Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Сведения о болиголове пятнистом 10
1.1.1. Болиголов пятнистый: морфология, распространение 10
1.1.2. Химический состав болиголова пятнистого 11
1.1.3. Фармакологические, фармакотерапевтические и токсикологические свойства вытяжек из болиголова пятнистого 12
1.1.4. Характеристика биологически активных веществ, содержащихся в болиголове пятнистом 15
1.2. Нестероидные противовоспалительные препараты как средства для лечения воспаления 22
1.2.1. Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов 24
1.2.2. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных препаратов 30
Глава2. Материалы и методы исследования 37
Глава 3. Результаты собственных наблюдений 53
3.1. Изучение острой токсичности вытяжек болиголова пятнистого 53
3.2. Изучение противовоспалительных свойств вытяжек болиголова пятнистого 53
3.2.1. Влияние вытяжек болиголова пятнистого на развитие острого воспалительного отёка, вызванного каррагенином, гистамином и серотонином 53
3.2.2. Влияние вытяжек болиголова пятнистого на развитие иммунного воспаления 60
3.2.3. Влияние вытяжек болиголова пятнистого на хроническое про-лиферативное воспаление 69
3.2.4. Влияние вытяжек болиголова пятнистого на процессы репаративной регенерации 75
3.3. Исследование анальгетических свойств вытяжек болиголова пятнистого 82
3.4. Изучение жаропонижающего действия вытяжек болиголова пятнистого 93
3.5. Изучение антигипоксических свойств вытяжек болиголова пятнистого 95
Глава 4. Обсуждение результатов исследования 99
Выводы 121
Список литературы 123
- Болиголов пятнистый: морфология, распространение
- Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов
- Изучение противовоспалительных свойств вытяжек болиголова пятнистого
- Исследование анальгетических свойств вытяжек болиголова пятнистого
Введение к работе
Актуальность проблемы
Воспаление как патологический процесс, лежащий в основе большинства заболеваний человека, является центральной проблемой медицины [Альперн Д. Е., 1959; Чернух А. М., 1979; Каратеев А. Е., 2007]. Рост ревматических заболеваний и других болезней, протекающих с выраженной воспалительной реакцией и болевым синдромом, хроническое их течение, частое развитие осложнений, длительная потеря трудоспособности определяют социально-медицинское значение и актуальность поиска средств лекарственной регуляции этого процесса [Насыров X. М., Фархутдинов Р. Р., 1985; Си-гидинЯ. А., 1990]. С целью коррекции воспаления в настоящее время широко применяются нестероидные противовоспалительные средства (НПВП). По данным ВОЗ, препараты этой группы занимают второе место после антибиотиков по массовости их применения. Ежедневно в мире НПВП используют около 30 миллионов пациентов и эта цифра постоянно возрастает. Специфическая способность этих препаратов влиять на важнейшие патологические процессы (возникновение и проведение болевого импульса, воспаление, агрегацию тромбоцитов, неоангиогенез, апоптоз и др.) определила широкий круг заболеваний и патологических состояний, при которых они с успехом используются. К сожалению, приём НПВП приводит к серьёзным осложнениям, прежде всего связанным с развитием патологии желудочно-кишечного тракта [Каратеев А. Е., Насонов Е. Л., 2006]. Это обосновывает актуальность поиска новых эффективных нетоксичных антифлогистиков, способных корректировать воспалительный процесс с выраженным терапевтическим эффектом без нежелательных побочных явлений и осложнений.
В настоящее время лекарственные растения продолжают оставаться одними из перспективных источников получения новых препаратов. Преимущества применения фитопрепаратов перед синтетическими лекарственными средствами очевидны и состоят в том, что они обладают широким диа-
пазоном терапевтических доз, многими фармакотерапевтическими эффектами, обусловленными наличием в растениях комплекса биологически активных веществ, мягкостью действия, возможностью длительного их использования без опасности возникновения побочных эффектов [Почему..., 1989; Лекарственные..., 1990; Пашинский В. Г., 2007].
В связи с этим наше внимание привлекло достаточно часто применяемое в народной медицине, но до настоящего времени малоизученное растение из семейства зонтичных - болиголов пятнистый (Conium maculatum L.). Проведённый анализ литературных данных о применении болиголова в народной медицине позволил выявить основной спектр фармакотерапевтиче-ского действия этого растения: противовоспалительное, болеутоляющее, се-дативное, противоастматическое, противосудорожное, противораковое и другие [Дадобаева О., 1972; Еремина Н. К., 1983; Завражнов В. И. и др., 1993; Лекарственные..., 2005; French D.H., 1971].
