Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Патофизиологические аспекты алкогольной интоксикации у подростков 10 стр.
1.1 Медико-социальные аспекты злоупотребления подростками алкоголя
1.2 Подростковый пивной алкоголизм 19 стр.
1.3 Патогенез алкоголизма 22 стр.
ГЛАВА 2 Материалы и методы исследования 31 стр.
ГЛАВА 3 Функционально-метаболические нарушения при злоупотреблении алкоголем .41 стр.
3.1 Интенсивность свободно-радикального окисления при острой алкогольной интоксикации .41 стр.
3.2 Интенсивность свободно-радикального окисления при злоупотреблении алкоголем 44 стр.
3.3 Гендерные различия интенсивности свободно-радикального окисления при злоупотреблении алкоголем 47 стр.
3.4 Система антиокислительной защиты организма при острой алкогольной интоксикации 52 стр.
3.5 Активность системы антиокислительной защиты при злоупотреблении алкоголем 55 стр.
3.6 Гендерные различия показателей антиокислительной системы при злоупотреблении алкоголем 60 стр.
3.7 Влияние алкоголя на факторы неспецифической резистентности 65 стр.
3.8 Факторы неспецифической резистентности у подростков, злоупотреблявших алкоголем .69 стр.
3.9 Гендерные различия факторов неспецифической резистентности у подростков, злоупотреблявших алкоголем .76 стр.
ГЛАВА 4 Обсуждение результатов 88 стр.
Выводы .103 стр.
Список сокращений .104 стр.
Список литературы .
- Подростковый пивной алкоголизм
- Патогенез алкоголизма
- Интенсивность свободно-радикального окисления при злоупотреблении алкоголем
- Гендерные различия факторов неспецифической резистентности у подростков, злоупотреблявших алкоголем
Введение к работе
Актуальность темы. Данные эпидемиологических исследований свидетельствуют о том, что около 63% детей в возрасте до 14 лет знакомы с действием алкогольных напитков (С. А. Азарова и соавт., 2013). За период с 2002 г. по 2011 г. отмечено увеличение числа злоупотребляющих слабоалкогольными напитками и омоложение контингента пациентов с алкогольной зависимостью, в том числе перенесших алкогольные психозы (С.С. Титов и соавт., 2012). Хорошо известно, что расширение продажи слабоалкогольных напитков способствует более широкому привлечению молодого населения, подростков к злоупотреблению алкоголем.
Токсические эффекты этанола проявляются у взрослых лиц только в случае его поступления в организм в высоких дозах (Е.А. Кошкина, 2009). Несмотря на то, что молодёжь употребляет в основном слабоалкогольные напитки, однако более 72% юношей и 68% девушек потребляют их систематически – 2-3 раза в неделю и более (C. A. Marczinski, 2011).
По данным анонимного анкетирования, среди несовершеннолетних общеобразовательных школ и учреждений среднего профессионального образования Омской области в возрасте от 9 до 18 лет в 2010 г. хотя бы 1 раз в жизни перенесли острую алкогольную интоксикацию 48,6% несовершеннолетних. Алкогольные напитки употребляли 40,0% респондентов, алкогольные коктейли – 26,1%. Начало употребления алкогольных напитков респондентами происходит в возрасте до 14 лет в 9,8% случаев (О.А. Чащина и соавт., 2012). В связи с информацией о росте потребления алкоголя среди молодежи (Ю.В. Михайлова, 2014; J.E. Kivisto et al., 2008; L.D. Johnston, 2009) особенно актуальной является проблема патогенеза алкогольной интоксикации и алкогольной зависимости.
Степень разработанности темы исследования. Метаболические эффекты, как самого этанола, так и продуктов его катаболизма, связаны с
трансформацией окислительно-восстановительного статуса клеток. Одним из патогенетических факторов алкогольной интоксикации является алкоголь-индуцированная гиперпродукция активных форм кислорода (АФК) (О.Ю. Жукова, В. Е. Высокогорский, 2005; Е. С. Ефременко, В. Е. Высокогорский, 2008; В.Е. Высокогорский и соавт.,2011,2012,2013). В то же время, недостаточная инактивация продуктов свободно-радикальной природы, осуществляемая антиокислительной системой, определяет возможность формирования окислительного стресса (И.М. Курч., 2012; В.Е. Высокогорский и соавт., 2012, 2013).
