Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Актуальность проблемы безопасности применения лекарственных препаратов 10
1.1. Распространенность непереносимости лекарственных препаратов в различных странах
1.2. Причины развития лекарственной непереносимости 12
1.3. Клинические проявления лекарственной аллергии 17
1.4. Экологические факторы, способствующие формированию лекарственной непереносимости на территории Ставропольского края 19
1.5. Роль условно-патогенных дрожжеподобных и плесневых грибов в развитии лекарственной аллергии 22
Глава 2. Материалы и методы исследования1 30
2.1. Общие описания и исследования 30
2.2. Методы исследования, используемые вработе 33
2.2.1. Проведение опроса - анкетирования 33
2.2.2. Определение уровней общего IgE и специфических IgE и IgG к грибковым аллергенам и аллергену пшеницы в сыворотке крови методом ИФА 36
2.2.3. Определение лекарственной аллергии методом аллергической альтерации лейкоцитов 38
2.3. Статистические и математические методы анализа результатов исследования 41
Глава 3. Фармакоэпидемиологическое обследование населения по данным анкетирования 42
3.1. Характеристика групп респондентов 42
3.2. Распространенность аллергических заболеваний среди опрошенных групп населения 44
3.2.1. Анализ результатов анкетирования среди женщин с аллергическими заболеваниями 45
3.2.2. Анализ результатов анкетирования среди мужчин с аллергическими заболеваниями 64
Глава 4. Сенсибилизации населения Ставропольского края и к условно — патогенным грибам 91
4.1. Характеристика групп обследованных пациентов 91
4.2. Оценка сенсибилизации к плесневым грибам отдельных групп обследованных 101
4.2.1. Уровень общего IgE и специфических IgE и IgG у здоровых пациентов 101
4.2.2. Уровень общего IgE и специфических IgE и IgG у пациентов с атопической бронхиальной астмой средней степени тяжести в приступном периоде 103
4.2.3. Уровень общего IgE и специфических IgE и-IgG у пациентов с аллергическими заболеваниями 106
4.2.4. Уровень общего IgE и специфических IgE и IgG у пациентов с инфекционными заболеваниями 109
Глава 5. Оценка непереносимости лекарственных средств среди населения Ставропольского края (по данным теста аллергической альтерации лейкоцитов) 120
Глава 6. Взаимосвязь между грибковой сенсибилизацией и лекарственной аллергией к антибиотикам природного происхождения 131
Обсуждение результатов 148
Заключение 158
Выводы 160
Практические рекомендации 161
Список литературы 162
Приложение
- Причины развития лекарственной непереносимости
- Экологические факторы, способствующие формированию лекарственной непереносимости на территории Ставропольского края
- Определение уровней общего IgE и специфических IgE и IgG к грибковым аллергенам и аллергену пшеницы в сыворотке крови методом ИФА
- Оценка сенсибилизации к плесневым грибам отдельных групп обследованных
Введение к работе
Повсеместная распространенность аллергических заболеваний, охвативших более 20% населения планеты, ежегодный рост аллергопатологии, усиление тяжести клинического течения и резкое снижение качества жизни пациентов превратили проблему аллергии в глобальную медико-социальную проблему. Как показали исследования, каждые 30 лет распространенность аллергических заболеваний повсеместно удваивается каждые 10 лет (Алёшина P.M., 1998; Лусс Л.В., 2000; Demoly P., Bousquet J., 2001; Хаитов P.M., 2002; Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., 2003).
В последние годы в связи с успехами* фармакологии и созданием большого количества новых лекарственных средств, применение и злоупотребление медикаментами возрастает (МурзичА.В., Голубев М.А., Кручинин А.Д., 2004). Увеличение аллергопатологии среди населения, связанное с изменением'реактивности организма, ведет к росту осложнений лекарственной терапии, в том числе и аллергических реакций на медикаменты. При этом аллергические реакции на медикаменты выявлены у 15,5% больных (Лусс Л.В., 1993).
По данным Новикова Д.К. (2001) осложнения фармакотерапии отмечаются у 6 - 15% или даже 18 - 30% больных, находящихся в наших стационарах, а в США - у 15 - 30% (Patterson R. at al., 1997; Demoly P., Bousquet J. 2001). В 2004 г. FDA получило около 422,5 тысяч отчетов о побочных действиях лекарственных средств. Это почти на 14% больше, чем в 2003 году (около 370,9 тысяч отчетов).
