Содержание к диссертации
Введение
2.1 Обзор литературы 12
2.1.1 Возрастные особенности новорожденных телят 12
2.1.2 Физиологические свойства тромбоцитов 20
2.1.3 Физиологические особенности черно-пестрой породы 30
2.1.4 Физиологические особенности голштинской породы . 37
2.1.5 Физиологические особенности помесей черно-пестрой и голштинской пород 42
2.2 Собственные исследования 47
2.2.1 Материалы и методы исследования . 47
2.3 Результаты собственных исследований 54
2.3.1 Состояние новорожденных телят черно-пестрой породы . 54
2.3.1.1 Особенности общебиологических показателей . 54
2.3.1.2 Активность пероксидации липидов и уровень антиоксидантной защиты плазмы . 56
2.3.1.3 Биохимические показатели тромбоцитов 57
2.3.1.4 Агрегационные свойства тромбоцитов телят . 62
2.3.2 Состояние новорожденных телят голштинской породы 69
2.3.2.1 Особенности общебиологических показателей 69
2.3.2.2 Активность пероксидации липидов и уровень антиоксидантной защиты плазмы 70
2.3.2.3 Биохимические характеристики тромбоцитов 71
2.3.2.4 Агрегационные свойства тромбоцитов телят . 77
2.3.3 Состояние помесных новорожденных телят 83
2.3.3.1 Особенности общебиологических показателей . 83
2.3.3.2 Антиоксидантная защита и особенности пероксидации липидов плазмы . 85
2.3.3.3 Биохимические характеристики тромбоцитов 86
2.3.3.4 Способность тромбоцитов телят к агрегации 91
2.3.4 Сравнительный анализ учитываемых показателей у чистопородных и помесных новорожденных телят . 97
2.3.4.1 Сравнение общебиологических показателей 97
2.3.4.2 Сравнение уровня антиоксидантной защиты плазмы и содержания в ней продуктов пероксидации липидов 98
2.3.4.3 Сравнение особенностей биохимических характеристик тромбоцитов . 100
2.3.4.4 Сравнение агрегационной способности тромбоцитов . 104
2.4 Обсуждение результатов исследования . 109
3 Заключение . 126
3.1 Выводы 126
3.2 Практические рекомендации . 128
3.3 Перспективы дальнейшей разработки темы . 129
Список принятых сокращений . 130
Список литературы 131
Приложение. Нормативные показатели тромбоцитарных параметров у чистопородных и помесных новорожденных телят 160
- Физиологические свойства тромбоцитов
- Биохимические показатели тромбоцитов
- Биохимические характеристики тромбоцитов
- Сравнение агрегационной способности тромбоцитов
Введение к работе
Актуальность темы. Скотоводство традиционно является одной из крупнейших отраслей сельского хозяйства России [Лабинов В.В. и соавт., 2015]. Условия современности в нашей стране все острее требуют проведения мероприятий по его интенсификации за счет повышения продуктивности крупного рогатого скота по показателям удоев, основанного на планомерном увеличении генетического потенциала животных [Мысик А.Т., 2015]. Для работы в этом направлении весьма перспективны черно-пестрая и голштинская породы [Сударев Н.П. и соавт., 2016]. Повышение продуктивного потенциала стада крупного рогатого скота на практике связано с ростом в его составе поголовья высокопродуктивных коров и помесей, полученных от быков наиболее продуктивных пород [Шендаков А.И. и соавт., 2014]. Это позволяет постепенно наращивать адаптивные возможности и уровень молочной продуктивности основной массы ремонтных телок при оптимальных условиях кормления и содержания, соответствующих технологии выращивания и откорма животных улучшающих пород [Мударисов Ф.Ж. и соавт., 2016; Улимбашев М.Б. и соавт., 2016]. В основе достигаемого эффекта лежит использование явления гетерозиса, наступающего при межпородном скрещивании и вызывающего глубокие изменения в организме помесных животных [Самусенко Л.Д., 2012]. Так, при использовании для оплодотворения быков, имеющих высокий генетический потенциал по молочной продуктивности, у помесных дочерей уровень этого показателя приближается к отцовской породе [Лабинов В.В. и соавт., 2015; Басонов О.А. и соавт., 2016].