Однако практически отсутствуют данные о состоянии свободно-радикальных процессов у подростков, о показателях системы антиоксидантной защиты, не раскрыты механизмы и особенности развития у них окислительного стресса при острой алкогольной интоксикации и злоупотреблении алкоголем. Исследование показателей, отражающих оксидативный статус организма подростков, в различные сроки после злоупотребления алкоголем необходимо для уточнения роли свободно-радикальных процессов в развитии данного патологического процесса, для выявления особенностей динамики лабораторных показателей. Представляет клинический интерес определение в процессе так называемого «респираторного взрыва» важнейших факторов неспецифической резистентности организма подростков при алкогольной интоксикации.
Цель исследования - выявить патогенетическую значимость процессов свободно-радикального окисления в развитии алкогольной интоксикации у подростков.
Задачи исследования:
-
Изучить интенсивность хемилюминесценции эритроцитов крови при острой алкогольной интоксикации у подростков.
-
Оценить интенсивность антиокислительной защиты при острой алкогольной интоксикации у подростков.
-
Исследовать факторы неспецифической резистентности у подростков при острой алкогольной интоксикации.
-
Изучить показатели свободно-радикальных процессов и факторов неспецифической резистентности в различные сроки после злоупотребления алкоголем.
Научная новизна
Установлено, что важным патогенетическим фактором нарушения реактивности организма подростков при развитии алкогольной интоксикации является активация процессов свободно-радикального окисления. Получены новые данные о нарушении антиокислительной защиты, проявляющиеся в изменении активности антиоксидантных ферментов и уровня глутатиона в эритроцитах при алкогольной интоксикации подростков. Установлено, что интенсивность хемилюминесценции гемолизатов эритроцитов при алкогольной интоксикации подростков зависит от скорости выведения с мочой не подвергнувшегося биотрансформации этанола.
У подростков установлены гендерные отличия интенсивности процессов свободно-радикального окисления, активности ферментов антиоксидантной системы и содержания глутатиона. У подростков мужского пола повышен исходный уровень свободных радикалов, выше потенциальная способность компонентов антиоксидантной системы, которая заключается в существенном повышении активности СОД и уровня глутатиона эритроцитов.
Получены данные о факторах неспецифической резистентности организма у подростков при алкогольной интоксикации. Алкогольная интоксикация вызывает повышение кислородзависимой активности нейтрофилов, увеличение количества активных фагоцитов, но при одновременном снижении их поглотительной способности и уменьшении сохранности к завершенному фагоцитозу.
Теоретическое и практическое значение работы. Полученные новые научные факты дополняют представления о патогенезе метаболических
нарушений, вызывающих изменение реактивности организма при алкогольной интоксикации, патогенетической значимости активации процессов свободно-радикального окисления, увеличение светосуммы хемилюминесценции, спонтанной, максимальной светимости и вспышки. Нарушения системы антиоксидантной защиты, проявляющиеся изменениями активности каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы.
У подростков после употребления алкоголя выявлено увеличение кислородзависимой активности фагоцитирующих клеток. На протяжении всего периода наблюдения отмечено снижение поглощения патогенного агента. У юношей быстрее активизируются кислородзависимые механизмы фагоцитоза, чем у девушек, но при этом быстрее расходуются резервные возможности кислородзависимых потенциалов.
Выявленные особенности оксидантных и антиоксидантных систем, а также реакции иммунной системы при злоупотреблении алкоголем подростками необходимо учитывать при клинической лабораторной оценке состояния больного, определении эффективности и сроков лечения, при этом следует оценивать гендерные особенности метаболических нарушений.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах патофизиологии с курсом клинической патофизиологии, химии Омского государственного медицинского университета, на кафедре биологии и биологического образования факультета естественнонаучного образования Омского государственного педагогического университета.