Факторами риска лекарственной аллергии (ЛА) являются контакт с лекарственными средствами (сенсибилизация > к лекарственным препаратам часто встречается у медицинских работников и работников аптек), длительное и частое применение медикаментов (постоянный прием менее опасен, чем интермиттирующий) и полипрагмазия. Кроме того, риск лекарственной аллергии повышают наследственная отягощенность по атопии, аллергиче-
ские заболевания (поллиноз, бронхиальная астма и др.)? наличие пищевой аллергии (Gbombs R.R.A., Gell P.G.H., 1975; De Swarte R.D., 1993; Ильина Н.И., 1996; Дранник Г.Н., 2006).
Важную роль при развитии непереносимости к лекарственным средствам, особенно, антибактериальным препаратам природного происхождения, может играть и грибковая сенсибилизация (Паттерсон Р., Грэммер Л.К., Гринбергер П.А., 2000). Споры грибов являются наиболее распространенными аэроаллергенами. Важной особенностью этих аэроаллергенов является их круглогодичная персистенция. Причем они присутствуют в, окружающей среде, в производственных помещениях и В' квартирах (Украинцева В.В., 1998; Соболев А.В., Васильева И.В. 2001; Kwon-Chung KJ. et al., 1992).
Поэтому представляется целесообразным выявить взаимосвязь между распространенностью аллергии у населения и ЛА, а также сенсибилизацией-к грибковым антигенам, которые могут составлять важную экологическую проблему.
Цель исследования
Изучить распространение лекарственной аллергии в Ставропольском крае, оценить взаимосвязь между непереносимостью антибиотиков и сенсибилизацией к грибковым аллергенам для-повышения безопасности антимикробной терапии.
Основные задачи исследования:
Провести масштабное анкетирование населения и оценить распространенность аллергических заболеваний, в том числе ЛА в Ставропольском крае.
Установить факторы риска возникновения лекарственной аллергии у населения Ставропольского края.
Определить уровни общего IgE, специфических IgE и IgG в сыворотке крови здоровых лиц, больных БА, аллергическими и инфекционными заболеваниями к широкому кругу грибковых аллергенов и аллергену пшеницы.
С помощью теста аллергической альтерации лейкоцитов (ТААЛ) изучить непереносимость антибактериальных средств у здоровых, больных БА и A3.
Оценить взаимосвязь результатов ТААЛ и уровня IgE общего, IgE и IgG специфических к грибковым аллергенам и аллергену пшеницы. Научная новизна исследования
В ходе исследования установлено, что на территории' Ставропольского края среди населения отмечается высокий уровень распространения"аллергических заболеваний, в том числе лекарственной аллергии, что превышает в 2 раза показатели заболеваемости в целом по России.
Впервые установлен высокий уровень сенсибилизации по IgG - опосредованному типу населения Ставропольского края к условно» — патогенным-, грибам: Aspergillus fumigatus, Penicillium chrysogenum, Candida albicans, Al-ternaria tenius, Fusarium oxyspora и Mucor pusillns, а также к аллергену пшеницы.
Впервые оценены масштабы лекарственной аллергии у жителей-Ставропольского края, установлены основные факторы- риска, непереносимости антибактериальных средств.
Среди антибактериальных препаратов непереносимость наиболее часто выявлялась при использовании цефазолина, являющегося производным плесневого гриба рода Cefalosporium acremonium, имеющего общие антигенные детерминанты с другими плесневыми грибами.
Впервые установлено, что у пациентов с БА и другими аллергическими заболеваниями выявлен высокий уровень IgE - опосредованной сенсибилизации к Aspergillus fumigatus, на фоне чего отмечается высокий уровень-непереносимости цефазолина.
Практическая значимость работы
Проведенные исследования позволяют говорить о том, что экологические особенности региона влияют на уровень и характер распространенности аллергических заболеваний, в том числе лекарственной аллергии.
Установлено, что перманентная сенсибилизация населения микоаллергенами через компоненты аэропланктона воздуха помещений и открытого пространства, а также пищевые продукты способствуют развитию скрытой сенсибилизации к антибактериальным препаратам природного происхождения.
В связи с этим показано проведение дополнительного лабораторного исследования пациентам с БА, аллергическими заболеваниями с целью определения уровня грибковой сенсибилизации и непереносимости антибактериальных препаратов перед началом противомикробной терапии.