Несмотря на большие успехи практической биологии, многие аспекты физиологии крупного рогатого скота разных пород и их помесей особенно первого поколения изучены еще недостаточно [Стрекозов Н.И. и соавт., 2013]. Это диктует необходимость дальнейшего планомерного исследования динамики различных физиологических аспектов развития организма чистопородных и помесных телят [Климова С.П., 2014]. Весьма важна в этом плане фаза новорожденности, т.к. от успешности реализации на ее протяжении наследственного потенциала зависит полнота раскрытия продуктивных возможностей коровы в ходе всего последующего онтогенеза и уровень резистентности ее организма к факторам среды, обеспечивающий возможность длительного хозяйственного использования животного [Мысик А.Т., 2015].
Учитывая, что процесс реализации наследственной информации в организме продуктивных животных в течение всей жизни осуществляется в условиях полной саморегуляции и интеграции [Карнаухов Ю.А., 2012; Прохоренко П., 2013], представляют интерес исследования систем, реализующих различные аспекты гомеостаза у чистопородных и помесных животных [Шендаков А.И. и соавт., 2014]. Одной из таких систем является кровь [Корепанова Л.В. и соавт., 2015а], микрореологические и гемостатические свойства которой в значительной мере определяют уровень тканевого обмена [Пикуль А.Н., 2013; Корепанова Л.В. и соавт., 2015б].
Становится ясно, что в поддержании реологических параметров крови на
микроциркуляторном уровне большое значение имеет активность
тромбоцитов, определяющая функционирование гемостаза и успешность перфузии крови в капиллярах [Шитикова А.С.,2008; White G.C. et al., 2007]. Их роль в этих процессах реализуется через определенную выраженность агрегационной активности, обеспечивающейся массой механизмов [Кузник, Б.И.. 2010; Levi M.. 2005]. Однако из-за дефицита информации об особенностях тромбоцитарных функций у новорожденных телят весьма распространенных в России молочных пород и их помесей остаются неясными особенности функциональных механизмов, обеспечивающих у них гемостатические и микрореологические свойства кровяных пластинок. В связи с этим особую актуальность приобретает изучение функциональных показателей тромбоцитов, определяющих выраженность их гемостатической активности, проявляемой in vivo и in vitro у телят черно-пестрой и голштинской пород, а также помесей этих пород первого поколения в наиболее ранний и физиологически значимый этап их онтогенеза – в фазу новорожденности.
Степень разработанности темы. Межпородные различия в продуктивности и выраженность хозяйственно значимых характеристик помесей у крупного рогатого скота напрямую определяются многими физиологическими особенностями их организма, влияющими в конечном итоге на интенсивность обмена веществ и белковый синтез в различных тканях [Карликова Г.Г., 2013; Гусев, И.В.и соавт., 2015]. При этом течение данных процессов связано не только с генетикой животных, но и с особенностями функционирования многих зависимых от средовых влияний механизмов интеграции их организма [Батанов, С.Д. и соавт., 2011; Белякова А.Н. и соавт., 2015]. В то же время, характер межпородных различий в тромбоцитарном звене гемостаза и тонкие механизмы его реализации у чистопородных и помесных новорожденных телят изучены недостаточно. До сих пор не прослежена связь между приростами и тромбоцитарной активностью у новорожденных телят наиболее распространенных в России молочных пород. Остаются невыясненными межпородные различия влияния индукторов и их сочетаний, имеющих место в реальных условиях кровотока, на агрегационный процесс кровяных пластинок, не оценена степень активации тромбоцитов в просвете сосудов у новорожденных телят черно-пестрой и голштинской пород и у помесей этих пород первого поколения. Не выяснены у них особенности ПОЛ тромбоцитов, состояние активности антиокислительных ферментов кровяных пластинок, их липидного состава и основных механизмов реализации агрегации и секреции.
Цель и задачи исследований.
Цель: выяснить физиологические особенности тромбоцитов у новорожденных телят черно-пестрой и голштинской пород и их помесей. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
-
Установить физиологические особенности тромбоцитарной активности in vitro и in vivo, свойственные для новорожденных телят черно-пестрой и голштинской породы и помесей данных пород первого поколения.
-
Определить активность перекисного окисления липидов и особенности антиоксидантной защиты жидкой части крови и тромбоцитов здоровых чистопородных и поместных телят первого поколения в фазу молозивного питания.
-
Провести в сравнительном аспекте оценку содержания в тромбоцитах холестерина и общих фосфолипидов у чистопородных и помесных новорожденных телят.
-
Выявить породные особенности механизмов обеспечения тромбоцитарной активности (тромбоксанообразование, содержание и уровень секреции адениловых нуклеотидов, базальное количество актина и миозина и выраженность их самосборки в ходе реализации функциональных способностей тромбоцитов) у новорожденных телят, принадлежащих к черно-пестрой и голштинской породам и их помесей.