Методология и методы исследования. Первый этап диссертационного исследования проводился на базе БУЗОО ОДКБ токсикологического отделения согласно дизайну «случай-контроль» подростки с диагнозом «Острое отравление алкоголем» (Т51.0 по МКБ-10). На втором этапе исследования продолжено изучение метаболических нарушений у подростков при алкогольной интоксикации на базе БУЗОО «Наркологический диспансер» с
диагнозом “Злоупотребление алкоголем” (F10.1, по МКБ-10). Исследование носит характер открытого, контролируемого, когортного, проспективного. Выборку пациентов проводили в соответствии с критериями включения и исключения. Интенсивность свободно-радикального окисления определяли биофизическими методами, биохимические методы служили для оценки активности антиокислительной системы, с помощью иммунологических методов оценивали неспецифическую резистентность организма. Статистическая обработка материалов осуществлялась с использованием программных пакетов анализа Statisticа 6.0 с использованием методов описательной и вариационной статистики. Применялись значения статистики U-критерий Манна-Уитни для сравнения количественных показателей двух независимых групп, для оценки корреляционной зависимости использовался метод ранговой корреляции Спирмена. Биохимические, биофизические, иммунологические исследования, статистическая обработка данных, их анализ, интерпретация, а также написание и оформление диссертации выполнены автором лично.
Положения, выносимые на защиту:
-
Активация процессов свободно-радикального окисления – важный патогенетический фактор снижения резистентности организма и формирования окислительного стресса, проявляющегося метаболическими нарушениями.
-
Нарушения окислительных процессов при развитии алкогольной интоксикации у подростков имеют характерные гендерные отличия.
-
Активация свободно-радикальных процессов в условиях алкогольной интоксикации у подростков приводит к повышенной фагоцитирующей активности нейтрофилов и увеличению кислородзависимой активности нейтрофильных гранулоцитов.
Степень достоверности и апробация результатов исследования.
Первичная документация проверена комиссией в соответствии с приказом
ректора ГБОУ ВПО ОмГМУ Минздрава России № 224-у от 9 ноября 2015 года, которая сделала заключение, что все представляемые к защите данные и результаты являются подлинными и достоверными, получены лично автором.
Основные положения работы изложены и представлены на XVIII форуме
«Национальные дни лабораторной медицины России–2014» (Москва, 2014), на
VI ежегодной Международной научной Интернет-конференции «Медицина в
XXI веке: тенденции и перспективы» (Казань, 2015), научно-практической
конференции «Свободно-радикальные процессы в норме и патологии» (Омск,
2013), межрегиональной научно-практической конференции
«Патофизиологические и клинические аспекты критических состояний» (Омск, 2015), «Российском конгрессе лабораторной медицины» (Москва, 2015), российской научно-практической конференции «Медицинская биохимия: достижения и перспективы» (Казань, 2015).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 7 – в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов диссертационных исследований.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы, содержащей результаты собственных исследований, обсуждения и выводов. Библиографический указатель включает 166 источников: 98 – русскоязычных и 68 – иностранных. Работа содержит 62 таблицы, 3 рисунка.
Подростковый пивной алкоголизм
Одной из причин такого увеличения алкоголизма среди детей и подростков может быть либерализация в сфере образования и воспитания, дети проводят все больше времени вне дома без родительского надзора. Достигается равенство между полами, девочки начали пить столько же, сколько и мальчики. Число случаев алкогольного опьянения увеличилось среди девочек с 6,3% всех случаев опьянения среди девочек в 1997/1998 до 45,5% в 2006/07. Среди мальчиков это увеличение составляет 23,1% всех случаев опьянения в 1997/1998 до 78,6% в 2006/2007. Увеличение числа госпитализаций из-за алкогольного опьянения среди девочек в юном возрасте представляет серьезную проблему [100].
Употребление спиртного в подростковом возрасте приводит к развитию патологии независимо от количества принятого алкоголя, причиняя вред здоровью. Вред здоровью может быть физическим (как, например, тяжелые травмы, полученные в состоянии алкогольного опьянения) или психическим (как, например, злоупотребление психоактивным веществом). Термином “злоупотребление” часто именуется любое использование подростками психоактивных веществ, поскольку с легальной точки зрения какое бы то ни было их применение запрещено. Прием доз, даже небольших для взрослого человека, для подростка является чрезмерным и приводит к алкогольному отравлению [163, 164]. Если у взрослых вначале бывает этап умеренного потребления алкоголя, а затем наступает злоупотребление (бытовое пьянство), то несовершеннолетние уже с самых первых этапов начинают злоупотреблять спиртным; у многих из них регулярно бывает тяжелая алкогольная интоксикация с рвотой и потерей сознания. Характерным для отравления алкоголем у детей и подростков является быстрое развитие симптомов интоксикации [3, 44]. Алкоголизм в молодом возрасте имеет тенденцию к злокачественному течения [3, 79]. Стремясь избежать насмешек других членов группы, подростки начинают "тренировать" себя спиртным. При появлении тошноты и позыва к рвоте они убегают подальше, чтобы их не увидели, и после прекращения рвоты снова присоединяются к сверстникам и продолжают пить с ними. Иногда ребята заранее уходят и вызывают рвоту искусственно, чтобы иметь возможность пить дальше [100].