Содержание в болиголове пятнистом комплекса биологически активных веществ с различной химической структурой (алкалоиды, фенольные соединения и др.), предполагает широту фармакотерапевтических эффектов. Известно, что соединения фенольной группы обладают противовоспалительным, антиоксидантным, спазмолитическим, адаптогенным, седативным, кровоостанавливающим, антимикробным и другими действиями [Барабой В. А., 1984; Турищев С. Н., 1999; Лекарственные..., 2005]. Флавоноиды ингибиру-ют перекисное окисление липидов [Лукьянчук В. Д., Савченкова Л. В., 1998; Torel J. et al., 1986], уменьшают проницаемость капилляров, что приводит к торможению экссудативной фазы воспаления, угнетают активность НАДФ-оксидазы и изменяют секрецию лизосомальных ферментов [Са-раф А. С, Оганесян Э. Т., 1991; Окуневич Н. В. и др., 1992]. Под их воздействием предотвращается патологически повышенный синтез свободных радикалов, цитотоксических окислительных агентов, медиаторов воспаления. Одним из важных механизмов противовоспалительного действия флавонои-
7 дов является их способность к ингибированию каскада метаболизма арахи-доновой кислоты, из которой образуются медиаторы воспаления [Чернов Ю. Н. и др., 2004]. Другими биологически активными веществами болиголова пятнистого являются алкалоиды пиперидинового ряда - кониин и его производные [Зориков П. С, 2005]. Известно, что кониин обладает никоти-ноподобным действием [Орлов Б. Н. и др., 1990], блокирует депрессорную реакцию при раздражении блуждающего нерва; вызывает сокращение изолированного отрезка кишечника и матки морской свинки [Bowman W. С, Sanghvi I. S., 1963], уменьшает чувствительность мышц к ацетилхолину [На-легатская А. В., 1953].
Учитывая содержание высокоактивных веществ, сведения народной медицины, немногочисленные экспериментальные данные, большую сырьевую базу, доступность сырья, широкую возможность культивирования, представлялось актуальным комплексное исследование, направленное на изучение противовоспалительных свойств извлечений из болиголова пятнистого.
Цель исследования
Целью настоящей работы явилась оценка противовоспалительной, анальгетической и жаропонижающей активности извлечений из болиголова пятнистого.
Задачи исследования:
Провести сравнительное изучение противовоспалительной активности извлечений из болиголова пятнистого и нестероидных противовоспалительных препаратов, определить их действие на показатели системы крови на моделях воспаления.
Исследовать анальгетическую активность извлечений из болиголова пятнистого.
Оценить жаропонижающее действие извлечений из болиголова пятнистого.
Изучить влияние извлечений из болиголова пятнистого на процесс репаративной регенерации.
Оценить антигипоксические свойства извлечений из болиголова пятнистого.
Исследовать стресспротективное действие извлечений из болиголова пятнистого при различных патологических состояниях.
Научная новизна
Впервые выполнено широкое сравнительное экспериментальное исследование фармакологических свойств 14 извлечений, полученных из надземной части болиголова пятнистого первого (трава) и второго (соцветия, плоды) года вегетации. Выявлена способность настоек из травы, соцветий, плодов из сухого и свежесобранного сырья, а также фракций фенольных соединений оказывать выраженное антиэкссудативное и обезболивающее действие, сопоставимое с эффектами синтетических препаратов (метамизол натрия, диклофенак натрия, нимесулид). Показано, что настойки из травы, соцветий и плодов болиголова пятнистого из сухого и свежесобранного сырья проявляют антипролиферативную и жаропонижающую активность, сдерживают развитие иммунного воспаления, нормализуют гематологические и биохимические показатели крови. Установлено, что настойка из сухих соцветий болиголова пятнистого ускоряет заживление кожной лоскутной раны. Впервые обнаружено, что настойки из травы, соцветий сухого и свежесобранного сырья, этилацетатные фракции из болиголова пятнистого обладают антигипоксическим действием. Все исследуемые извлечения проявляют ан-тистрессорные свойства на фоне воспаления, тканевой гипоксии.
Практическая значимость работы
Результаты экспериментальных исследований могут служить основой для создания новых лекарственных препаратов из болиголова пятнистого для лечения воспалительных заболеваний, сопровождающихся болевым синдро-
9 мом. Наиболее перспективной является настойка соцветий, полученная из сухого сырья.
Апробация работы
Основные положения и результаты работы представлены на: научно-практической конференции «Достижения современной гастроэнтерологии» (Томск, 2005), 7-м конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2006), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской (Томск, 2006), научно-практической конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2005, 2007), 1-м международном съезде фитотерапевтов (Москва, 2006), 2-й международной (XI Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2007), 3-й интернациональной научной конференции «Традиции медицины: текущая ситуация и перспективы развития» (Улан-Уде, 2008).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, в том числе 1 — в центральном журнале, рекомендованном перечнем ВАК.
Объём и структура диссертации.