Основные положения, выносимые на защиту:
Среди населения Ставропольского края установлена высокая распространенность аллергических заболеваний, лекарственной аллергии, в« частности, к антибактериальным препаратам.
Установлены региональные факторы риска непереносимости антибактериальных средств: экологические особенности региона, проживание в сельской-зоне, женский пол, отягощенность семейного аллергологического анамнеза, хронические заболевания внутренних органов (ВДП и ЖКТ).
Определен высокий уровень IgG у населения Ставропольского края к условно — патогенным грибам: Aspergillus fumigatus, Penicillium chrysogenum, Candida albicans, Alternaria tenius, Fusarium oxyspora и Mucor pusillus, а также к аллергену пшеницы.
Выявлена взаимосвязь между ростом лекарственной аллергии к антибактериальным средствам природного происхождения и сенсибилизацией к грибковым антигенам.
Повышена опасность сенсибилизации к антибиотикам природного происхождения, особенно, цефалоспоринам I поколения, у больных с БА и аллергическими заболеваниями.
Внедрение результатов исследования в практику Материалы работы оформлены в виде методических рекомендаций, а также внедрены в практику работы «Центра клинической фармакологии и
9 фармакотерапии», поликлиник и стационаров города и края.
Результаты диссертации используются в учебном процессе кафедры клинической фармакологии СтГМА.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на конференции: «Ваше здоровье», Пятигорск, 1998; на конференции «Экология человека: от прошлого, к будущему», Москва, 2000; на конгрессе "Фармакоэкономика на рубеже третьего тысячелетия", Москва 2001; на III конференции молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины", Москва, 2004; на конференции «Проблемы клинической фармакологии и моделирование в фармакологии и биомедицине», Ростов-на-Дону, 19-20 сентября2006; на конгрессе Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов, Санкт - Петербург, октябрь 2007 года.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 19 печатных работ.
Структура диссертации
Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, библиографического указателя, включающего в себя 192 источника литературы, в том числе 88 отечественных и 104 зарубежных и приложения. Диссертация изложена на 177 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами, 72 рисунками.
Причины развития лекарственной непереносимости
Риск возникновения осложнений значительно повышается по мере расширения контакта с лекарствами в быту и в производстве. Повышенная чувствительность к медикаментам выявлена у 59,3% медицинских работников, 9,3% студентов медицинских училищ, у 14,8%) рабочих заводов медицинских препаратов. У медицинских работников со стажем до 5 лет лекарственная аллергия отмечается в 20,1% случаев, а у лиц со стажем работы до 10-20 лет - в 34,7%. У работающих на производстве в контакте с антибиотиками чрезвычайно часто развивается канди 13 доз различной локализации. У 70% персонала обнаруживаются явления хронического энтероколита и спастического колита (Караулов А.В., 2002).
Несмотря на то, что изучение переносимости и выявление побочных реакций на новые препараты проводятся на стадии их доклинического и клинического изучения, истинное представление о переносимости препарата может быть получено только в процессе их широкого применения на большом количестве больных. Так, по законам статистики выявление НПР, которая возникает с частотой 1 на 1000 возможно при условии, что препарат получали не менее 3000 больных в хорошо контролируемьк условиях, прикоторых повышается вероятность выявления редких и серьезных НПР. Особенности действия лекарственных средств у больных различных категорий (дети, беременные, старики, больные с поражением функции почек, печени и т.д.), а также последствия взаимодействия лекарств выясняются, как правило, после регистрации новых лекарств и их многолетнего применения в реальной жизни (Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., 2003; Михайлов И.Б., Маркова И.В., 2004; Gruchalla R.S., Pirmohamed М., 2006).
