Сравнительное фармакогностическое исследование крушины ломкой и крушины слабительной Шмыгарева, Анна Анатольевна

Введение к работе

Актуальность темы. В настоящее время интерес к лекарственным средствам на основе растительного сырья по-прежнему велик, причем в Государственном реестре лекарственных средств Российской Федерации наблюдается тенденция к увеличению удельного веса препаратов растительного происхождения (Самылина И.А., 2006; Киселева Т.Л., 2010; Куркин В.А., 2007). На отечественном фармацевтическом рынке группа слабительных лекарственных средств в основном представлена препаратами на основе сырья сенны или кассии. Что же касается зарегистрированной в РФ номенклатуры препаратов крушины ломкой и крушины слабительной (жостера слабительного), то она хотя и разнообразна («Рамнил», «Викаир», «Викалин», «Сироп крушины», «Холагол», «Желудочный сбор № 3», «Проктофитол», фиточай «Целебная поляна № 3» для похудения и др.), однако ее реальный ассортимент в аптечных организациях представлен в основном сырьем коры крушины ломкой и плодами жостера слабительного.

Одной из важнейших предпосылок создания лекарственных препаратов на основе коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного является необходимость глубокого изучения химического состава, а также совершенствования методов стандартизации. Дело в том, что литературные данные относительно химического состава коры крушины ломкой не лишены противоречивости. Кроме того, фитохимические аспекты показателей качества сырья крушины ломкой и жостера слабительного также нуждаются в дальнейшем изучении. Так, раздел «Качественные реакции» в фармакопейной статье (ФС) «Кора крушины ломкой» (Государственная фармакопея СССР XI издания) включает только пробирочные реакции, хотя в этом плане перспективным методом является тонкослойная хроматография (ТСХ). Методика количественного определения суммы антраценпроиз-водных в коре крушины является многостадийной, включает такие стадии, как кислотный гидролиз, многократную экстракцию сырья, обработку диэтиловым эфиром – легкокипящим огнеопасным растворителем. При этом расчет содержания суммы производных антрацена осуществляется на отсутствующий в сырье истизин, причем с использованием построения калибровочного графика раствора кобальта хлорида. Что же касается плодов жостера слабительного, то в разделе «Качественные реакции» ФС представлены лишь пробирочные реакции, при этом раздел «Количественное определение» отсутствует. Актуальна также задача по изучению коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного в сравнительном плане.

Решение проблемы совершенствования химической стандартизации новых лекарственных средств (ЛС) связано с разработкой объективных и унифицированных методов анализа сырья и препаратов, причем с использованием стандартных образцов (Арзамасцев А.П. и др., 2000; Самылина И.А. и др., 1994; 2006).

Цель и задачи исследования. Сравнительное фармакогностическое исследование коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного в плане совершенствования методов стандартизации сырья данных растений.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Сравнительное изучение химического состава коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного.

2. Разработка новых подходов к стандартизации сырья коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного.

3. Сравнительное исследование анатомо-гистологических признаков коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного для уточнения диагностических особенностей данного лекарственного растительного сырья.

4. Разработка методик качественного анализа коры крушины ломкой.

5. Разработка методик качественного анализа плодов жостера слабительного.

6. Разработка методики количественного определения суммы антраценпроизводных в коре крушины ломкой.

7. Разработка методики количественного определения суммы антраценпроизводных в плодах жостера слабительного.

8. Разработка и оформление проектов нормативной документации (НД) на сырье «Крушины ломкой кора» и «Жостера слабительного плоды».

Научная новизна. В результате изучения химического состава коры крушины ломкой (Frangula alnus Mill.) и плодов жостера слабительного (Rhamnus cаthartica L.) выделены и идентифицированы с использованием УФ-, ¹Н-ЯМР- ИК-спектроскопии и масс-спектрометрии, а также результатов химических превращений 5 индивидуальных соединений, среди которых доминирующие антраценпроизводные вещества (франгулин А и франгулин В) и флавоноидное вещество (3-О-рутинозид рамнетина) впервые описаны в РФ для данных растений. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного по антраценпроизводным (ведущая группа БАС) с использованием стандартного образца франгулина А.

