Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время отмечается повышенный интерес к использованию производных хлоринового ряда в качестве фотосенсибилизаторов (ФС) для фотодинамической терапии (ФДТ) злокачественных новообразований. Одним из лучших ФС этого ряда является фотодитазин – оригинальный отечественный препарат, созданный ООО «Вета-Гранд». Препарат не имеет аналогов и способ получения защищен патентом [Пономаров Г.В. и др., патент РФ 2006]. Фотодитазин (ди-N-метилглюкаминовая соль хлорина е6) получен путем химической модификации метилфеофорбида, выделенного из биомассы зеленой микроводоросли Spirulina platensis Gom. Geitleri, путем культивирования ее в асептическом биофотореакторе. Фотодитазин обладает спектральными, физико-химическими и энергетическими характеристиками, выгодно отличающими его от используемых в клинике ФС отечественного и импортного происхождения. Лекарственной формой фотодитазина является концентрат для приготовления раствора для инфузий 5 мг/мл (Регистрационное удостоверение № ЛС-001246 от 10.02.2006).
Успешное применение ФДТ для лечения опухолей зависит от способности ФС селективно накапливаться в ткани опухоли [Kessel D. et al., 1999]. Поэтому актуальным направлением исследований является совершенствование лекарственной формы с целью повышения селективности накопления фотодитазина в опухоли и увеличения эффективности ФДТ. Одним из возможных путей решения проблемы является создание липосомальной лекарственной формы препарата, которую можно лиофилизировать и хранить при пониженной температуре.
Цель исследования: создание и контроль качества липосомальной лекарственной формы фотодитазина, увеличивающей избирательность противоопухолевого действия и фотодинамической эффективности препарата.
Задачи исследования:
-
На основе фармацевтических исследований выбрать оптимальный состав липосомальной лекарственной формы фотодитазина.
-
Разработать способ получения липосом с максимальной степенью включения фотодитазина.
-
Сравнить избирательность накопления фотодитазина в опухоли известной лекарственной формы и новой липосомальной лекарственной формы.
-
Изучить эффективность фотодинамической терапии с липосомальной лекарственной формой фотодитазина in vivo.
-
Получить лиофилизированную форму липосомального фотодитазина.
-
Обосновать химико-фармацевтические критерии качества готового препарата и разработать методики для установления стандартности липосомальных форм фотодитазина.
Научная новизна исследования. Впервые разработана новая пэгилированная липосомальная лекарственная форма фотодитазина, повышающая избирательность противоопухолевого действия препарата. Обоснованы требования к стандартизации липосомальной лекарственной формы фотосенсибилизатора. Установлены критерии и параметры качества липосомальной лекарственной формы: однородность липосомальной дисперсии, размер частиц не более 200 нм, эффективность включения препарата в липосомы (не менее 85 %). Получены данные о селективности накопления липосомальной лекарственной формы в ткани опухоли Эрлиха мышей, показана высокая эффективность ФДТ.
Практическая значимость. Создана новая пэгилированная липосомальная лекарственная форма «Липосомальный фотодитазин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 1,5 мг». В эксперименте in vivo при ФДТ опухоли Эрлиха показана ее высокая эффективность по сравнению с водным раствором фотодитазина. Разработаны методики: подлинности яичного фосфатидилхолина и фотодитазина (ТСХ и спектрофотометрия), количественного определения фотодитазина в липосомальной лекарственной форме (спектофотометрия), а также очистки липосом от невключившегося препарата (гель-фильтрация). По результатам работы составлен проект ФСП на «Липосомальный фотодитазин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 1,5 мг».
Разработка и производство отечественного высокоэффективного липосомального препарата для ФДТ позволит использовать этот локальный метод лечения на более широком спектре опухолей человека и расширить доступность для широкого круга пациентов.
Апробация работы. Материалы проведенных исследований представлены на конференциях: VIII и IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты», (Москва, 21-22 апреля 2009 г.; Нижний Новгород, 18-19 мая 2010 г.); научной конференции с международным участием «Наноонкология», (Москва 18-19 февраля 2009 г.).
Апробация диссертационной работы проведена 24 мая 2010 г. на совместном заседании кафедры фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета ММА им. И.М.Сеченова и лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ (из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ).
Положения, выносимые на защиту:
-
Состав и технология получения лиофилизированной липосомальной лекарственной формы фотодитазина.
-
Методики фармацевтического анализа: спектрофотометрическое (качественное и количественное) и хроматографическое определение компонентов липосомальной лекарственной формы, гель-фильтрация для очистки липосом от невключившегося в везикулы препарата.
-
Результаты оценки селективности накопления препарата и эффективности ФДТ липосомальным фотодитазином in vivo.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав результатов собственных исследований, общих выводов, списка литературы. Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, содержит 40 рисунков и 18 таблиц. Библиографический список включает 130 наименований, в том числе 92 – на иностранном языке.