-
Найти взаимосвязи между массой тела, ее приростами и функционально значимыми параметрами тромбоцитов, с одной стороны, и агрегацией тромбоцитов, с другой, у чистопородных и поместных новорожденных телят.
Научная новизна работы заключается в том, что установлено впервые, что в течение фазы новорожденности для голштинских и помесных телят первого поколения свойственна тенденция к понижению, а для животных черно-пестрой породы тенденция к повышению активности тромбоцитов in vitro и in vivo.
Впервые выявлено, что для телят голштинской породы и ее помесей первого поколения с черно-пестрой породой по сравнению с чистокровными черно-пестрыми телятами в течение фазы новорожденности свойственен более низкий уровень активности перекисного окисления липидов плазмы и тромбоцитов, градиента ХС/ОФЛ кровяных пластинок при более высокой их антиоксидантной защищенности.
Показано, что для голштинских и помесных телят первого поколения в течение фазы новорожденности свойственен более низкий, чем для телят черно-пестрой породы уровень функциональных возможностей механизмов обеспечения тромбоцитарной активности (тромбоксанообразование, содержание и уровень секреции адениловых нуклеотидов, базальное количество актина и миозина и выраженность их самосборки в ходе реализации процессов тромбоцитарного гемостаза).
У новорожденных телят черно-пестрой и голштинской пород и помесей этих пород первого поколения впервые установлено наличие сходной выраженности взаимосвязей между уровнем приростов и состоянием функционально значимых параметров тромбоцитов, с одной стороны, и тромбоцитарной агрегацией, с другой.
Научная новизна проведенного исследования подтверждена патентом РФ на полезную модель №144102, приоритет от 02.04.2014года.
Теоретическая и практическая значимость работы состоит в том, что найденные особенности функционирования тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят черно-пестрой и голштинской пород и их помесей первого поколения расширяют научные знания о зависимости процессов онтогенеза системы гемостаза от породной принадлежности крупного рогатого скота и могут быть практически применены в виде нормативных величин тромбоцитарных показателей, послужив основой для новых исследований.
Голштинизация черно-пестрого скота в первом поколении способна значимо понизить у помесных животных в течение фазы молозивного питания уровень перекисного окисления липидов, повысить возможности антиоксидантной защиты плазмы и тромбоцитов, обеспечивая в мембранах кровяных пластинок сниженный уровень соотношения ХС/ОФЛ.
Добиться физиологически выгодной невысокой выраженности механизмов обеспечения тромбоцитарной активности (тромбоксаногенерация, содержание и уровень секреции адениловых нуклеотидов, базальное количество актина и миозина и интенсивность их самосборки в ходе реализации функциональных способностей тромбоцитов) у поголовья новорожденных телят возможно в случае их получения от черно-пестрых коров и быков голштинской породы.
Достичь функционально выгодную для микроциркуляции и процессов роста новорожденных телят невысокую тромбоцитарную агрегационную активность возможно в случае скрещивания черно-пестрых коров с быками голштинской породы.
Методология и методы диссертационного исследования.
Диссертационная работа выполнена на 100 здоровых чистопородных и помесных новорожденных телятах, содержащихся в стандартных условиях телятника, хозяйства Фатежского района Курской области ООО «Колос», в том числе на 32 новорожденных телятах черно-пестрой породы, 35 новорожденных телятах голштинской породы и 33 помесных новорожденных животных, полученных от черно-пестрых коров, покрытых голштинским быком. Все животные подвергались осмотру и обследованию 5 раз (на 1-2 сут., на 3-4 сут., на 5-6 сут., на 7-8 сут., на 9-10 сут. жизни).
В протокол исследования у всех животных была включена регистрация
ряда общих показателей, позволяющих оценить общий функциональный статус
телят.У животных оценивалось количество продуктов перекисного окисления
липидов в жидкой части крови и тромбоцитах с учетом уровня их
антиокислительных возможностей. В отмытых и ресуспендированных
тромбоцитах количественно было установлено содержание общего
холестерола и уровень общих фосфолипидов с последующим расчетом в них отношения ХС/ОФЛ. В кровяных пластинках проводилась косвенная оценка состояния метаболизма арахидоновой кислоты, выяснялось содержание в них АТФ и АДФ, выраженность секреции аденозинфосфатов в ответ на присутствие в среде коллагена, проведена оценка особенностей состава белкового цитоскелета кровяных пластинок (количество актина и миозина) в условиях тромбоцитарной активации и агрегации. У всех телят в крови подсчитывали
количество тромбоцитов, регистрировалась их внутрисосудистая активность фазовоконтрастным методом и способность к агрегации при помощи визуального микрометода.