Работа изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 291 источник, из них 222 - на русском, 69 - на иностранном языках. Диссертация иллюстрирована 40 таблицами и 5 рисунками.
Болиголов пятнистый: морфология, распространение
Все органы болиголова пятнистого содержат алкалоиды группы пиперидина, главным из которых является кониин, обусловливающий неприятный мышиный запах растения [Дударь А. К., 1980]. Надземная часть, по литературным данным, содержит эфирные масла 0,076—0,078 % [ГоряевМ. И., 1952], полиацетиленовые соединения: фалько-ринон [BohlmannF., 1971], флавоноиды: диосмин [Атлас..., 1983; Чопик В. И. и др., 1983; Растительные..., 1988]. Стебли: алкалоиды 0,01—0,58% [Соколов В. С, 1952; Золотниц-каяС.Я., 1958, 1965], кумарины: 0,04—0,58% [Мурадян А. А., 1971], анто-цианы: 3-ксилозилгалактозид цианидина, ферулоиловый и синапоиловый эфиры 3-ксилозилглюкозилгалактозида цианидина [Harborne J. В., 1976]. Листья: эфирное масло 0,08 %, алкалоиды 0,01—0,18 %, витамины: С, каротин, кумарины 0,13—0,17% [Растительные..., 1988], флавоноиды: кверцетин, гесперидин, диосмин [Растительные ..., 1988; CrowdenR. К. et al., 1969]. Цветки: алкалоиды 0,09—0,24 %, витамин: С, флавоноиды: кверцетин, кемпферол, диосмин, лютеолин [Растительные..., 1988]. Плоды: эфирное масло 0,017%, алкалоиды 0,73—2%: кониин, Y-конисеин, N-метилкониин, конгидрин, Y-конгидрин, 2-метилпиперидин, пиперидин, конгидрон, N-метилпсевдоконгидрин [Золотницкая С. Я., 1958, 1965; Черепнин В. Л., 1987; Roberts М. F., 1980; Roberts М. F., Brown R. Т., 1981], кумарины: 0,09—0,52%) [Мурадян А. А., 1971], бергоптен, ксантотоксин, флавоноиды: гесперидин [Harborne J. В., Williams С. А., 1972], антоциа-ны, азотсодержащие соединения: пипеколиновая кислота [Cromwell В. Т., 1956], жирное масло 11,3—17,5 % [Jones G., Early F. R., 1966], в его составе кислоты (в процентах): петрозелиновая - 56,3, петрозелидиновая, линолевая - 23, пальмитиновая - 4, стеариновая - 0,7, олеиновая - 15,1 [Растительные..., 1988; KleimanR., Spencer G. F., 1982]. Корни: алкалоиды 0,02—0,04 % [Соколов В. С, 1952], кумарины 0,09— 0,29%) [Мурадян А. А., 1971], фенолкарбоновые кислоты: кофейная [BuchM. I., 1960], полиацетиленовые соединения: фалькаринон, дигидро-фалькаринон, фалькаринолон [BohlmannF., 1971]. токсикологические свойства вытяжек из болиголова пятнистого Как ядовитое и лекарственное растение болиголов пятнистый был хорошо известен ещё в древности. В Афинах и Древней Греции его соком лишали жизни приговорённых к смерти. Им был отравлен неугодный режиму
Сократ. Симптомы отравления болиголовом следующие: сонливость, слабость, сильные головные боли. Кроме того, он вызывает усиление секреции слюнных желёз, нарушение дыхания, паралич окончаний чувствительных и двигательных нервов, а также центральной нервной системы [Мазнёв Н. И., 2007]. Непосредственной причиной смерти является паралич дыхательной мускула туры; в отдельных случаях, когда отравление развивается очень бурно, пострадавший погибает от паралича дыхательного центра [Зориков П. С, 2005]. Описаны три формы отравления этим растением: паралитическая («форма Сократа», при которой вначале немеют ступни ног), бредовая и форма с головокружением и расстройством зрения. Чаще эти три формы проявляются одновременно. Смертельная доза болиголова для человека варьирует в диапазоне от 0,5 до 1 г [Мазнёв Н. И., 2007]. Болиголов использовали в своей клинической практике для лечения различных заболеваний такие знаменитые врачи, как Гиппократ, Гален, Авиценна. Известный для своего времени венский врач Штерк в 1760 году писал: «Но славнейшее из всех лекарств при раке есть болиголов - это действеннейшее лекарство от рака, какого бы вида он не был» [Корепанов С. В., 2002]. Его лекарственное сырьё (надземная часть) было включено в фармакопеи