Нейрофизиологические механизмыфармакологических эффектовпотенцированных («гомеопатизированных») антителк мозгоспецифическому белку S-100 Эпштейн, Олег Ильич

Введение к работе

2. Актуальность темы

Принципы гомеопатической терапии сформулированы в 1796г. немецким исследователем С. Ганеманом. Им предложена технология приготовления потенцированных средств и методология их применения, базирующаяся преимущественно на двух постулатах: принципе подобия и максимальной индивидуализации лечения. Несмотря на несомненную терапевтическую эффективность и наличие рациональных клинико-феноменологических принципов лечения, сближающих гомеопатию с «канонической» клинической фармакологией, несмотря на широчайшее распространение ее влияния на все без исключения нозологические формы, это направление как бы отторгнуто от современных

представлений о тонких механизмах действия лекарственных средств. Количество фундаментальных работ молекулярно-клеточного и системного уровня, посвященных изучению механизмов эффектов потенцированных средств, крайне мало; современный анализ механизма действия гомеопатических препаратов отсутствует.

Для заполнения этого ощутимого пробела знаний о гомеопатии
проведено настоящее исследование, посвященное

нейрофармакологическому анализу антител к мозгоспецифическому антигену S-100 и разработке на основе полученных результатов нового лекарственного средства для клинической наркологии.

3. Обоснование выбора фармакологического препарата

Выбор моноспецифической антисыворотки (AS-100) к мозгоспецифическому белку S-100 (S-100) в качестве предмета исследований и потенциального лекарственного средства обусловлен рядом предпосылок.

3.1. Белок S-100 выделен специалистами Института цитологии и
генетики СО РАМН, Института молекулярной биологии и биофизики СО
РАМН по стандартной технологии из ткани головного мозга быка.
Молекулярная масса очищенного белка составил 21000Д, его
электрофоретические характеристики, аминокислотный и субъединичный
состав оказались практически идентичными описанным в литературе
данным Мура (Мооге, 1971), Дэннизлса и Левина (Danniels, Levine, 1971).
Моноспецифическая антисыворотка к белку S-100 получена путем
иммунизации кроликов S-100 в комплексе с метилированным бычьим
сыво-роточным альбумином в качестве носителя. Полученная
антисыворотка имела титр 1:500-1:1000, её специфичность была
подтверждена микрометодом иммунодиффузии по Ухтерлони, а
моноспецифичность - методом перекрестного иммуноэлектрофореза по
Лореллу (Laurell,1965).

3.2. В отличие от нейропептидов, группа мозгоспецифических белков
в терапевтических целях практически не используется, хотя
нейробиологические особенности МСБ и антител к ним достаточно
известны. Наиболее изученным к сегодняшнему дню является как раз

антиген S-100, не имеющий видовой специфичности, присутствующий у животных различных таксономических групп, принимающий участие в реализации фундаментальных, базовых функций нейронных систем, таких как генерация и проведение нервного импульса, синаптическая передача (Старостина, Свиридов, 1977; Штарк 1985; Полетаев, Шерстнев, 1987; Березин, Велик, 1990), а на системном уровне S-100 и антитела к нему модифицируют интегративную деятельность ЦНС (Рылов, Шерстнев, 1984; Сайдахметова и др. 1986).

3.3. Базовый характер функций, определенный для S-100
исследованиями последних 20 лет (Старостина, Свиридов., 1977; Штарк,
1978, 1985; Березин, Велик., 1990 и др.) позволяет отнести его к классу
протеинов, непосредственно включенных в локальную синаптическую
деятельность нейронной сети гиппокампа, роль которого и в
формировании алкогольной аддикции, и в гєнезе абстинентного
синдрома хорошо известна.

Имеются сведения об участии S-100 в патогенезе алкоголизма: повышение уровня S-100 коррелирует со злокачественным течением алкогольной энцефалопатии (Moor, 1967). Практически у 100% больных алкоголизмом обнаружена гиперчувствительность немедленного и замедленного типа к S-100. (Jankovic et а!, 1982; Jankovic, 1985). Постоянное же присутствие антител к антигену S-100 в крови и спинномозговой жидкости рассматривается в качестве диагностического благоприятного критерия при алкогольной аддикции (Морозов, 1986; Анохина, 1987; Волошин и др., 1992), в особенности при нарастании титра антител и дальнейшем быстром его снижении при абстинентном синдроме (Jankovic et al, 1982,1985).

3.4. Принципиальным для выбора антител к S-100 в качестве
потенциального лекарственного средства является принадлежность
этого мозгоспецифического белка (антигена) к классу Са-связывающих и,
в свою очередь, участие Са²⁺ в патогенезе основных центральных
патологических феноменов. Известно, что все эффекты Са²⁺
реализуются через Са-связывающие белки. Поэтому «идеальным
лекарственным средством при многих патологиях», в том числе
церебральных, были бы ингибиторы Са-связывающих белков (Костюк,

Чазов, 1988). Избирательными ингибиторами в этом случае являются антитела к Са-связывающим протеинам.