Тяжелые степени опьянения часто сопровождаются нарушением сознания [163]. Эти состояния требуют медицинской помощи, и нередко такие подростки попадают в токсикологические отделения больниц с алкогольным отравлением. Без оказания медицинской помощи может наступить смертельный исход [3, 163, 164].
После передозировки с тяжелыми формами нарушения сознания возникает амнезия - подросток не может вспомнить произошедшего или помнит лишь самое начало выпивки. Пьющих подростков не пугают случаи передозировок с последующей амнезией, и это, как правило, не удерживает их от дальнейшего приема спиртного. На этом этапе влечения к алкоголю еще нет [K.Bitunjac, 2009]. Они регулярно напиваются «до рвоты» и тяжелого опьянения не из-за того, что сознательно хотят достичь именно этого эффекта, а из стремления не отставать от других членов группы, среди которых всегда есть более «опытные» и более выносливые [100].
Подростков, как правило, не страшит тяжелое опьянение и его последствия, и не этого эффекта они ждут от алкоголя, подростки вполне могли бы остановиться на той степени опьянения, которая вызывает у них веселье и активность [K.Bitunjac, 2009]. Часто количество выпитого алкоголя зависит не от собственной воли подростков, а от требований других членов группы. В результате регулярного потребления спиртного, утраты рвотного рефлекса и возрастания переносимости алкоголя начинает формироваться влечение к нему. У подростков формирование симптомов алкоголизма происходит очень быстро, и отрезки времени между появлением все новых симптомов непродолжительны. Многие симптомы возникают гораздо раньше, чем при типичном алкоголизме взрослых [52, 100].
Влечение к алкоголю проявляется в том, что подростку начинает нравиться состояние опьянения как состояние веселья, интересных «приключений». Они редко сидят и напиваются, как взрослые алкоголики. Выпив, ребята становятся активными, их «тянет на подвиги», и именно это им особенно нравится [99]. В состоянии опьянения подростки не всегда способны контролировать свое поведение, что может приводить к дракам, беспорядочным половым связям, кражам, грабежам, изнасилованиям и другим криминальным действиям [99, 100]. В целом, проявления алкоголизма у подростков отличаются от алкоголизма взрослых ускоренным развитием и атипичностью многих проявлений.
Чем раньше начинается потребление алкоголя, тем тяжелее протекает заболевание. Алкоголизм у несовершеннолетних формируется в 2-4 раза быстрее, чем у взрослых [157]. Гораздо быстрее, чем у взрослых, наступает и прогрессирует психическая деградация. Пьющие подростки «тупеют», их интеллектуальное развитие значительно отстает от возрастных норм, они не способны концентрировать внимание и усваивать новый материал, быстро прогрессируют нарушения памяти [32]. Подростки становятся апатичными, ко всему безразличными, кроме выпивки, как взрослые алкоголики на третьей стадии. Они отстают от сверстников в общем, физическом развитии и росте, худеют, страдает нервно-психическое развитие со снижением интеллектуально-мнестических функций, а также функциональными изменениями сердечнососудистой системы [Е.И.Каширская, 2014]. Нестабильность биохимических показателей, особенно гормональной составляющей, вызваны функциональными нагрузками на органы и системы при злоупотреблении психоактивными веществами [32, 134, 157].