Разработаны подходы к стандартизации, заключающиеся в обнаружении диагностического доминирующего антраценпроизводного – франгулина А в коре крушины ломкой и доминирующего флавоноида - 3-О-рутинозида рамнетина в плодах жостера слабительного с использованием ТСХ–анализа, УФ-спектроскопии.

Практическая значимость. Разработаны методики качественного анализа коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного с использованием ТСХ и УФ-спектроскопии. Разработана методика количественного определения суммы антраценпроизводных в коре крушины ломкой с использованием спектрофотометрии (аналитическая длина волны – 524 нм) и методического подхода, исключающего такие стадии, как кислотный гидролиз, многократную экстракцию сырья, обработку диэтиловым эфиром, построение калибровочного графика раствора кобальта хлорида. Разработана методика количественного определения суммы антраценпроизводных в плодах жостера слабительного. В проекты ФС «Крушины ломкой кора» и «Жостера слабительного плоды» предложено ввести новые разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» и числовые показатели «Содержание суммы антраценпроизводных не менее 5,0%» для коры крушины и «Содержание суммы антраценпроизводных не менее 2,5%» для плодов жостера.

Разработаны проекты ФСП «Крушины ломкой кора» и «Жостера слабительного плоды», которые рекомендованы для включения в Государственную Фармакопею Российской Федерации XII издания.

Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета (акты внедрения от 07.09.2012 г.). Получено рационализаторское предложение «Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в лекарственном растительном сырье - плодах жостера слабительного» (2012 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты анатомо-гистологического исследования коры крушины ломкой.

2. Результаты анатомо-гистологического исследования плодов жостера слабительного.

3. Результаты сравнительного изучения химического состава коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного.

4. Результаты исследований по разработке подходов к стандартизации ЛРС - коры крушины ломкой, плодов жостера слабительного.

5. Методики качественного анализа ЛРС «Крушины ломкой кора» с использованием РСО франгулина А, ТСХ, спектрофотометрии и ВЭЖХ.

6. Методики качественного анализа ЛРС «Жостера слабительного плоды» с использованием РСО франгулина А, ТСХ, спектрофотометрии и ВЭЖХ.

7. Методики количественного определения антраценпроизводных ЛРС «Крушины ломкой кора» с использованием спектрофотометрии и стандартного образца франгулина А.

8. Методики количественного определения антраценпроизводных в ЛРС «Жостера слабительного плоды» с использованием спектрофотометрии и стандартного образца франгулина А.

Связь задач исследования с планами научных работ. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по темам: «Комплексные исследования по проблеме создания новых лекарственных препаратов природного и синтетического происхождения» (№ Государственной регистрации 01200900658) и «Фармакогностическое и химико-фармацевтическое исследование лекарственных растений и фитопрепаратов (№ Государственной регистрации 01200405620), а также соответствует тематике Проблемной комиссии по химико-фармацевтическим наукам Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на 4-ой Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование 2010» («Научные основы создания новых лекарственных средств», Воронеж, 2010); на межвузовской конференции «Аспирантские чтения» (Самара, 2010, 2011, гг.); на Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 75-летию со дня рождения В.В. Кормачева «Современные проблемы химической науки и образования (Чебоксары, 2012); на II Международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (Москва, 2012).

Основное содержание диссертации опубликовано в 12 научных работах, из них 6 статей в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 148 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 38 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, пяти глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований, их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 138 источников, из которых 48 на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту. Глава 1 содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по современному состоянию исследований крушины ломкой и жостера слабительного, в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растения, фармакологической активности, применению в медицинской практике. В главе 2 представлены характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики химического, физического и физико-химического изучения лекарственного сырья и индивидуальных веществ. В главе 3 обсуждаются результаты сравнительного анатомо-морфологического исследования коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного. В главе 4 приведены результаты сравнительного химического исследования коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного. В главе 5 рассматриваются результаты сравнительного исследования компонентного состава коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии. В главе 6 приводятся результаты исследования методов по совершенствованию методов стандартизации коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного.

В главе 7 представлены результаты исследований по разработке проектов нормативной документации на сырье «Крушины ломкой кора» и «Жостера слабительного плоды».