Кроме того, применительно к аддиктивным состояниям показано, что хроническая алкоголизация активирует потенциал-чувствительные кальциевые каналы нейронов (на модели клеточной культуры), а дигидроперидин, блокирующий их, уменьшает выраженность проявлений острой отмены этанола у животных (Dolin et al., 1986; 1987).

3.5. В последние 15 лет накоплены данные, свидетельствующие, что в здоровом организме присутствуют б очень малых концентрациях разнообразные антитела к различным эндогенным регуляторам, изменяющие их активность. Антитела чаще подавляют функции регулятора, но в ряде случаев (гормон роста, инсулин, ангиотензин II) стабилизируют их. Показана ферментативная активность антител (Paul S., et al., 1985; Paul S. Et al., 1989) и даже наличие у антиидиотипических антител к холинэстеразе ацетилхолинэстеразной активности; сформулирована гипотеза об антителах как регуляторах физиологических функций (Ашмарин И.П., Фрейдлин И.С, 1989). Все это дает основание предполагать у антител к S-100 даже в гомеопатических дозах наличие регуляторных свойств. С учетом имеющихся данных и результатов собственных исследований потенцированных средств на моделях острой и хронической интоксикации психоактивными препаратами (Эпштейн, Воробьева, Берченко и др., 1997), представлялось перспективным изучить нейрофармакологические особенности потенцированных форм S-100 (далее nS-ЮО) и антител (далее nAS-ЮО) к нему для последующего их освоения в качестве лекарственных средств в клинической наркологии.

4. Цель исследования

Изучение нейрофизиологических механизмов фармакологических эффектов потенцированной антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 как на экспериментальных моделях, позволяющих исследовать ее эффекты на различных уровнях организации деятельности центральной нервной системы, так и в клинических условиях (рис.1).

Рисунок 1

Блок-схема изучения эффектов потеицнропанпой формы AS-100 па

разлпчпых структурных уровнях организации пейроппых систем

AS-100

Системный уровень

Структурный уровень

Межклеточны й уровень

Клеточный уровень

гипнокампа

\ ДПТП в срезах

Электрические характеристики
\ иеирональных мембран

Клиническая / апробация

5. Задачи исследования:

5.1. Приготовить потенцированные формы (гомеопатические растворы) антигена S-100 и антител к нему (далее nS-ЮО и nAS-ЮО) из исходных продуїстов, полученных в Институте цитологии и генетики СО РАМН и Институте молекулярной биологии и биофизики СО РАМН.

1. Исследовать влияние nS-100 и nAS-100 на условно-рефлекторные эмоциональные реакции активного избегания (УРАИ).

2. Оценить влияние nS-ЮО и nAS-ЮО на эмоциональное поведение животных путем анализа реакций самостимуляции латерального гипоталамуса (РСС).

3. Проанализировать характер влияния потенцированных форм AS-100 на нейрональную активность эмоциогенных лимбичесшх структур интактных животных и животных с морфинной и алкогольной зависимостью.*

5.5. Осуществить микроэлектродный анализ влияния nAS-ЮО на
пассивные и активные характеристики изолированных нейронов in vitro.

5.6. Исследовать эффекты nAS-ЮО на модели длительной
посттетанической потенциации (ДПТП) в' переживающих срезах
гиппокампа.

7. Изучить неспецифические иммунные реакции к nS-ЮО и nAS-100 на модели экспериментального алкоголизма.

8. Провести клиническую апробацию nAS-100.**

6. Связь работы с научными программами, планами, темами

Диссертация выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ Украинского НИИ экспериментальной и клинической неврологии и психиатрии ("Изучение нейробиологических закономерностей новых нетрадиционных (гомеопатических) веществ и безмедикаментозных способов (алпотранслантация и дистантная ксеноимплантация мозгоспецифических тканей) купирования наркоманической зависимости в эксперименте и клинике") и Института молекулярной биологии и биофизики СО РАМН ("Изучение клеточных и молекулярных механизмов гомеопатической и бипатической фармакокинетики").

'Активность нейронов перифорникальной области гипоталамуса исследовалась в НИИ

нормальной физиологии им. П.К.Анохина РАМН.

**С разрешения Фармакологического комитета МЗ РФ клинические испытания nAS-100

(препарата «Пропротен-100») проводились в клиниках НИИ психиатрии МЗ РФ, РГМУ,

РМАПО.

7. Научная новизна

7.1. Впервые, используя в качестве тест-систем простые нервные структуры - изолированные нейроны и переживающие срезы гиппокампа, на примере nAS-ЮО описана феноменология мембранных и синаптических эффектов потенцированных форм.