Для большинства медикаментов риск развития побочного действия составляет от 1 до 3 % , а аллергию на одно или более лекарственных средств выявляют у 5% взрослых. Поэтому сформировался унифицированный подход к медикаментозному воздействию, предполагающий смещение акцента с эффективности лечения на его безопасность. Среди факторов, обусловливающих высокий процент лекарственных осложнений, можно выделить следующие: рост потребления лекарственных средств населением; широкое распространение самолечения вследствие доступности лекарств (возможности приобретения их без рецепта); ? недостаточность или запаздывание медицинской информации о побочных действиях лекарственных средств; ? полипрагмазия и политерапия; заболевания инфекционного, паразитарного, вирусного или другого характера, сами по себе не являющиеся аллергическими, но в силу особенностей патогенеза создающие возможность формирования сенсибилизации и выработки аллергических антител в ответ на самые различные аллергены, в том числе и лекарственные (в частности, часто возникают аллергические реакции на пенициллин у больных с микозами стоп); применение для лечения и откорма скота антибиотиков, витаминов и других препаратов, создающих возможность сенсибилизации населения за счет примесей, содержащихся в пищевых продуктах (мясо, молоко), полученных от этих животных; ухудшающаяся экологическая обстановка.
Многочисленные наблюдения и исследования лекарственных болезней указывают на многообразие механизмов развития непереносимости лекарственных средств, многие из которых остаются-до настоящего времени неизвестными, недостаточно изученными, дискутабельными (Адо А.Д, 1976; Лусс Л:В., 1993; Астафьева Н.Г. и др., 2000; Паттерсон Р. и др., 2000) . Этим и объясняется сложность проблемы лекарственных осложнений и их классификация. Побочная реакция, на лекарственное средство — неожиданный и нежелательный- эффект, проявляющийся у больного при приеме лекарственного средства в терапевтической (диагностической, профилактической) дозе (Р. Паттерсон и др., 2000). Определение природы побочной реакции принципиально важно при решении вопроса о дальнейшем использовании данного препарата: так, вызванный лекарственным средством побочный эффект, связанный- с относительной или абсолютной передозировкой, можно устранить простым уменьшением дозы. С другой стороны, аллергическая природа реакции на лекарственное средство- означает, что- этот препарат в дальнейшем не может быть испол йзйсйші(ре ащйшЖііВсаї±9і іьіе средства разделяют на две группы: - прогнозируемые побочные реакции, которые: а) часто дозозависимы, б) связаны с известными фармакологическими, свойствами лекарственного средства, в) проявляются у других больных, г) составляют до 80% и более побочных эффектов при использовании этих ЛС; - непрогнозируемые побочные реакции, которые: а) обычно не зависят от дозы, б) обычно не связаны с известными фармакологическими свойствами препарата, в) часто связаны с иммунологической реактивностью больных или с генетическими особенностями больных, подверженных таким реакциям.
В классификацию не входят реакции, относящиеся к событиям, совпавшим по времени с введением лекарственных средств или с самой процедурой введения препарата, но не связанные с лекарственным средством как таковым. Такие реакции часто ошибочно расценивают как побочное действие ЛС, в связи, с чем больные необоснованно избегают употребления этих средств. В частности, после парентерального введения лекарственных средств могут наблюдаться психофизиологические реакции в виде истерического невроза, гипервентиляции, вегетативно-сосудистьіх расстройств (обмороков). Некоторые из этих реакций пред-ставляют собой проявление скрытых психических заболеваний (Scharz М et ah, 1976). Прием плацебо может вызвать развитие состояния напоминающего анафилактический шок (Wolf S., 1959). Лекарственная аллергия может развиться на введение практически любого медикамента, но механизмы развития гиперчувствительности к лекарственным препаратам различны. Распространенность лекарственной аллергии, по результатам исследователей, колеблется в широких пределах, от 1 до 30% и более, но эти данные нуждаются в серьезном анализе, поскольку не учитывается наличие и распространенность реакций на плацебо (Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., 2004).
Экологические факторы, способствующие формированию лекарственной непереносимости на территории Ставропольского края
В 2001 году Центром государственного санитарно — эпидемиологического надзора в Ставропольском крае проводились исследования проб атмо сферного воздуха, отобранных в населенных пунктах на. стационарных постах и на автомагистралях, проб почвы. Оценка состояния атмосферного воздуха в 2001 году показала отсутствие изменений в структуре выброса загрязняющих веществ в атмосферный воздух. Как и в прежние годы, основным фактором загрязнения воздушного пространства явился автомобильный транспорт. На его долю пришлось 76,7% выбросов загрязняющих веществ. Валовой выброс загрязняющих веществ в атмосферу в 2001 году составил 90,4 тыс., тонн, в том числе (тыс. тонн): - твердые .- 7,92 (7,9%); - сернистый.ангидрид - 6,704 (14,9%); - окись углерода-14,134 (17,4%); - окислы азота-28;270 (24,5%); - углеводороды -7,040 (14,1%)% - легколетучие органические соединения-22,369 (18,3%); - прочие газообразные и жидкие соединения — 3,008 (2,6%).