Кровь для исследований брали у телят из яремной вены.
Статистическую обработку данных проводили с использованием критерия (t) Стьюдента и коэффициента корреляции (r).
Степень достоверности и апробации результатов исследований.
Достоверность полученных в работе результатов подтверждается выполненной статистической обработкой при помощи критерия (t) Стьюдента (результаты считались достоверными при p<0,05) и корреляционного анализа.
Основные положения диссертационного исследования представлены, обсуждены и одобрены: на Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы науки и образования» (Курск, 2012, 2013, 2014, 2015, 2016), III Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2014), VI Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве» (Боровск, 2015), Международной научной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники (Нидерланды, 2015); Международной научной конференции «Проблемы агропромышленного комплекса» (Таиланд, 2015), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Устойчивое развитие территорий: теория и практика» (Сибай, 2016).
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-
Для голштинских и помесных телят в течение фазы новорожденности характерна более низкая активность тромбоцитов, чем для телят черно-пестрой породы.
-
У новорожденных телят независимо от породной принадлежности имеется зависимость массы тела и ее приростов от уровня тромбоцитарной активности.
-
Голштинским и помесным телятам в течение фазы новорожденности свойственна меньшая активность механизмов, реализующих функции тромбоцитов (тромбоксанообразование, содержание и выраженность секреции адениловых нуклеотидов, базальное количество актина и миозина и выраженность их самосборки в ходе активации и агрегации тромбоцитов), чем у телят черно-пестрой породы.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 работ, в том числе 7 статей в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ и работ к ним приравненных.
Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 163 страницах текста компьютерного набора, имеет 45 таблиц, 1 рисунок и приложение. Список литературы включает 260 источников, в том числе 88 иностранных. Работа состоит из оглавления, текста диссертации, включающего в себя введение, основную часть и заключение.
Физиологические свойства тромбоцитов
Тромбоциты представляют собой безъядерные форменные элементы крови, в цитоплазме которых из нуклеиновых кислот присутствует только матричная РНК, обеспечивающая их способность к трансляции и синтезу белка.
В крови основная масса тромбоцитов неактивна и обладает дискоидной формой с гладкой наружной мембраной. Их поперечный размер составляет 2- 4 мкм. Поверхностная площадь одного тромбоцита достигает 8 мкм2, при объеме 6-9 фл (фл - фемтолитр=10-15л). В результате стимуляции тромбоциты теряют дискоидную форму, проявляя способность к адгезии, агрегации и секреции [19].
Форму диска тромбоциту обеспечивает наличие у него циркулярного микротубулярного кольца, находящегося у внутренней поверхности мембраны. У тромбоцитов имеется двухслойная мембрана, отличающаяся по своему составу от мембраны прочих форменных элементов крови наличием высокого уровня асимметрично расположенных в ней фосфолипидов [14].
В кровяных пластинках у внутренней поверхности мембраны локализовано микротубулярное кольцо, собранное из белка тубулина, находящегося по наибольшему диаметру клеток. Тубулин имеет достаточно большую упругость, вследствие чего неактивные тромбоциты сохраняют дискоидную форму. У активируемых дискоцитов микротрубочки находящиеся по внутреннему периметру мембраны быстро разрушаются и хаотично рассеиваются по цитоплазме, что ведет к изменению их формы из дисковидной в сферическую с массой отростков [36].
Процесс активации тромбоцита возможен в случае его соприкосновения с поверхностью, не сходной по своим свойствам с неповрежденным эндотелием, а также при появлении в среде индукторов агрегации. Он распластывается или приобретает сферическую форму с десятками отростков, линейный размер которых может быть больше поперечника самого тромбоцита. Данные изменения формы происходят вследствие роста концентрации кальция в цитоплазме клетки, что ведет к деполимеризации тубулина и возникновению внутри тромбоцита новых структур актина. Появление у тромбоцитов псевдоподий существенно облегчает слипание кровяных пластинок друг с другом, что замедляет ток крови в месте развития данного процесса [159, 169, 177, 215, 216].