Патогенез алкоголизма
Основной переменной интереса является уровень основных показателей свободно радикального окисления, учитывая ожидаемый результат – увеличение уровня показателей свободно радикального окисления у группы больных с острой алкогольной интоксикацией (р1 = 50%) и отсутствие изменения показателей у части исследуемых (р2 = 0%). Используя значения переменных, проводим расчет размера выборки: N = [50 (100 – 50) + 0 (100 – 0)] 7,9 = 19750 = 7,9 8 чел. (0 – 50)2 2500 С использованием этих критериев были сформированы группы больных. Гепаринизированную кровь использовали для определения таких показателей, как активность миелопероксидазы, тест с нитросиним тетразолием, лизосомальные катионные белки, фагоцитарная активность нейтрофилов. Материалом для определения восстановленного глутатиона, компонентов системы глутатиона, активности ферментов антиокислительной системы, показателей свободно радикального окисления служил осмотический гемолизат. Эритроциты гемолизировали добавлением 0,2 мл отмытых от плазмы и упакованных эритроцитов к 1,8 мл дистиллированной воды.
Окислительно-восстановительный потенциал нейтрофилов определяли с помощью теста спонтанного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) по методике Stuart с соавт. (1975) в модификации Б.С. Нагоева [57]. Метод определения общей окислительно-восстановительной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) основан на восстановлении поглощенного фагоцитом растворимого красителя нитросинего тетразолия в нерастворимый диформазан. НСТ-тест интегрально характеризует кислородзависимые антибактериальные системы фагоцита. В одну из лунок иммунологического планшета добавляется 25 мкл физраствора, в другую – 25 мкл рабочего разведения микробной взвеси. В обе лунки планшета внесится по 50 мкл крови одного и того же пациента и по 25 мкл НСТ. Затем инкубируется 30 минут при 37оС, центрифугируется 5 минут при 1000 об/мин. Далее следует отобрать надосадочную жидкость, приготовить мазки, окрасить в сафранине. Оцениваются результаты на 100 клеток (гранулоцитов), путем определения количества клеток, содержащих фиолетовые гранулы диформазана. Проводится оценка в мазках спонтанного и стимулированного НСТ-теста. Активность миелопероксидазы нейтрофильных гранулоцитов исследовали в мазках цитохимически по методу Грэхема-Кнолля. В присутствии пероксидазы бензидин окисляется перекисью водорода в коричневый оксибензидин. Определяли количество клеток, содержащих желто-коричневые гранулы фермента миелопероксидазы на 100 клеток (гранулоцитов). Используя полуколичественный метод ычисляли средний цитохимический коэффициент по формуле Кеплоу в модификации Астальди-Венга: «0» а + «1» b + «2» с + «3» d+ «4» е СЦП = 100 где цифры (1, 2, 3, 4) обозначают интенсивность окраски; буквы (а, б, в, г) — число подсчитанных клеток с определенной интенсивностью окраски (цитохимической реакции). Катионные белки гранулоцитов определяют неферментную бактерицидную активность клеток. Метод основан на способности анионных красителей, при рН=8,1-8,2 избирательно окрашивать только катионные белки [97].
Определяли количество клеток, содержащих синие (по М.Г.Шубичу) гранулы катионных белков [96, 97], разделяя по степеням, используя полуколичественный метод Астальди-Верга, рассчитывали средний цитохимический коэффициент. Считать не менее 100 клеток (гранулоцитов).
Оценка завершенности фагоцитоза по проценту фагоцитоза и фагоцитарному индексу (по Гамбургеру) основана на способности нейтрофильных лейкоцитов крови поглощать и переваривать микроорганизмы. В 2 стерильные пробирки вносили по 100 мкл взвеси стафилококка, туда же добавляли по 100 мкл исследуемой крови и инкубировали 30 мин на водяной бане при 37оС, перемешивая каждые 10 минут. Первую пробирку центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин, после чего удаляли надосадочную жидкость, осадок перемешивали и делали из него мазок для просчета фагоцитарного показателя и среднего числа поглощенных микробных частиц на один активный нейтрофил (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ): среднее число микробных частиц на один нейтрофил. Во вторую пробирку добавляли 10 мл раствора Версена, тщательно перемешав центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин. Отобрав надосадочную жидкость доводили до первоначального объема и продолжали инкубировать на водяной бане 90 мин при 37о С. После инкубации пробирку центрифугировали 5 мин при 1000 об/мин, удалив надосадочную жидкость, делали мазок. Окраска мазков по Романовскому. Среди 100 нейтрофилов подсчитывают количество фагоцитирующих нейтрофилов и общее число поглощенных микробов. Расчет показателей фагоцитоза:
Интенсивность свободно-радикального окисления при злоупотреблении алкоголем
Таким образом, в гемолизатах эритроцитов подростков, злоупотреблявших алкоголем, наблюдались существенные изменения компонентов системы глутатиона после острой алкогольной интоксикации. Однако изменения ферментных систем развивались неодинаково у юношей и у девушек. Именно в подростковом возрасте гендерные различия становятся более выраженными, так как в этом возрасте происходит половое созревание и усиливается секреция половых гормонов.