России 1—4-го изданий (1866—1902 гг.), а также в фармакопеи ряда стран Западной Европы и Южной Америки в качестве болеутоляющего и противосудорожного средств [Ворошилов В. Н., 1941; Шрётер Г. К., 1972; Растительные..., 1988; Imbesi А., 1964]. В народной медицине настойка, сок из надземной части применяются как болеутоляющее, седативное, противо-судорожное, противовоспалительное [Лавренова Г. В. и др., 2007], а также как противоастматическое, противораковое средства. Используют при хорее, желудочных и кишечных коликах, анурии, анемии, дисменореє, поллюциях, сифилисе [Роллов А. X., 1908; Абрамов М. М., Газе О. Ф., 1950; Но-сальМ. А., Носаль И. М., 1958; ЗавражновВ.И. и др., 1993; Лекарственные..., 2005; French D. Н., 1971], при онкологических заболеваниях [Мазнёв Н. И., 2008]. Болиголов стимулирует работу кроветворных органов, избавляет от варикозных расширений. Препараты из растения применяются при сильной продолжительной головной боли, в виде примочек - при хроническом воспалении глаз, потере слуха, импотенции; болезнях костей. Порошок травы
Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов
Подавляющее большинство НПВП являются слабыми органическими кислотами со сравнительно низким уровнем рН. Для них характерны общие фармакологические свойства: высокая степень абсорбции в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ), высокая степень связывания с альбуминами, примерно одинаковый объём распределения, способность накапливаться в очаге воспаления. Период полувыведения (Ti/2 ) данной группы препаратов варьируют в широких пределах. НПВП делятся на лекарственные средства с коротким Туг ( 6 часов): ацетилсалициловая кислота, диклофенак натрия, ибупрофен, индометацин, кетопрофен, нимесулид, флурбипрофен, этодолак, целекоксиб и длительным Tj/2 ( 6 часов): дифлунизал, мелоксикам, напрок-сен, пироксикам, ацеклофенак, лорноксикам [Рациональная..., 2007]. НПВП широко применяются, прежде всего, при воспалительных и дегенеративных заболеваниях суставов и позвоночника (ревматоидный артрит, спондилоартриты, остеоартроз, межпозвоночный остеохондроз и деформирующий спондилез), острой ревматической лихорадке, болезнях мягких тканей, большой группе заболеваний, сопровождающихся болями в нижней части спины [Насонов Е. Л. и др., 1998; Насонов Е. Л., 2000 а, 2004; Цветко-ва Е. С, 2005; Бунчук Н. В., 2006; Годзенко А. А., 2006; Чичасова Н. В., 2006 а, б, в; Бадокин В. В., 2007; Каратеев А. Е., 2007; Prasad К., 2006]. В последнее время область применения НПВП существенно расширилась: их стали использовать не только в ревматологии, но и в кардиологической практике для профилактики развития тромбозов и раннего развития атеросклероза при иммуновоспалительных заболеваниях. Их применение целесообразно в малой хирургии, в лечении мигрени, олигоменорреи, деменции Альцгейме-ровского типа, в онкологии (в частности, для профилактики рака толстого кишечника и возможного метастазирования злокачественных опухолей различной локализации) [Бадокин В. В., 2006]. Различные противовоспалительные средства оказывают влияние на отдельные патофизиологические и биохимические механизмы либо на несколько одновременно. Многочисленные данные свидетельствуют о том, что одни и те же средства оказывают выраженное действие на одних моделях воспаления, малоэффективны или неэффективны на других. Например, при быстром, но кратковременном отёке, полученном при помощи гистамина, се-ротонина, декстрана, формалина, яичного белка, слабо действуют ацетилсалициловая кислота или фенилбутазон, тогда как при медленно развивающем ся и длительно протекающем воспалении (каолин, каррагенин) эффект этих средств весьма значителен. Индометацин не влиял на развитие гиперэкссудации, вызванной формалином и серотонином, но был высокоэффективным при отёках другого генеза.