Морфологически в тромбоците принято различать 4 зоны. Периферическая зона представляет собой двухслойную фосфолипидную мембрану и пространства близкие к ней с обоих сторон. Белки, интегрированные в мембрану, проникают ее насквозь и обеспечивают связь цитоскелета с поверхностью тромбоцита. Они являются не только структурами, обеспечивающими жесткость мембраны, но и могут быть различными рецепторами, насосами, ферментами, каналами, участвующими в активации тромбоцита. Молекулы интегральных протеинов, покрытых полисахаридами, «выглядывая» наружу, окутывают липидный бислой и создают особую структуру – гликокалекс, который способен задерживать на себе большое количество белков. Периферическая зона кровяной пластинки имеет барьерную функцию, во многом поддерживает ее нормальную форму обеспечивает процесс обмена веществ, активацию и участие в гемостазе [93].
Золь-гель зона это вязкий матрикс цитоплазмы тромбоцита, находящийся вблизи к субмембранной области. В ней присутствуют различные белки (до 50% белка тромбоцита находится в ней). В ходе активации тромбоцита количество белков в ней меняется. В этой зоне расположено большое количество гликогена, являющихся энергетическим запасом клетки. Здесь находятся сократительные белки, что подчеркивает ее видную роль в процессе ретракции тромбоцитарно-фибринового сгустка и реакции высвобождения.
Зона органелл включает в себя образования, хаотично разбросанные по всей цитоплазме неактивных тромбоцитов. В ней находятся пероксисомы, митохондрии, аппарат Гольджи и 3 типа гранул хранения: плотные гранулы, –гранулы и -гранулы (лизосомы) [169].
Наиболее многочисленны из них -гранулы. В одной кровяной пластинке их содержится от 40 до 80. В них заключено более 30 белков, участвующих в процессах гемостаза и различных защитных реакциях. При этом -гранулы считаются важным источником прокоагулянтных свойств тромбоцитов, в виду способности экспрессировать на своей мембране имеющие отрицательный заряд фосфолипиды, фактор V, GpIIb/IIIа, CD63.
При этом, они участвуют в формировании микровезикул, имеющих яркие про-коагулянтные свойства [233].
В -гранулах находятся соединения, имеющие порой прямо противоположные функциональные свойства (ингибиторы и активаторы фибринолиза, соединения стимулирующие и тормозящие ангиогенез и т.д.), располагающиеся в разных субпопуляциях -гранул [212, 257].
В безбелковых плотных гранулах находятся вещества, требующиеся для процессов тромбоцитарного гемостаза, в т. ч. серотонин, адениновые нуклеотиды, кальций, адреналин, фибриноген, фактор Виллебранда, антигепариновый фактор и прочие. В лизосомах присутствует ряд гидролитических ферментов.
Зона мембран охватывает каналы плотной тубулярной системы (ПТС). Эта система очень напоминает саркоплазматический ретикулум в миоцитах. Она хранит в себе и производит секрецию внутриклеточного кальция, имея большое значение для процесса активации кровяных пластинок [216, 254].
Большие количества АДФ поступающие из поврежденных эритроцитов и стенок сосудов, а также доступные коллагеновые и фибриллярные структуры субэндотелия [22, 49], сильно активируют тромбоциты, меняют их форму, способствуют появлению у них выростов и стимулируют выброс содержимого гранул в окружающую среду [163].
Активация кровяных пластинок сопровождается выходом кальция из их гранул. Лабилизация ионов кальция связана с сопряженным через фосфолипазу с процессом гидролиза фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата до состояния 1,4,5-инозитолтрифосфата (ИТФ) и молекулы диацилглицерола. Под действием ИТФ происходит возбуждение ИТФ-рецепторов, что ведет к поступлению кальция внутрь тромбоцитов его через мембрану. Данный процесс называется «гранулоуправляемый» кальциевый вход либо SOCE(store-operated calcium entry). Главным участником данного процесса считаются кальций - воспринимающая молекула внутриклеточных гранул — так называемая стромальная молекула взаимодействия-1 – STIM1 (stromal interaction molecule 1), а также четыре трансмембранных протеиновых канала CRACM1 (Calcium-release activated calcium modulator) или Orai1. STIM1 – это трансмембранный белок, имеющий два N-концевых EF-домена. В ответ на STIM1 в мембране открываются Orai1 каналы. Иной процесс ведущий к поступлению ионов Са2+ в тромбоциты непосредственно связан с рецептор-зависимым кальциевым каналом – Р2Х1, активирующимся в ответ на появляющегося в процессе распада фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата диацилглицерола [98]. При этом поступление кальция в тромбоциты сквозь мембрану происходит благодаря TRPC(canonical transient receptor potential channel) с участием натриево-кальциевого насоса [170, 201].