Основная доля загрязняющих: веществ в І атмосферу пришлась на предприятия электроэнергетики.— 35,1%. К ведущим загрязнителям атмосферного воздуха относятся также предприятия и подразделения трубопроводного транспорта общего пользования, химической и нефтегазовой отраслей, доля которых в выбросах загрязняющих веществ составила 13,6%, Г 1-,2% и 13,5%, соответственно.
Количество проб, превышающих предельно допустимые концентрации загрязнения воздушного бассейна, за 1999-2000 г.г. составило от 3,1% от общего числа. Доля пятикратных превышений ПДК за 2000 год составила 0,05%, в 1999 - 0,2%. Обеспеченность городского населения централизованным и нецентрализованным водоснабжением составляет 99,8%, а сельского -93%. Поверхностные источники обеспечивают 80%, подземные - 20% водо-потребления края. В летнее время года многие территории испытывают дефицит питьевой воды. Поэтому, за исключением краевого центра и г. Невин-номысска, питьевая вода подается по графику. Степень износа водопроводных сетей составила 67%. В 2000 году было зарегистрировано 4849 аварийных ситуаций, 90% из них были ликвидированы в первые сутки. В 2000 г. из источников г. Невинномысска (Невинномысский канал) была выделена культура сальмонеллы. В Грачевском районе была зарегистрирована вспышка, острой кишечной инфекции невыясненной этиологии. Общее число пострадавших - 20 человек. В Пятигорске в июне 2000 года в результате разрыва водопровода при проведении ремонтно-профилактических работ были зарегистрированы отравления 16 жителей города.
Основными источниками загрязнения почвы в Ставропольском крае являются: автотранспорт, ядохимикаты и минеральные удобрения, а также крупные промышленные производства, свалки промышленных и бытовых отходов, подавляющее большинство которых не отвечает санитарным нормам.
Планово-регулярная санитарная очистка ТБО организована во всех городах и районных центрах края. В селах централизованный сбор и вывоз ТБО не организован. Бытовые отходы здесь вывозятся, как правило, самими жителями или силами местных сельхозпредприятий. Полигонов хранения, обезвреживания и утилизации промышленных отходов в крае нет. В большинстве сельских населенных пунктов захоронение промышленных отходов, как правило, производилось вместе с бытовыми.
Ухудшение состояния окружающей среды приводит к различным по степени тяжести заболеваниям. Например, в агропромышленном комплексе среди работающих значительный вес занимает гипертоническая болезнь -24,5%, болезни костно - мышечной системы — 18%. Среди работников химической промышленности заболевания сердечно-сосудистой системы составили 21,5%, периферической нервной системы - 11,4%, заболевания верхних дыхательных путей — 29,8%. По сравнению с 1999 годом количество инфекционных заболеваний увеличилось в 4,7 раза, а пищевых отравлений — в 2,3 раза (по данным Главного управления по делам Гражданской обороны и Чрезвычайным ситуациям при правительстве Ставропольского края).
Определение уровней общего IgE и специфических IgE и IgG к грибковым аллергенам и аллергену пшеницы в сыворотке крови методом ИФА
Проведено обследование пациентов методом ИФА для определения уровня общего IgE и специфических IgE и IgG в сыворотке крови к грибковым аллергенам: Aspergillus fumigatus, Penicillium chrysogenum, Candida albicans, Alternaria tenius, Fusarium oxyspora u Mucorpusillus, а также к аллергену пшеницы с целью выявления структуры сенсибилизации к вышеперечисленным аллергенам.
Материалом для исследований служат негемолизированные прозрачные образцы сывороток крови человека. Забор крови для получения сыворотки осуществлялся в процедурном кабинете с соблюдением установленных правил предосторожности. Пробирки с кровью помещали на 1 час в термостат при температуре (36+1 С), а затем в холодильник при температуре (+2 до +8 С) на 16-18 часов. Образовавшиеся при этом сгустки отделяли от стенок стеклянной палочкой. Сыворотку сливали со сгустков в центрифужную пробирку и центрифугировали при 1500-2000 об/мин в течение 20-30 мин. Если тестирование проводилось не сразу, то пробы сыворотки хранились в течение 2 дней при t от +2 С до +8 С. Последовательность проведения анализа соблюдена согласно «Инструкции по применению тест - наборов реагентов для полуколичественного определения общего IgE и специфических IgE и IgG в сыворотке крови».