Юношеский и подростковый период характеризуется напряженностью врожденного иммунитета [76]. В возрасте 12-15 лет происходит половое созревание, при котором активная секреция половых гормонов, прежде всего андрогенов, ведет к подавлению клеточного звена иммунитета и стимуляции гуморального звена [76]. Созревание иммунной системы заканчивается к 13-15 годам. В этот же возрастной период наблюдается максимум приобщения к потреблению алкогольных напитков, как у мальчиков, так и у девочек [43, 84, 93].
При поступлении в стационар подростков с острой алкогольной интоксикацией наблюдалось повышение активности миелопероксидазы нейтрофилов (в 1,49 раза) по сравнению с контролем (p 0,001). Однако фагоцитарная активность нейтрофилов, вступивших в фагоцитоз, через 30 минут инкубации с микробными частицами статистически не отличалась у подростков с острой алкогольной интоксикацией от группы контроля. Не выявлено достоверных различий фагоцитарной активности и через два часа инкубации. МПО, ед. 2,57 (2,36-2,68) 3,78 (3,61-3,81) Примечание. Me – медиана, P25 – нижний квартиль, P75 – верхний квартиль, - P 0,05 между группами по критерию U. ФА30, ФА120 – фагоцитарная активность через 30 минут и через 120 минут; ФЧ30, ФЧ120 – фагоцитарное число через 30 и 120 минут инкубации с микробными частицами. В то же время, фагоцитарное число через 30 минут инкубации у подростков с острой алкогольной интоксикацией оказалось в 2 раза меньше, чем в группе контроля (p 0,05). Аналогичные изменения фагоцитарного числа выявлялись и через 120 минут инкубации у подростков с острой алкогольной интоксикацией в сравнении с группой контроля (p 0,05). Корреляционный анализ позволил выявить положительную связь между уровнем этанола в крови и фагоцитарным числом после 30 минутной инкубации фагоцитов (r=0,52; р 0,05).
Переваривающая способность фагоцитов оказалась сохраненной у подростков с острой алкогольной интоксикацией, что подтверждает индекс завершенности фагоцитоза, не отличавшийся от контроля.
Не выявлено достоверных различий в содержании лизосомальных катионных белков у подростков с острой алкогольной интоксикацией, в сравнении с контрольной группой. Данные представлены в таблице 33.
Распределение результатов по подгруппам в зависимости от особенностей элиминации этанола позволило выявить различия среди других показателей (таблица 34). Так если в общей группе больных не было найдено различий спонтанного НСТ-теста (НСТсп), то при разделении на подгруппы отмечены противоположные изменения. При повышенном содержании этанола в крови значения НСТ-спонтанного оказались ниже на 30% (p 0,001), а при преобладании этанола в моче показатели НСТ-спонтанного - выше в 2,58 раза (p 0,001) в сравнении с данными контрольной группы. Однако определение окислительно-восстановительного потенциала нейтрофилов выявило противоположные изменения спонтанного НСТ-теста: при повышенном содержании этанола в крови значения этого теста были низкими, а при повышенном его содержании в моче показатели спонтанного НСТ-теста оказались значительно выше.