Для инициации адгезии требуется столкновение тромбоцитов между собой и поврежденной стенкой сосуда. При этом основная роль в поступлении тромбоцитов к месту адгезии принадлежит сдвиговым силам, появляющимся в ходе движения крови [213].
Ответ тромбоцитов на влияние индуктора, в виде их активации наступает в следующей последовательности: изменение формы тромбоцитов прилипание, образование простагландинов, тромбоксана и эндопероксидов, быстрое освобождение содержимого плотных гранул и -гранул. Активность агрегации существенно определяется концентрацией в крови фибриногена и мономеров фибрина. Считается, что для устойчивой связи двойного агрегата тромбоцитов хватит одной межклеточной фибриногеновой нити. При этом активация кровяных пластинок, вызванная напряжением сдвига, способна запустить тромбообразование под действием прокоагулянтов, выделяемых тромбоцитами [182].
В условиях нормального кровотока тромбоциты испытывают активацию и прилипают к эндотелию чаще всего в зонах бифуркации артерий. Р-селектин-опосредованное связывание и прокатка стимулируют взаимодействие тромбоцитов с нативным эндотелием, но данный механизм тщательно контролируется. Такая связь тромбоцитов с эндотелием считается непродолжительной и опосредуется Р-селектином и PSGL-1 (P-selectinglycoproteinligand 1), активирующими кровяные пластинки и тормозящими процесс их движения. В ходе роллинга также отмечается адгезия тромбоцитов с различными клетками через экспрессию Р-селектина. При этом в следствии секреции оксида азота, простациклина и иных дезагрегантов развивается разрушение сформировавшихся агрегатов и «отлипание» тромбоцитов от неповрежденного эндотелия [174].
Биохимические показатели тромбоцитов
У телят черно-пестрой породы в течение фазы молозивного питания не было отмечено достоверных изменений липидного состава тромбоцитов [95] (таблица 5). Так, в составе их мембран в течение фазы молозивного питания, холестерина в среднем содержалось 0,74±0,013мкмоль/109тр, при уровне общих фосфолипидов - 0,47±0,007мкмоль/109тр. и средней величине в кровяных пластинках соотношения холестерин/ общие фосфолипиды 1,57±0,018.
В кровяных пластинках телят черно-пестрой породы в течение наблюдения выявлена легкая тенденция к ослаблению ПОЛ (таблица 5). Количество АГП в их тромбоцитах на 1-2е сутки жизни составляло 2,92±0,012 Д233/109тр., а на 9-10е сутки равнялось 2,88±0,015 Д233/109тр. При этом, уровень тромбоцитарного МДА на 1-2 сутки жизни у телят черно-пестрой породы составил 0,94±0,007нмоль/109тр., также испытывая тенденцию к снижению в течение фазы молозивного питания (до 0,90±0,018нмоль/109тр). Данная динамика оказалась возможна вследствие тенденции к росту в их тромбоцитах активности каталазы и СОД, достигших к концу наблюдения уровней соответственно 9622,0±9,36 МЕ/109тр. и 1668,0±1,75 МЕ/109тр.
Становится ясно, что в кровяных пластинках животных черно-пестрой породы в течение всей фазы новорожденности имеет место постоянство содержания ХС и ОФЛ, при наклонности к усилению их антиоксидантной защищенности, способствующей эффективному сдерживанию процессов ПОЛ [95].
В тромбоцитах наблюдаемых телят в течение первых 10 суток жизни выявлена тенденция к росту интенсивности обмена арахидоновой кислоты с легкой наклонностью к повышению тромбоксанообразования – АТ в простой пробе переноса увеличилась за время наблюдения всего на 2,6% (таблица 6). Это было возможно вследствие тенденции к усилению активности у наблюдаемых животных обоих тромбоцитарных энзимов ее метаболизма – циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы. Величина АТ при проведении коллаген-аспириновой пробы, опосредованно характеризующей активность ЦО в кровяных пластинках, у них возросла на 1,9%. Степень восстановления АТ в коллаген-имидазольной пробе, дающей возможность косвенно оценивать функциональные возможности ТС в тромбоцитах, также испытывала у этих телят в течение фазы новорожденности тенденцию к росту на 5,1% [95].
Невысокое содержание АТФ и АДФ в тромбоцитах наблюдаемых телят на 1-2е суток жизни имело склонность к увеличению в течение фазы новорожденности, достигнув к концу наблюдения 5,50±0,015мкмоль/109тр. и 3,30±0,006мкмоль/109 тр., соответственно (таблица 7).