Метод предназначен для полуколичественного определения уровня общего IgE и специфических IgE- и IgG-антител в сыворотке крови при выявлении причинно-значимых грибковых, бактериальных, бытовых, пищевых и пыльцевых аллергенов.
Для определения общего IgE использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Анализ основан на использовании мо-ноклональных антител (МКАТ), направленных к двум разным антигенным участкам молекулы IgE человека. Одно из МКАТ служит для сенсибилизации поверхности планшетов и обеспечивает связывание на твердой фазе IgE из анализируемых проб. Второе МКАТ, меченное ферментом (пероксидазой из корня хрена), взаимодействует со второй антигенной детерминантой связанных на твердой фазе молекул IgE. Не связавшиеся компоненты анализируемых проб, а также избыток меченных МКАТ удаляют с твердой фазы повторными отмываниями. Активность пероксидазы на твердой фазе определяют по разложению субстрата — перекиси водорода. Продукт реакции разложения превращает молекулы хромогена (тетраметилбензидина - ТМБ) в окрашенное производное, количество которого пропорционально ферментативной активности.
Результаты анализа регистрируют с помощью фотометра вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Концентрацию IgE в пробах определяют по калибровочному графику, построенному на основании зависимости оптической плотности измерения от концентраций IgE в калибровочных пробах. Норма общего IgE для детей старше 10 лет и взрослых составляет 20—100 кЕ/л. Определение специфических IgE и IgG Главным биологическим реагентом при определении специфических IgE и IgG являются моноклональные антитела (МКАТ) против IgE и IgG человека, меченные пероксидазой, способные выявлять IgE- и IgG-антитела в аллергосорбентном ИФА. Сущность, определяющая специфичность IgE- и IgG-антител, состоит в твердофазном двухстадийном иммуноферментном тесте, основанном на сочетании иммунологических реакций на первом этапе между грибковыми аллергенами, сорбированными на полистироловой поверхности 96 - луночного планшета и специфическими IgE - и IgG-антителами из образца сыворотки к этим аллергенам. С образованием на твердой фазе иммунологического комплекса АГ-АТ; на втором этапе - между комплексом АГ-АТ и коньюгатом МКАТ - анти - IgE или анти-IgG с образованием иммунологического комплекса АГ-АТ-АТ, меченого ферментом пероксидазой; последующая ферментативная цветная реакция происходит между пероксидазой и субстратом. Продукт реакции разложения превращает молекулы хромогена (тетраметил-бензидина - ТМБ) в окрашенное производное, количество которого пропорционально ферментативной активности. Степень окрашивания учитывается фотометрически при 450 нм.
Содержание аллергенспецифических IgE-или IgG-антител в исследуемых образцах выражается в классах (1-4), соответствующих низкой, средней, умеренно-высокой и высокой концентрации IgE-или IgG-AT.
Тест аллергической альтерации лейкоцитов (ТААЛ) предложен профессором Гервазиевой В.Б. в 2002 году (НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН). Определение гиперчувствительности к лекарствам проводится у пациентов, указавших на наличие аллергических реакций на лекарственные препараты в анамнезе, с целью установления сенсибилизирующего препарата, профилактики последующих аллергических осложнений медикаментозного лечения и дифференциальной диагностики лекарственной аллергии. Противопоказаний нет.
Метод аллергической альтерации лейкоцитов моделирует in vitro не только IgE - обусловленную аллергическую реакцию к лекарственным препаратам и их метаболитам, но и реакции, обусловленные сенсибилизированными Т-клетками, поскольку в образцах цельной- крови наряду с гранулоцитами присутствуют клетки лимфоцитарного и моноцитарного-ряда. Активация последних под воздействием специфического лекарства индуцирует секрецию цитокинов, способных вызвать дегрануляцию клеток-мишеней грану-лоцитарного ряда. В условиях in vitro этот феномен воспроизводится-клетками цельной периферической крови пациента. Применение в тесте люминесцентной- микроскопии витально флюорохромированных препаратов после инкубации с аллергеном позволяет оценить морфологическую альтерацию гранулоцитов без предварительного их выделения. При этом степень выраженности реакции может быть количественно представлена в виде процента альтерированных клеток.
