Введение к работе
Актуальность темы. В условиях современной жизни не избежать развития различных заболеваний, в том числе урологических, доля которых составляет 10 – 12 % в общей структуре заболеваемости населения России (Урология, 2009). Неосложненные инфекции мочевыводящих путей – одни из самых частых заболеваний женщин репродуктивного возраста. По статистике в нашей стране регистрируется 26 – 36 млн. случаев острого цистита в год. Такая высокая заболеваемость свидетельствует об актуальности и необходимости поиска безопасных, эффективных, не оказывающих побочных эффектов лекарств, к которым, прежде всего, относятся фитотерапевтические средства.
В этом аспекте заслуживает внимания изучение отдельных представителей семейства вересковые (Ericaceae Juss.), в частности грушанки круглолистной (Руrola rotundifolia L.) и зимолюбки зонтичной (Chimaphila umbellata (L.) W. Barton), сходных с таким классическим лекарственным растением, издавна применяемым для лечения урологических заболеваний, как толокнянка обыкновенная (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.), относящаяся к тому же семейству. В сравнении с ней они обладают определенными преимуществами. Так, установлено, что грушанка обладает более выраженным противовоспалительным действием и проявляет терапевтическую эффективность при экспериментальном гломерулонефрите (Т.Н. Пензина, 1999). Для зимолюбки характерна противогрибковая активность (J.J. Galvan et al., 2007). В то же время в сравнении с толокнянкой в химическом отношении грушанка и зимолюбка исследованы недостаточно.
Цель и задачи исследования. Целью исследования явилось сравнительное фармакогностическое изучение грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной для обоснования возможности использования дополнительных источников растительного сырья в медицинской практике.
Для реализации поставленной цели следовало решить следующие задачи:
изучить данные литературы по современному состоянию морфолого-анатомических, фитохимических и фармакологических исследований объектов диссертационной работы;
предпринять сравнительное изучение химического состава листьев исследуемых растений, в частности различных элементов, аминокислот, веществ вторичного метаболизма, главным образом фенольных соединений (простых фенолов, флавоноидов, гидроксикоричных кислот, дубильных веществ);
подобрать и адаптировать методики количественного определения отдельных групп фенольных соединений в сырье каждого изучаемого растения после предварительного выявления оптимальных условий их проведения;
определить содержание отдельных групп фенольных соединений в образцах сырья, заготовленных в различных регионах РФ и реализуемых в аптеках;
проанализировать сезонную динамику накопления действующих веществ в листьях грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной для выявления оптимальных сроков их заготовки;
провести сравнительный хромато-масс-спектрометрический и морфолого-анатомический анализ листьев изучаемых растений;
определить числовые показатели листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и разработать проекты фармакопейных статей предприятия (ФСП) «Листья зимолюбки зонтичной», «Листья грушанки круглолистной» и проект изменения к фармакопейной статье (ФС) ГФ XI «Листья толокнянки».
Научная новизна работы. С использованием современных физико-химических методов анализа (хромато-масс-спектрометрия, ВЭЖХ, масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой, спектрофотометрия и др.) предпринято сравнительное фитохимическое изучение листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной.
Методом масс-спектрометрии определено содержание 5 макро-, 53 микро- и ультрамикроэлемента в листьях изучаемых растений.
При анализе аминокислотного состава листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки выявлены 8 незаменимых и 11 заменимых аминокислот.
Подобраны и адаптированы методики количественного определения арбутина, флавоноидов и гидроксикоричных кислот в листьях каждого исследуемого растения.
Проведен сравнительный хромато-масс-спектрометрический и морфолого-анатомический анализ листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной.
Результаты исследований нашли отражение в проектах ФСП «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной», а также в проекте изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки» в разделе «Количественное определение».
Практическая значимость работы. Предложены методики стандартизации листьев изучаемых растений по отдельным показателям, позволяющие объективно оценивать их доброкачественность.
На основании проведенных исследований составлены и внедрены:
спектрофотометрические методики количественного определения отдельных групп фармакологически активных веществ (суммы флавоноидов, суммы гидроксикоричных кислот, арбутина) в листьях грушанки круглолистной (акт о внедрении от 21.10.2009 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники ГОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова Минздравсоцразвития РФ»);
спектрофотометрическая методика количественного определения арбутина в листьях грушанки круглолистной (акт о внедрении от 17.06.2009 г. в учебный процесс кафедры управления и экономики фармации с курсами фармакогнозии и ботаники, фармацевтической технологии, фармацевтической и токсикологической химии ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ»).
Особенности исследований отражены в проектах ФСП «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной» и в проекте изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки».
Положения, выносимые на защиту:
результаты определения элементного и аминокислотного состава сырья грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной;
данные сравнительного фитохимического изучения сырья исследуемых растений,
особенности сравнительного хромато-масс-спектрометрического и морфолого-анатомического анализа листьев объектов исследования,
итоги разработки проектов нормативной документации (НД).
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обобщены на конгрессе «Традиционная медицина-2007» (Москва, 2007); научно-практических конференциях: «Фармация и здоровье» (ПГФА, Пермь, 2005), «Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования» (Уфа, 2006), «Лекарства – человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств» (НФаУ, Харьков, 2006), «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (ЯГМА, Ярославль, 2007), «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (БГУ, Белгород, 2008), «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (ПГФА, Пермь, 2009); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (ЯГМА, Ярославль, 2009); на ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых ЯГМА (Ярославль, 2006-2010); на межкафедральной научной конференции кафедр фармакогнозии и ботаники, фармацевтической и токсикологической химии, фармацевтической технологии, управления и экономики фармации, фармакологии ЯГМА (Ярославль, 2010 г.).
Апробация работы проведена на межкафедральной научной конференции фармацевтического факультета Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М.Сеченова (12 октября 2010 г.).
Публикации материалов исследования. По теме диссертации опубликована 30 работ, из них 7 в журналах, в том числе 2 статьи в журнале, входящем в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАК», и 3 статьи в зарубежных журналах.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО ЯГМА Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (номер государственной регистрации 01.20.0600898). Тема утверждена на заседании Учёного совета ЯГМА (протокол № 2 от 19.10.2005).
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 155 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1-я глава), описания материалов и методов (2-я глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы и приложения. Она иллюстрирована 27 рисунками и 44 таблицами. Список литературы включает 262 источника, из них 56 на иностранных языках.