При этом, уровень секреции этих адениловых нуклеотидов из тромбоцитов у наблюдаемых телят в течение первых 10 суток их жизни также имел склонность к нарастанию до 30,6±0,20% для АТФ и до 40,7±0,14% для АДФ.
Количественное содержание актина в неактивных тромбоцитах у телят черно-пестрой породы на 1-2е сутки жизни равнялось 26,5±0,14% к общему белку в тромбоцитах имело тенденцию к увеличению к 9-10 суткам жизни до 27,3±0,16% к общему белку в тромбоцитах (таблица 8).
Активность дополнительной генерации актина в тромбоцитах в ходе их активации сильным или слабым агонистом и на фоне дальнейшей агрегации под их действием у наблюдаемых телят в течение первых 10 суток жизни также испытывала небольшую тенденцию к увеличению.
Сходная динамика в тромбоцитах наблюдавшихся телят отмечена и для миозинового механизма (таблица 9). Установлено, что в интактных кровяных пластинках на 1-2е сутки жизни количество миозина составляло 12,3±0,17% к общему белку в тромбоцитах, повышаясь к 9-10 сут. жизни до 13,7±0,19% к общему содержанию белка в тромбоцитах. При этом, на фоне активации кровяных пластинок сильным или слабым агонистом и в ходе дальнейшей их агрегации у телят черно-пестрой породы в течение фазы молозивного питания отмечена тенденция к росту интенсивности образования миозина в тромбоцитах.
Таким образом, учитываемые показатели тромбоцитов телят черно-пестрой породы в течение фазы новорожденности находились на оптимальных уровнях, испытывая лишь невыраженные колебания, связанные, очевидно, с особенностями генетики породы.
Биохимические характеристики тромбоцитов
В ходе оценки липидного состава тромбоцитов у помесных телят в течение фазы молозивного питания не отмечено достоверных его изменений [96](таблица 27). Так, в составе их мембран в течение фазы молозивного питания, холестерина в среднем содержалось 0,71±0,014мкмоль/109тр, а ОФЛ - 0,49±0,008мкмоль/109тр. при величине соотношения ХС/ОФЛ 1,45±0,011. При этом, в кровяных пластинках помесных телят выявлена легкая тенденция к ослаблению ПОЛ (таблица 27). Количество АГП в тромбоцитах наблюдавшихся животных на 1-2е сутки жизни составляло 2,82±0,015 Д233/109тр., а на 9-10е сутки равнялось 2,74±0,022 Д233/109тр. При этом, уровень тромбоцитарного МДА на 1-2е сутки жизни у животных составил 0,89±0,006нмоль/109тр., также испытывая тенденцию к снижению в течение фазы молозивного питания до 0,80±0,012нмоль/109тр. Данная тенденция оказалась возможна вследствие склонности к росту в их тромбоцитах активности каталазы и СОД, достигших к концу наблюдения уровней 9840,0±10,88 МЕ/109тр. и 1990,0±3,69 МЕ/109тр., соответственно [96].
Таким образом, в кровяных пластинках помесных телят на протяжении фазы новорожденности имеет место постоянство содержания ХС и ОФЛ, при наклонности к усилению их актиоксидантной защищенности, способствующей эффективному сдерживанию процессов ПОЛ.
В тромбоцитах помесных животных на протяжении первых 10 суток жизни найдена тенденция к ослаблению интенсивности обмена арахидоновой кислоты с наклонностью к понижению тромбоксанообразования. Так, АТ в простой пробе переноса снизилась за время наблюдения на 4,5% (таблица 28). Это происходило вследствие легкой тенденции к уменьшению активности у наблюдаемых животных обоих тромбоцитарных энзимов ее метаболизма – циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы. Так, выраженность АТ при проведении коллаген-аспириновой пробы, опосредованно характеризующая активность ЦО в кровяных пластинках, у них уменьшилась на 2,5%. При этом, уровень АТ при проведении коллаген-имидазольной пробы, дающий возможность косвенно оценивать активность ТС в тромбоцитах, также испытывал у помесных телят в течение первых 10 суток жизни слабую тенденцию к понижению (на 3,0%) [96].
Исходно невысокое содержание АТФ и АДФ в тромбоцитах наблюдаемых телят имело склонность к снижению в течение фазы новорожденности, достигнув к 9-10 суткам жизни 5,32±0,010мкмоль/109 тр. и 3,13±0,009мкмоль/109 тр., соответственно (таблица 29).