В основу метода положен принцип витальной флюоресцентной микроскопии микропрепаратов, приготовленных путем смешивания флюорохрома акридинового оранжевого с образцами хелатонированной крови больных, предварительно инкубированной с растворами испытуемых медикаментов и физиологическим раствором.
Оценка сенсибилизации к плесневым грибам отдельных групп обследованных
В группу здоровых были включены люди, не имеющие в анамнезе аллергических, инфекционных и хронических обструктивных заболеваний дыхательных путей. В эту группу вошёл 51 человек — 20 (40%) мужчин и 31(60%) женщина. Средний возраст составил 32,49±2,21 года. Средняя степень сенсибилизации по IgE — опосредованному типу к АГ Aspergillus fumigatus представлена в 21,6% случаев, к AT Alternaria tenius - в 31,4%, а к AT Penicillium chryzogenum - лишь у 19,6%. К AT Candida albicans средний уровень IgE - антител выявлен у 15,7% к AT Fusarium oxyspora- у 23,5% пациентов, а к AT Mucor pussilus - в 25,5% случаев. Средняя степень сенсибилизации по IgE - классу к АГ пшеницы выявлена у 40,5% здоровых. Наиболее часто у этой группы обследованных выявлялся низкий уровень антител класса Е. Так к AT Aspergillus fumigatus низкая степень сенсибилизации отмечена у 78,4% обследованных, к AT Alternaria tenius - у 68,8%. К AT Penicillium chryzogenum низкий уровень IgE антител выявлен также в 78,4% случаев, а к AT Candida-albicans — у большинства здоровых пациентов (85,3%). Низкий уровень сенсибилизации к АГ Fusarium oxyspora составил 76,5% обследованных, к АГ Mucor pussilus — 74,4%. К АГ пшеницы низкий уровень IgE — антител выявлен у 59,4% обследованных пациентов, включенных в группу здоровых. В свою очередь высокий уровень IgG отмечен в 37,3% случаев к. АГ Aspergillus flimigatus, в 35,3% - к АГ Altemariaenius, в 37,3% - ю AT Penicillium chryzogenum, в 60,8% - к AT Candida albicans и,в»23,5% случаев к АГ Mucor pussilus. Высокий уровень IgG к АГ Fusarium oxyspora в группе здоровых обследованных отмечен в 13,8% случаев, а-к АГ пшеницы определен у 27%,человек.
Средний уровень IgG антител у здоровых обследованных к AT Aspergillus fumigatus составил 39,2%, в 56,8% случаев - к AT Altemaria tenius, к АГ Penicillium chryzogenum и к AT Candida albicans — у 33,3% обследованных к каждому. К AT Fusarium oxyspora средняя степень сенсибилизации noJgG — классу составила 52,9% случаев и к AT Mucor pussilus — у 5L%. Средний уровень иммуноглобулинов класса G к АГ пшеницы составил,32,4%. Необходимо отметить, что у трети здорового населения нашего края отмечаются повышенные уровни специфических иммуноглобулинов G к плесневым антигенам и АГ пшеницы. Высокий уровень IgG к грибковым антигенам связан, видимо, с широким промышленным производством зерновых культур на территории региона, а соответственно, сопутствующим этому высоким уровнем пораженности зерна вышеперечисленными грибами в отдельных районах края, а также длительным контактом населения с грибковыми аллергенами, которыемогут поступать в виде аэроаллергенов и через продукты питания. Нами были выделены 3 группы пациентов по характеру основных заболеваний: больные бронхиальной астмой (БА), больные с аллергическими заболеваниями (A3) и пациенты с инфекционными заболеваниями (ИЗ). Необходимо отметить, что в патогенезе бронхиальной астмы одними из ведущих факторов воздействия являются экзогенные аллергены, и среди них значительная роль принадлежит фибам (Чучалин А.Г., 1990; Лолор-младший Г., Фишер Т., 2000). Нами была проведена оценка специфической сенсибилизации к условно - патогенным фибам данной фуппы пациентов. В фуппу пациентов с Б А вошли 169 человек. Среди них -104 мужчины в возрасте от 11 до 70 лет и 65 женщин - в возрасте от 11 до 64 лет. Средний возраст пациентов составил 24,72±1,22 года. В процессе анализа было установлено, что средний уровень общего иммуноглобулина Е у пациентов с БА был выше в 8 раз, чем в группе здоровых и составил - 712,06 ±68,2 кЕ/л (р 0,0001) (рис.25). Анализируя результаты аллергологического обследования у пациентов с БА, было установлено, что в этой группе, по сравнению со здоровыми пациентами, были отмечены достоверно более высокие уровни специфического IgE и IgG: к АГ Aspergillus fumigatus - 1,49±0,75 кЕ/л (р=0,023) и 9,95±0,59 мкг/мл (р=0,000001), соответственно; специфического IgG к АГ Penicillium chryzogenum - 9,47±0,91 мкг/мл (р=0,0045); специфического IgG к АГ Fusa-rium oxyspora - 8,62±0,41 мкг/мл (р=0,000002); специфических IgE и IgG к АГ Mucor pussilus - 1,37±0,29 кЕ/л (р=0,03) и 8,72±0,26мкг/мл (р=0,000001), со ответственно, а также специфического IgG к АГ пшеницы - 8,08±0,77мкг/мл (р=0,002) .