7.2. Впервые установлено, что:

потенцированная форма S-100 оказывает стимулирующее влияние на условно-рефлекторную деятельность; потенцированная форма AS-100 тормозит или подавляет её различные звенья

потенцированная форма S-100 оказывает активирующее влияние на мозговую систему позитивного эмоционального подкрепления, nAS-100 снижает её активность.

7.3. Впервые показано, что:

- потенцированные формы S-100 и AS-100 изменяют активность
нейронов гиппокампа и гипоталамуса, вызывая вначале их активацию, а
затем торможение;

- потенцированные формы AS-100 тормозят механизмы, формирующие
патологическое влечение к этанолу, морфину и абстинентный синдром
при отмене психоактивного вещества, что сопровождается тормозной
направленностью поведенческих реакций, изменением характера
пачечной активности нейронов гиппокампа, и гипоталамуса, а также
подтверждено результатами клинических исследований.

7.4. Впервые достоверно показано, что исходное вещество и
приготовленная из него по гомеопатической технологии потенцированная
форма оказывают качественно идентичный, но в различной степени
выраженный эффект, проявляющийся в однонаправленном воздействии
нативнои и потенцированной AS-100 на нейрональную мембрану.

7.5. Впервые на переживающих срезах гиппокампа показано, что
потенцированная форма AS-100 сама по себе не оказывает влияние на
синаптическую эффективность в модели ДПТП (длительной
посттетанической потенциации), однако, двадцатиминутная
преинкубация срезов в потенцированной AS-100 приводит к отмене
блокирующего влияния нативнои антисыворотки на формирование

ДПТП. Это позволило сделать заключение о том, что потенцированная форма AS-100 обладает свойством долговременно изменять чувствительность нейрональной мембраны к обычным дозам AS-100. Есть основания считать, что этим свойством обладают все потенцированные средства.

7.6. Впервые в клинических условиях показано, что потенцированная AS-100 является эффективным средством для купирования психопатологических и вегетосоматических проявлений алкогольного абстинентного синдрома.

8. Практическая значимость полученных результатов

8.1. Предложена система отбора потенцированных лекарственных
средств для наркологии из исходных (нативных) биологически активных
веществ с учетом иерархической организации нейронных систем.

8.2. На основе результатов экспериментов создан препарат
"Пропротен-100", прошедший стадию клинических испытаний и
предложенный в фармакологический комитет Минздрава РФ в качестве
эффективного средстза для монотерапии алкогольного абстинентного
синдрома.

9.Положения, выносимые на защиту

1. Потенцированные формы S-100 и AS-100 обладают нейроспецифической активностью, проявляющейся в непременных ответах мозга на введение nS-ЮО и nAS-ЮО на всех уровнях нейронной организации: системном, структурном, межклеточном, клеточном.

2. Биологическая актизность потенцированных препаратов обусловлена присущими им специфическими молекулярно-клеточными эффектами.

3. Наиболее фундаментальное свойство потенцированных препартов - сенситизирующеє влияние на клеточную мембрану - лежит в основе выявленных феноменов потенцированных средств:

изменении физиологической активности исходного вещества при его сочетанном воздействии с потенцированной формой («бипатический» феномен)

способности nAS-100 изменять толерантность организма к

воздействию психоактивных веществ.

9.4. Как в экспериментальных условиях, так и в клинических исследованиях nAS-100 уменьшает выраженность патологического влечения к алкоголю и морфину; купирует синдром лишения при алкогольной и морфинной зависимости.

10. Личный вклад соискателя

Диссертантом самостоятельно предложена и реализована программа исследований, проведен анализ данных литературы и результатов собственных исследований. Инструментальные исследования, обработка данных и их интерпретация, внедрение в практику выполнены самостоятельно, а эксперименты in vitro проведены совместно с руководителем соискателя.

Клинические испытания проведены в соответствии с действующим законодательством и разрешения Фармакологического комитета Минздрава РФ.

11. Апробация результатов диссертации

Результаты исследования были представлены на V и VI Росийском национальном Конгресове "Человек и лекарство" (Москва, 1998 и 1999гг.), Первом национальном конгрессе неврологов, психиатров и наркологов Украины (Харьков, 1997г.), V Международней конференции "Актуальные вопросы клинической фармакологии" (Москва, 1998г.), Международной конференции "Нерешенные вопросы гомеопатии и метода Фолля" (Москва, 1997г.), рабочем совещании Минздрава РФ "Место гомеопатии в системе здравоохранения" (С-Петербург, 1998г.), научно-практической конференции Минздрава РФ 'Традиционные методы лечения" (Москва, 1998г.), Ученом совете НИИ психиатрии МЗ РФ (Москва, 1999г.), Московской городской конференции наркологов (1998г.), Ученом совете Института молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск, 1999г.), межлабораторном семинаре Украинского НИИ неврологии и психиатрии и Института молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Харьков, 1999г).

12. Объем и структура работы