Вместе с тем, уровень секреции адениловых нуклеотидов из тромбоцитов у этих телят в течение первых 10 суток жизни также имел склонность к снижению до 24,5±0,09% для АТФ и до 33,0±0,12% для АДФ.
Количественное содержание актина в неактивных тромбоцитах у помесных телят на 1-2е сутки жизни равнялось 21,8±0,14% к общему белку в тромбоцитах, имея тенденцию к уменьшению к 9-10 суткам жизни до 21,0±0,12% к общему белку в тромбоцитах (таблица 30).
Активность дополнительной генерации актина в ходе активации тромбоцитов сильным или слабым агонистом и в ходе их дальнейшей агрегации под действием этих индукторов у наблюдаемых телят в течение первых 10 суток жизни также испытывала небольшую тенденцию к понижению.
Сходная динамика у наблюдавшихся телят отмечена и для миозинового механизма тромбоцитов (таблица 31). Установлено, что в интактных кровяных пластинках животных на 1-2е сутки жизни количество миозина составляло 10,9±0,17% к общему белку в тромбоцитах, испытывая тенденцию к понижению к 9-10 сут. жизни до 10,2±0,12% к общему содержанию белка в тромбоцитах. При этом, на фоне активации кровяных пластинок сильным или слабым агонистом и дальнейшей их агрегации у новорожденных помесных телят отмечена тенденция к ослаблению интенсивности образования миозина в тромбоцитах в течение фазы молозивного питания.
Таким образом, учитываемые показатели тромбоцитов помесных телят в течение фазы молозивного питания находились на физиологически выгодных уровнях, испытывая свойственные для голштинской породы тенденции их значений.
Сравнение агрегационной способности тромбоцитов
Определение тромбоцитарной активности у наблюдаемых новорожденных чистопородных и помесных телят выявило имеющиеся у них породные различия активности учитываемых функциональных характеристик кровяных пластинок при сравнимости количества тромбоцитов в крови животных (таблица 43).
Сравнительная оценка длительности АТ позволила выявить более низкую чувствительность кровяных пластинок в отношении всех испытанных индукторов и их комбинаций у голштинских и помесных телят в первые 10 суток жизни по сравнению с телятами черно-пестрой породы того же возраста (таблица 44).
Достоверных различий в АТ между голштинскими и помесными телятами обнаружено не было. У обоих групп животных наиболее ранний ответ тромбоцитов отмечался на коллаген, время которого в обоих случаях достоверно превышало значения, свойственные для черно-пестрой породы 31,8±0,11с. Сходные особенности уровня АТ у наблюдаемых групп новорожденных животных отмечены под действием АДФ, ристомицина, тромбина и адреналина. Выявленные закономерности в длительности АТ у чистопородных и помесных телят в первые 10 суток жизни при изолированном применении агонистов полностью согласовалась с породными особенностями времени развития АТ в ответ на применение их сочетаний.
Результаты, полученные при оценке АТ у всех групп наблюдаемых телят, были подтверждены данными исследования у них интраваскулярной активности тромбоцитов (таблица 45).
Уровни дискоцитов в крови у новорожденных голштинских и помесных животных достоверно превышали таковой у телят черно-пестрой породы (77,5±0,15%). Количество тромбоцитов диско-эхиноцитов, сфероцитов и сферо-эхиноцитов в крови голштинских и помесных животных достоверно уступали содержанию этих форм в крови телят черно-пестрой породы. По этой причине суммарное число активных форм тромбоцитов у последних (22,5±0,16%) достоверно превышало уровни этого показателя в двух других группах новорожденных телят.
В крови голштинских и помесных телят молозивного питания число свободно перемещающихся малых и больших агрегатов кровяных пластинок достоверно уступало количеству агрегатов у телят черно-пестрой породы 3,3±0,06 и 0,12±0,024 на 100 свободнолежащих тромбоцитов, соответственно. При этом, число тромбоцитов включенных в агрегатообразование у голштинских и помесных телят было меньше, чем в третьей группе обследованных животных (4,8±0,07%).
Заключение по разделу 2.3.4. Таким образом, для новорожденных голштинских и помесных телят свойственна невысокая тромбоцитарная активность, уступающая таковой у животных черно-пестрой породы первых 10 суток жизни. В основе этого во многом лежит характерная для голштинских и помесных телят более низкая активность механизмов реализующих у них процесс агрегации, обеспечивающая наиболее выгодный для микроциркуляции уровень функциональной активности тромбоцитарного гемостаза.