Фагоцитарная активность нейтрофилов, вступивших в фагоцитоз через 30 минут, статистически не отличалась у подростков с острой алкогольной интоксикацией в обеих подгруппах. При этом фагоцитарная активность нейтрофилов через два часа в подгруппе ОАИ с КЭНЭ 1,0 оказалась на 42% выше, чем в группе контроля (p 0,004), однако этот показатель не отличался в подгруппе ОАИ с КЭНЭ 1,0 от данных группы контроля. Установлена обратная корреляционная зависимость спонтанного НСТ-теста и фагоцитарной активности нейтрофилов через 120 минут (r=-0,58; p 0,05). Видимо, низкая фагоцитарная активность компенсируется за счет “респираторного взрыва”, что подтверждается высокой активностью миелопероксидазы. Кроме того, в подгруппе с преобладанием этанола в моче фагоцитарное число через 120 минут не отличалось между подгруппами, а фагоцитарная активность после 120 минут инкубации отличалась в 1,5 раза между подгруппами. МПО, ед 2,57 (2,36-2,68) 3,78 (3,46-3,87) 3,72 (3,61-3,81) Примечание. Me – медиана, P25 – нижний квартиль, P75 – верхний квартиль, - P 0,05 между группами по критерию U.; ФА30, ФА120 – фагоцитарная активность через 30 минут и через 120 минут; ФЧ30, ФЧ120 – фагоцитарное число через 30 и 120 минут инкубации с микробными частицам; n – число пациентов.
Фагоцитарное число через 30 минут у подростков в обеих подгруппах оказалось ниже, чем в контрольной группе: подгруппа с КЭНЭ 1,0 (p=0,00016), подгруппа с КЭНЭ 1,0 (p=0,00038). Фагоцитарное число через 120 минут у подростков подгруппы с КЭНЭ 1,0 ниже в 2,2 раза (p=0,00015), вподгруппе с КЭНЭ 1,0 ниже в 2,6 раза, чем в группе сравнения (p=0,00009). Это может свидетельствовать о сохранной переваривающей способности фагоцитов, вероятно, за счет повышенного кислородзависимого механизма, обусловленного системой миелопероксидазы, активность которой сохранялась на одинаково высоком уровне в обеих исследуемых подгруппах, и развитием респираторного взрыва. Корреляционный анализ установил обратную зависимость между миелопероксидазой и фагоцитарным числом через 120 минут (r=-0,50; р 0,05).
Индекс завершенности фагоцитоза у подростков в подгруппе с КЭНЭ 1,0 существенно не отличался от данных группы сравнения, однако, в подгруппе с КЭНЭ 1,0. Индекс завершенности фагоцитоза выше на 20% группы сравнения (p=0,0059). Установлена прямая корреляционная зависимость спонтанного НСТ-теста и индекса завершенности фагоцитоза (r=0,52; р 0,05). Кислородзависимая агрессивность, проявлявшаяся в ходе респираторного взрыва и связанная с активацией кислорода и подключением миелопероксидазы [53, 54], увеличивала способность фагоцитов к завершенному фагоцитозу.
Содержание лизосомальных катионных белков (ЛКБ) между подгруппами не отличалось. Резервные возможности кислородзависимых механизмов фагоцитоза не изменялись при однократном употреблении спиртных напитков, что интегрально отражает стимулированный НСТ-тест, результаты которого не имели отличий между контрольной группой и подростками с острой алкогольной интоксикацией, как в общей группе, так и при разделении на подгруппы.
Гендерные различия факторов неспецифической резистентности у подростков, злоупотреблявших алкоголем
Оксидативный стресс развивается при воздействии на организм различных факторов [91, 94]. Длительный и выраженный оксидативный стресс, при котором происходит переход первичных кислородных радикалов в более активные формы кислорода и азота, приводит к повреждению нуклеиновых кислот, белков и липидов [65]. Одним из экзогенных факторов, ассоциированных с развитием окислительного стресса, считается алкогольная интоксикация [19, 49].
Параметры хемилюминесценции указывают на активацию процессов свободно-радикального окисления наряду с мобилизацией антиоксидантных резервов при острой экспериментальной алкогольной интоксикации [30]. Аналогичные изменения параметров хемилюминесценции наблюдались и при хронической алкогольной интоксикации, при этом обнаружено повышение активности ферментов антиоксидантной защиты - супероксиддисмутазы и каталазы печени и сыворотки крови [5, 19]. Вместе с тем, отмечено, что токсические эффекты этанола, отражающиеся на показателях хемилюминесценции, проявляются у взрослых лиц только в случае его поступления в высоких дозах [143].
