая кислота и установлено ее строение.

Отмечено наличие антимикробной активности у выделенных тритерпеновых кислот.

Впервые в ходе изучения ройлеанонов с помощью масс-спектрометрии установлена закономерность распада молекулы ройлеанона под действием электронного спрея ESI.

Теоретическая и практическая значимость исследования Результаты работы:

Разработан лабораторный регламент на производство субстанции антимикробного действия из корней шалфея лекарственного «Ройлевин» ЛР 04868244-01-2016.

Разработаны технические условия на стандартный образец 7-гидроксиройлеанона (горминона) ТУ 9369-188-04868244-2015.

Разработан проект нормативного документа (проект НД) на субстанцию антимикробного действия Ройлевин.

Разработаны методики количественного определения 7-гидроксиройлеанона при получении субстанции Ройлевин из корней шалфея лекарственного №М-04868244-52-2016.

На основе полученной субстанции антимикробного действия разработана фармацевтическая композиция антимикробного действия. Получен Патент №2596500 от 10 августа 2016 года.

Основные положения, выносимые на защиту

Результаты морфолого-анатомического исследования сырья, изучения компонентного состава ройлеанонов в корнях шалфея лекарственного и сравнительной оценки их антимикробной активности.

Технологическая схема получения субстанции антимикробного действия Ройлевин из корней шалфея лекарственного на основе наиболее активного ройлеанона – горминона ЛР 04868244-01-2016.

Результаты исследования химического состава пентациклических тритерпенов, сопутствующих горминону в субстанции антимикробного действия Ройлевин.

Результаты определения параметров стандартизации субстанции антимикробного действия Ройлевин (проект НД), промежуточных продуктов технологического процесса получения субстанции Ройлевин (№М-04868244-52-2016) и стандартного образца горминона (ТУ 9369-188-04868244-2015).

Методология и методы исследования Методология исследования построена на анализе и обобщении литературных данных по изучению ботанических характеристик корней шалфея лекарственного, химических свойств, медико-биологических характеристик, распространения ройлеанонов в природе и включала изучение химического состава корней шалфея лекарственного, изучение химического состава субстанции антимикробного действия из корней шалфея лекарственного, изучение биологической активности субстанции и индивидуальных веществ. При выполнении работы были использованы фармакогностические, химические, инструментальные физико-химические и микробиологические методы исследования.

Достоверность научных положений и выводов Достоверность выполненных исследований подтверждается точностью регистрации данных в первичной документации, получением результатов с использованием современных методов анализа, а также статистической обработкой полученных данных и сопоставлением с данными литературы.

Апробация результатов исследования Основные положения работы доложены на III и IV научно-практической конференции с международным участием «Молодые ученые и фармация XXI века» (г. Москва, 2015, 2016); Международной научно-практической конференции «Биологические особенности лекарственных и ароматических растений и их роль в медицине (г. Москва, 2016). Апробация работы прошла 30 мая 2017 года на заседании Секции по разработке и исследованию биологически активных веществ и фитопрепаратов Ученого Совета ФГБНУ ВИЛАР.

Личный вклад автора Автору принадлежит ведущая роль в определении темы, в постановке цели и задач исследования диссертационной работы, анализе и обобщении полученных результатов. Все экспериментальные работы выполнены лично автором. Автором

разработана следующая нормативная документация: проект НД на субстанцию антимикробного действия, методики количественного определения горминона в сырье, промежуточных продуктах технологического процесса и готовой субстанции, ТУ на горминон СО. Вклад автора является определяющим на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и внедрения их в практику.

Внедрение результатов исследования Результаты, полученные диссертантом в процессе исследования, внедрены в учебный процесс для аспирантов ФГБНУ ВИЛАР (Акт внедрения от 02.05.2017 г.), а также использованы отделом фармацевтической технологии ФГБНУ ВИЛАР для разработки лекарственных форм антимикробного действия. Получен патент № 2596500 «Фармацевтическая композиция антимикробного действия». Дата регистрации 10 августа 2016 года.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности Научные положения, изложенные в данной диссертационной работе, соответствуют паспорту специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведения исследования соответствуют паспорту специальности конкретно пунктам 2,3,6.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки Работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ФГБНУ ВИЛАР с 2014 по 2017 год (№ государственной регистрации 0576-2014-0009).

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 143 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, посвящённой методам и объектам исследования, четырех глав экспериментальной части, списка литературы и приложений. В диссертации содержатся 21 таблица, 39 рисунков. 3 схемы. Список литературы включает в себя 134 источника, из которых 78 на иностранных языках.