Таким образом, у пациентов с БА в отличие от здоровых высокий уровень сенсибилизации по IgE - типу отмечается чаще ко всем грибковым антигенам, но не к АГ пшеницы. Кроме того, увеличивается доля больных с сенсибилизацией средней степени по IgE - опосредованному типу, особенно, в отношении AT Aspergillus fiimigatus, Penicillium chryzogenum и Mucor pussilus.
Показатели среднего уровня сенсибилизации по IgE - зависимому типу вэтой группе обследованных также были выше. Так средняя степень сенсибилизации к АГ Aspergillus fumigatus отмечена у 46,8% (р 0,01) пациентов с A3 и превышает показатель группы здоровых в 2,2 раза. Уровень IgE антител 2 класса к АГ Alternaria tenius превысил показатель группы здоровых в 1,4 раза и составил 43,9%, а к AT Penicillium chryzogenum средняя степень сенсибилизации была выше в 1,9 раза (38,1%, р 0,05). У 21% пациентов с A3 IgE-антитела среднего уровня выявлены к АГ Candida albicans, что незначительно превышает данные группы здоровых. К AT Fusarium oxyspora средняя степень сенсибилизации отмечена у 33,1% обследованных с A3, к AT Mucor pussilus — у 46,8% (р 0,01) пациентов, что превысило показатель группы здоровых пациентов в 1,8 раза. Уровень IgE антител среднего (класса) класса к АГ пшеницы у больных A3 были практически одинаковыми с группой здоровых (45,4%).
Частота выявления! IgG - антител к плесневым грибам у больных с A3 также существенно отличается от показателей- группы здоровых пациентов и представлен следующим образом: высокий и очень высокий уровень антител класса G к AT Aspergillus fumigatus превышает показатели здоровых пациентов в 1,5 раза (54,7%, р 0,05), к АГ Alternaria tenius - в 1,4 раза (49%), к АГ Penicillium chryzogenum - в 1,3 раза (50,4%), а к AT Fusarium oxyspora и Mucor pussilus - в 3,7 (51%, р 0,001) и в 2,2 (51,1%, р 0,01) раза, соответствен 109 но. В то же время показатель высокого уровня IgG к АГ Candida albicans не отличался от показателей здоровых пациентов и составил 57,5%. Высокий уровень IgG к АГ пшеницы выявлен у 48,1% (р 0,05) пациентов с A3.
Средний уровень IgG к грибковым АГ у пациентов с аллергическими заболеваниями был ниже чем, в группе здоровых пациентов и отмечен в 32 4% случаев к AT Aspergillus fumigatus, в 41,7% (р=0,05) случаев к АГ А1ernaria tenius, у 30,9% больных A3 к AT Penicillium chryzogenum. К АГ Candida albicans уровень IgE антител 2 класса был несколько выше и выявлен у 36% обследованных. Вто же время средний уровень IgG - антител к AT Fusa-rium oxyspora в группе больных с A3 встречается в 2 раза реже и отмечен в 25,2% (р 0,001) случаев, а к АГ Mucor pussilus - в 1,6 раза реже (32,4% (р 0,01) пациентов). Уровень IgG антител 2 класса к.АГ пшеницы был выше, чем в группе здоровых и составил 40,2% (р 0,001) случаев.