Несмотря на то, что молодёжь употребляет в основном слабоалкогольные напитки, однако более 72% юношей и 68% девушек употребляют их систематически (2–3 раза в неделю и чаще) [6]. Для выявления физиологических, возрастных особенностей свободно-радикальных процессов проведена оценка их интенсивности в эритроцитах подростков, злоупотреблявших алкоголем, а также у подростков в состоянии острой алкогольной интоксикации путём использования метода индуцированной хемилюминесценции [90]. При определении параметров железо-индуцированной хемилюминесценции гемолизатов эритроцитов крови выявлено увеличение интенсивности процессов свободно-радикального окисления. В условиях острой алкогольной интоксикации светосумма хемилюминесценции оказалась повышенной в 3,6 раза, спонтанная светимость - в 2 раза, максимальная светимость - в 1,55 раз, вспышка - в 1,18 раза. Отмечены отличия показателей хемилюминесценции в зависимости от скорости выведения этанола из организма, так светосумма оказалась увеличенной в 3,8 раза в группе с преобладанием этанола в крови, в отличие от показателей группы подростков, у которых концентрация этанола преобладала в моче. Показатели светосуммы у подростков с преобладанием этанола в моче были увеличены только в 3,0 раза по сравнению с группой контроля, другие показатели хемилюминесценции существенно не отличались.
Полученные результаты подтверждают данные литературы об активации процессов свободно-радикального окисления при алкогольной интоксикации, полученные ранее при клинических наблюдениях [28] и экспериментальных исследованиях [28, 30]. Однако результаты исследования гемолизатов эритроцитов при алкогольной интоксикации подростков отличаются большей выраженностью, а интенсивность свободно-радикальных процессов зависит от скорости выведения неметаболизированного этанола (не подвергнувшегося биотрансформации) с мочой.
Таким образом, несмотря на известные свойства этанола, как ловушки свободных радикалов [124], при алкогольной интоксикации проявляются прооксидантные эффекты даже при кратковременном, но токсическом воздействии. Алкогольная интоксикация вызывает активацию свободно-радикального окисления, вероятно, из-за недостаточной активности системы антиоксидантной защиты, а увеличение скорости ренального пути элиминации этанола сопровождается снижением интенсивности хемилюминесценции. При определении параметров хемилюминесценции гемолизатов эритроцитов крови у подростков, злоупотреблявших алкоголем, выявлены изменения интенсивности процессов свободно-радикального окисления.
Светосумма хемилюминесценции была повышена с первых суток после употребления алкоголя и на протяжении 5 суток, а потом светосумма хемилюминесценции уменьшалась и не отличалась от показателей контрольной группы.
Амплитуда вспышки увеличивалась на 10-е сутки в 2 раза по сравнению с результатом первого дня. В сравнении с показателем контрольной группы значение амплитуды вспышки на 10-е сутки оказалась в 1,4 раза выше. Другие показатели хемилюминесценции - спонтанная и максимальная светимость -значимо не отличались от показателей контрольной группы.
Высокие значения вспышки хемилюминесценции на 10-й день лечения подростков в стационаре указывают на сохраняющиеся признаки окислительного стресса и необходимости длительного применения антиоксидантной терапии при лечении подростков, злоупотребляющих алкоголем.
Установлены гендерные отличия процессов свободно-радикального окисления, а также показателей антиоксидантной системы у подростков, злоупотреблявших алкоголем. Так, спонтанная светимость хемилюминесценции эритроцитов у подростков мужского пола повышается с первых суток после злоупотребления алкоголем, в противоположность этому, у девушек она снижена. Светосумма хемилюминесценции эритроцитов увеличена в 3 раза у девушек через 1 сутки после алкогольной интоксикации, а у юношей в 5 раз после злоупотребления алкоголем. Спонтанная светимость хемилюминесценции эритроцитов подростков мужского пола после употребления алкоголя повышается, вероятно, за счет того, что изначально потенциальная способность компонентов системы подвергаться свободно-радикальному окислению у них выше, что отражает показатель светосуммы. У юношей контрольной группы этот показатель выше, чем у девушек, а также выше концентрация гидроперекисей -амплитуда вспышки в контрольной группе мальчиков выше, чем у девочек. У юношей, злоупотреблявших алкоголем, также, как и у девушек, другие показатели хемилюминесценции - амплитуда вспышки и максимальная светимость - значимо не отличались от показателей контрольной группы.