Это, вероятно, обусловлено тем, что отдельные разновидности воспаления, вызываемые различными флогогенными агентами, отличаются особенностями своего развития и факторами, участвующими в их генезе [Лещинский А. Ф., Зуза 3. И., 1985; Фармакологическая..., 1987]. Несмотря на широкое клиническое применение, механизм действия НПВП долгое время оставался неизвестным. К середине 60-х годов прошлого века были описаны многочисленные биологические эффекты аспирина, включая нарушение окислительного фосфорилирования и ингибицию синтеза некоторых ферментов, принимающих участие в биосинтезе белков и РНК, особенно тех, активность которых зависит от пиридиннуклеотида. Однако все эти эффекты проявлялись в концентрации препаратов, которая была существенно выше терапевтической [Насонов Е. Л. и др., 1998]. Для объяснения сущности противовоспалительного действия НПВП было создано много теорий, однако наибольшее распространение получила простагландиновая теория, позволяющая объяснить многие фармакологические и клинические эффекты этой группы лекарственных веществ [Фармакологическая..., 1987]. По современным представлениям, в инициации начальных проявлений воспаления решающую роль играют медиаторы воспаления - гистамин, серотонин, кинины, простагландины (ПГ), причём последние выполняют ключевую роль в развитии и поддержании воспалительного процесса, формировании болевого восприятия, модулировании гипоталамиче-ских структур, участвующих в терморегуляции. При этом ПГ активно вмешиваются в воспалительный процесс, обусловливая его различные клинические проявления. Полагают, что ПГЕ2 индуцирует воспалительную реакцию, расширяет артериолы, увеличивая ток крови в зону воспаления, вызывает боль, повышение температуры, усиление лейкоцитарных реакций, в то время как nTF2a в определённой мере является антагонистом ПГЕ [Лекарственная..., 1988; Прибытков Ю. Н. и др., 1991; Лапина Т. Л., 2007; Vane J. R., 1976; Griglewski R. J., 1980; Kuehl F. A., 1980; Robinson D. R., 1983]. Имеются данные о том, что синтез ПГ стимулирует оксид азота (N0) [Брехман И. И., 1980]. Кроме того, интермедианты метаболизма арахидоновой кислоты продлевают и усиливают флогогенное действие других медиаторов воспаления (гистамина, серотонина, кининов) [Лекарственная..., 1988; Прибытков Ю. Н. и др., 1991; Vane J.R., 1976]. В 1971 году исследователи J. Vane, J. Smith и A. Willis расшифровали основной механизм действия НПВП [Vane J. R., 1971; Vane J. R. et al., 1998], который связан с подавлением (торможением, ингибированием) активности полиферментного комплекса (называемого простагландинсинтетазой или ЦОГ), включающего диоксигеназу, изомеразу, редуктазу и др., катализирующего метаболизм полиненасыщенной арахидоновой кислоты, образующейся под влиянием фермента фосфолипазы А2 из фосфолипидов клеточных мембран. ЦОГ является бифункциональным связанным с клеточной мембраной гемопротеином, локализованным в эндоплазматическом ретикулуме вблизи мест высвобождения арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов. ЦОГ, функционирующая в присутствии молекулярного кислорода и различных кофакторов, катализирует две ключевые реакции в метаболизме арахидоновой кислоты, ведущие к образованию циклических эндоперекисей [Руководство..., 2000; Насонов Е. Л., 2001, 2002]. Было установлено, что НПВП необратимо блокируют два изофермента ЦОГ путем ацетилирования серина в положениях 530 (ЦОГ-1) и 516 (ЦОГ-2), что приводит к нарушению связывания арахидоновой кислоты с суб-страт-связывающим центром простагландинсинтетазы.
При этом известно, что инактивируя ЦОГ-1, участвующую в регуляции многих физиологических процессов в организме, в защите от повреждения большинства тканей и органов (слизистая оболочка желудка, почки, тромбоциты), НПВП вызывают множество побочных эффектов - гастропатии, нефропатии, кровотечения и др. Экспрессия же ЦОГ-2 в различных видах тканей, включая макрофаги и синовиальные клетки, возникает только на воспалительный стимул и митоге-ны, в связи с этим предполагается, что противовоспалительное действие НПВП обусловлено ингибированием ЦОГ-2 [Vane J. R., 1971; Roth G. J., Siok C.J., 1978; Meade E. A. et al., 1993; LeeM. et al., 1994; Structural..., 1996; Crofford L. G., 1997; Needleman P., Isakson P. C, 1997; Gilray D. W. et al., 1998; Aspirin-like..., 1998; Systemic..., 1999; Wolfe M. M. et al., 1999]. Таким образом, в основе общепризнанной концепции механизма действия НПВП лежит угнетение синтеза провоспалительных ПГ путём ингибиро-вания ЦОГ [Vane J. R., 1971; Vane J. R, 1995; Тюрин В. П., Раков А. Л., 2003]. За разработку этой концепции Сэр Джон Вэйн получил Нобелевскую премию по медицине в 1982 году [Кукес В. Г., Сычёв Д. А., 2002]. Однако позднее появились новые факты о роли ЦОГ-зависимого синтеза ПГ в норме и патологии и ЦОГ-независимых механизмах эффективности и токсичности НПВП. Точка зрения о том, что ЦОГ-1 является «физиологическим», а ЦОГ-2 - «патологическим» ферментами в настоящее время пересматривается [Насонов Е. Л., 2000 б, 2003]. Получены данные о физиологической роли ЦОГ-2-зависимого синтеза ПГ в заживлении язв, «адаптивной цитопротекции» клеток ЖКТ к токсическим веществам и стрессу, регуляции овуляции, функции почек, синтеза простациклина клетками эндотелия сосудов, репарации переломов костей скелета [Рациональная..., 2007]. Противовоспалительное действие может быть связано с торможением перекисного окисления липидов (ПОЛ), стабилизацией мембран лизосом (оба эти механизма предупреждают повреждение клеточных структур) и как следствие - торможение клеточной реакции на флогогенное раздражение, на комплекс «антиген - антитело» и замедление высвобождения протеаз (такое действие присуще, в частности, салицилатам, индометацину, бутадиону), уменьшением образования АТФ, торможением агрегации нейтрофилов, угне тением продукции ревматоидного фактора у больных ревматоидным артритом [Нестероидные..., 1994]. В плане определения механизма противовоспалительной активности НПВП следует отметить воздействие на активность медиаторов и модуляторов воспаления. Одним из основных элементов их действия является нормализующее влияние на повышенную проницаемость капилляров и на процессы микроциркуляции. Салицилаты, индометацин, ибупрофен, мефенамовая кислота и другие препараты этой группы уменьшают влияние на проницаемость сосудов брадикинина, гистамина и других биогенных веществ (так называемых «медиаторов воспаления»). Они тормозят также активность некоторых ферментов, участвующих в образовании «медиаторов воспаления». Салицилаты, производные пирозолона, индометацин и другие синтетические средства обладают выраженной антигиалуронидазной активностью. По всей вероятности, определённую роль в улучшении микроциркуляции играет фибринолитическая активность противовоспалительных веществ нестероидной структуры (индометацина, производных пиразолона и др.) [Цитогенети-ческое..., 1972; Машковский М. Д., 2008]. Не исключено, что в механизме действия НПВП играет роль иммунодепрессивный эффект [Mobarok А. Т. М. etal., 1984]. НПВП действуют также на биотранспорт ПГ и связывание их с белками плазмы крови. Таким образом, эти препараты могут влиять на высвобождение ПГ и взаимодействие их с тканевыми рецепторами [Фармакологическая..., 1987]. В развитии воспаления, наряду с альтерацией и экссудацией, важную роль играют пролиферативные процессы, ведущие к образованию грануля-ционно-фиброзной ткани, представляющей собой разновидность соединительной ткани [Фармакологическая..., 1987]. Наличие антипролиферативно-го эффекта НПВП связано с действием последних на основные структурные компоненты соединительной ткани - коллаген, мукополисахариды, фиброб
Изучение противовоспалительных свойств вытяжек болиголова пятнистого
В таблице 3 представлены параметры острой токсичности настоек травы, соцветий и плодов болиголова пятнистого, полученные на мышах при внутрижелудочном введении с использованием графического пробит-анализа [Беленький М. Л., 1963]. Изучаемые препараты по убыванию средней смертельной дозы можно расположить в следующей последовательности: настойка сухой травы настойка свежих соцветий настойка свежих плодов настойка сухих соцветий настойка сухих плодов (табл. 3). В экспериментальных исследованиях для изучения противовоспалительных средств наиболее широко применяется модель острого воспалитель ного отёка, вызванного каррагенином, которая позволяет объективно оценить противоэкссудативное действие препаратов и предсказать их клиническую эффективность [Фармакологическая..., 1987; Маянский Д. Н., 1989]. В связи с этим нами было изучено действие извлечений из болиголова на экссудатив-ную фазу воспалительной реакции, развивающуюся в результате индукции биосинтеза ПГ и последующей выработки других медиаторов воспаления [Чернух А. М., Кауфман О. Я., 1979]. Оценка влияния изучаемых фитопрепаратов на развитие воспалительной реакции у мышей показала, что в группе контрольных животных на пике каррагенинового воспаления (через 3,5 часа после введения флогогена) развившийся отёк составлял 36—50 % от исходного уровня, превышая таковой у мышей, получавших метамизол натрия, индометацин, нимесулид и исследуемые фитопрепараты (табл. 4, 5).
Максимальное угнетение экссудации наблюдалось в группах животных, получавших настойки из соцветий сухого сырья в дозе 1 мл/кг и свеже го-в дозе 2 мл/кг (снижение экссудации в 1,7 и 1,9 раза соответственно) (табл. 4). Вытяжки из сухой травы (1 мл/кг) и свежих плодов (2 мл/кг) достоверно уменьшали выраженность отёка в 1,5 раза. Менее активными оказались настойки из свежей травы в дозе 2 мл/кг, сухих соцветий в дозе 0,5 мл/кг и сухих плодов в дозе 1 мл/кг (угнетение отёка в 1,4 раза). Фракции, выделенные из травы и соцветий болиголова пятнистого, в дозе 25 мг/кг также оказывали выраженное противоотёчное действие (табл. 5). При этом введение животным этилацетатных (ЭАФС, ЭАФТ) и хлороформных (ХФФС, ХФФТ) фракций приводило к достоверному снижению экссудации в 1,7—1,8 раза. Водные (ВФС, ВФТ) и бутанольные (БФС, БФТ) фракции сокращали этот показатель в 1,5—1,8 раза. Метамизол натрия, индометацин и нимесу-лид угнетали отёк на пике воспаления в 1,5; 1,8 и 1,6 раза соответственно. Наряду с основными показателями воспаления, оценивали состояние внутренних органов и стресспротективную активность по балльной системе Ю. И. Добрякова (1978). Было выявлено, что антистрессорный эффект вытяжек из болиголова пятнистого (снижение глубины стресса на 2—8 баллов от носительно контроля) на данной модели воспаления реализовывался в основном за счёт предотвращения гипертрофии надпочечников и явной тенденции к снижению числа геморрагии на слизистой оболочке желудка. При назначении настоек из сухих (0,5; 1 мл/кг) и свежих соцветий (1; 2 мл/кг), свежих плодов (2 мл/кг) обнаружено увеличение массы селезёнки на 21—34 %, тимуса на 22—34 %, уменьшение массы надпочечников на 12—25 % по сравнению с контролем (табл. 6). Кроме того, сокращались или полностью отсутствовали язвенные дефекты на слизистой оболочке желудка.
Разница в выраженности стресса между опытом и контролем составила 5—8 баллов. Введение вытяжки из сухой травы болиголова (1 мл/кг) практически не оказывало влияния на лимфоидные органы, сохраняя их массу на уровне ин тактных животных (табл. 7). Однако, в отличие от контрольных показателей, масса надпочечников была меньше на 29 %, что обеспечивало антиетрессор-ный эффект (снижение глубины стресса на 4 балла). При назначении исследуемых нами фракций фенольных соединений из травы и соцветий болиголова пятнистого в дозе 25 мг/кг была также зафиксирована стресспротективная активность (табл. 8). Глубина стресса снижалась по сравнению с контролем на 6—8 баллов за счёт увеличения массы селезёнки на 24—34 %, тимуса на 22—41 %, снижения массы надпочечников на 14—23 % и сокращения или отсутствия геморрагии. В группе мышей, получавших индометацин, не происходило защитного влияния на внутренние органы, при этом глубина стресса у мышей была на 2 балла выше по сравнению с контролем в основном за счёт выраженного повреждающего действия на слизистую оболочку желудка (табл. 7). Нимесулид снижал глубину стресса на 2 балла по сравнению с контролем за счёт увели чения массы селезёнки на 16 % (табл. 6, 8). Однако данный препарат не устранял геморрагии, вызванные стрессом. Наблюдалась даже некоторая тенденция к их усилению. В результате проведённых экспериментов в контрольных группах происходило истощение животных. Назначение препаратов сравнения индоме-тацина и нимесулида также не приводило к увеличению массы у мышей. Аналогичный эффект наблюдался при введении вытяжки из свежей травы болиголова, в то время как в остальных группах животные набирали массу (табл. 6, 7, 8).
Исследование анальгетических свойств вытяжек болиголова пятнистого
Одним из основных компонентов воспалительной реакции является боль. Большинство флоголитиков сочетают антиэкссудативную активность с болеутоляющим эффектом [Фармакологическая..., 1987]. На различных моделях воспаления была выявлена флоголитическая активность вытяжек из болиголова пятнистого, поэтому интерес представляло исследование обезболивающего действия извлечений из изучаемого растения на моделях «уксусных корчей», «горячей пластины», а также определение индекса и частоты вокализаций при механическом раздражении воспаленной конечности. «Корчи», индуцированные внутрибрюшинным введением 0,75 % уксусной кислоты, регистрировали в течение 15 минут после инъекции агента. Извлечения из болиголова пятнистого и препарат сравнения (метамизол натрия) вводили профилактическим курсом в течение 5 дней и за 1 час до введения уксусной кислоты. Исходя из полученных данных, следует, что все фитопрепараты болиголова обладают выраженным обезболивающим действием, которое проявляется в уменьшении количества «уксусных корчей», а также удлинении времени спокойного пребывания животных до появления характерных движений (латентное время) по сравнению с группой животных, получавших растворитель.
Так, при введении настойки из сухой травы болиголова в дозах 2; 4 и 8 мл/кг наблюдалось уменьшение количества «корчей» на 59—67 % по сравнению с контролем (табл. 25). Латентное время болевой реакции у животных этих групп увеличивалось в 2,2—2,7 раза. Назначение вытяжки из свежей травы (0,25; 0,5; 1; 2; 4 и 8 мл/кг) приводило к сокращению числа «корчей» на 52—98 %, а время болевой реакции (2; 4; 8 мл/кг) увеличивалось в 3,5—5,3 раза. Кроме того, наблюдалось снижение объёма асцитной жидкости в 3,9—23,5 раза. Количество «корчей» уменьшалось при введении извлечений из сухих соцветий (0,5; 1; 2 мл/кг) на 51—71 %, латентное время болевой реакции (1;2 мл/кг) увеличивалось в 2,4—2,5 раза, объём асцитной жидкости (0,5 мл/кг) снижался в 1,4 раза (табл. 26). У животных, получавших вытяжку из свежих соцветий (1; 2; 4 мл/кг), было зафиксировано сокращение показателя «уксусных корчей» на 65—-72 %, а время наступления их увеличивалось в 2,1—2,4 раза. При назначении вытяжки из свежих плодов (1; 2; 4 мл/кг) наблюдалось уменьшение количества «корчей» на 62—71 %, время наступления характерных движений увеличивалось в 2,9 раза. Оценка обезболивающей активности фракций, выделенных из соцветий и травы болиголова, показала выраженный анальгетический эффект: количество «корчей» уменьшалось на 22—40 % по сравнению с контролем (табл. 28). Наиболее активными оказались этилацетатные фракции, при введении которых снижался аналогичный показатель на 38—40 % соответственно по сравнению с контролем. Латентный период болевой реакции при назначении исследуемых фракций увеличивался в 1,6—2,9 раза. Введение метамизола натрия приводило к уменьшению количества «корчей» на 61—63 %, а также увеличивало время их появления в 2,3—3,5 раза (табл. 25, 26, 27). Наряду с анальгетической активностью настоек и фракций фенольных соединений болиголова пятнистого корригировали изменения во внутренних органах, происходящие на фоне болевой реакции (табл. 29, 30, 31, 32, 33). Обнаружено, что стресс, вызванный «уксусной кислотой», приводил к появлению геморрагических деструкции на слизистой желудка и гипертрофии надпочечников. Стресспротекторное действие фитопрепаратов (снижение глубины стресса на 2—10 баллов относительно контроля) на данной модели реализовывалось за счёт их выраженного гастрозащитного действия на слизистую оболочку желудка мышей.
Так, у животных, получавших настойку из сухой травы в дозах 0,5; 2; 4 и 8 мл/кг, наблюдалась тенденция к снижению среднего числа геморрагии в 1,5—4,4 раза, отмечалось уменьшение массы надпочечников в 1,5—1,7 раза по сравнению с контрольными животными (табл. 29). Назначение вытяжки из свежей травы болиголова (1; 2 мл/кг) также приводило к антистрессорному эффекту, который реализовывался за счёт Введение животным извлечений из сухих (0,5; 1; 2 мл/кг) и свежих соцветий (1; 2; 4 мл/кг) сохраняло массу внутренних органов на уровне фоновых показателей (табл. 31). Наблюдалось снижение степени деструкции желудка, что приводило к выраженному стресспротективному действию. Под влиянием настоек из сухих (0,5; 1; 2 мл/кг) и свежих (1; 2; 4 мл/кг) плодов наблюдалось увеличение массы тимуса в 1,5—2,0 раза, отмечалось уменьшение массы надпочечников в 1,3—1,7 раза относительно контроля (табл. 32). Было обнаружено гастрозащитное действие данных фитопрепаратов в виде отчётливой тенденции. В таблице 33 показано влияние фракций, выделенных из соцветий и травы болиголова, на показатели внутренних органов. Выявлено, что все исследуемые фракции оказывали чёткий стресспротективный эффект (снижение глубины стресса на 7—10 баллов относительно контроля), сохраняя массу органов на фоне интактных животных, в отличие от нелеченых животных. Следует отметить положительное влияние этих препаратов на слизистую оболочку желудка. При назначении метамизола натрия антистрессорный эффект не выявлен (табл. 29, 30, 31, 32). Дальнейшее изучение анальгетической активности извлечений из болиголова пятнистого проводилось в условиях острой воспалительной реакции, вызванной субплантарным введением мышам каррагенина. Болевую реакцию на модели «горячей пластины» [Гипоальгетический..., 1990] вызывали, помещая мышей на горячую (64С) пластину, и анальгетический эффект оцени вали по длительности спокойного пребывания на ней животных (до начала облизывания лап). У животных регистрировали латентный период болевой реакции на здоровых (передних и задней) и воспалённой задней (в результате введения флогогена) лапах. Предварительное курсовое введение настоек и фракций фенольных соединений болиголова пятнистого мышам после субплантарной инъекции каррагенина приводило к удлинению среднего времени пребывания животных на «горячей пластине». Так, при назначении вытяжек из свежих соцветий (1; 2 мл/кг) наблюдалось увеличение латентного периода болевой реакции для здоровых передних конечностей в 1,4—1,6 раз по сравнению с контролем (табл. 34).
