Введение к работе
Актуальность проблемы Изучение реактивности нейтрофилов представляет интерес с нескольких точек зрения. Во - первых, фагоциты является базовым механизмом иммунитета и его ослабление снижает резистентность к инфекционным агентам, приводя к тяжелым осложнениям. Во - вторых, подвергаясь гиперактивации в зонах воспаления, фагоциты становятся опасными для хозяина, включаясь в патогенез воспалительных осложнений. Наконец, фагоциты (прежде всего неитрофилы) как высокореактивная категория клеток, служат чувствительным индикатором различных нарушений гомеостаза, что широко используется в качестве диагностического и прогностического критерия в клинической практике ( Маянский А. Н., Маянский Д. Н.,1989; Маян-ский Д.Н., Урсов И.Г, 1997). С этой целью предложено использовать специальные, основанные на функциональном зондировании нейтрофилов аналитические приемы, которые позволяют выявить такие изменения в организме, которые не регистрируются обычными гематологическими методами. В частности, большой интерес вызывает цитохимическая маркировка нейтрофильных гранулоцитов, с помощью которой метят многие метаболитические пути, ферментные и неферментные компоненты клеток. Значительное внимание уделяется изучению фагоцитарного статуса с помощью адгезивных реакций, теста постановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста) и реактивной хемилю-минесценции (Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993). Сказанное в первую очередь относится к нейтрофилам крови. Вместе с тем, все более пристальное внимание уделяется изучению местных защитных реакций, что позволяет судить о механизмах формирования органной патологии ( Баженов Ю.А. и др.,1988; Салихов И.Г. и др.,1989; Бажанов Н.Н. и др.,1997; Власов A.B.,1997;Carlscn B.,1983;Carlson В. etal., 1983).
В условиях организма происходит непрерывный процесс эмиграции лейкоцитов из крови в ротовую полость (Ясиновский М.Я.,1931; Ясиновский М.Я. и др., 1975). Установлено, что 95-97% мигрирующих лейкоцитов составляют неитрофилы (Робустова Т.Г. и др.. 1990; Raeste А. М.,1972). Исследованы средние колебания числа лейкоцитов в полости рта здоровых лиц; показано, что при воспалительных заболеваниях число оральных лейкоцитов увеличивается, а процент жизнеспособных клеток снижается (Макарова О.В., Пожарицкая М.М.,1990; Мельниченко Э.М, Шугля Л.В.,1993 ).
Сведения о функциональной активности нейтрофилов ротовой полости немногочисленны. Имеются данные о более высоком уровне СЗ и IgG - зависимого розеткообразования оральных нейтрофилов по сравнению с нейтрофилами крови (Sela М. N. et al., 1981); зарегистрировано ослабление адгезии оральных нейтрофилов на стекле (Sharon
J. A. et al., 1982 ). Показано наличие у нейтрофилов ротовой полости рецепторов к эритроцитам барана, мыши и клеткам пекарских дрожжей ( Робустовоа Т.Г., Лебедев К.А., 1989). Ashkenazi М. et al. (1989; 1990) наблюдали более интенсивное связывание оральными нейтрофилами анти- CR3 антител и противоположную картину для анти - Fc Rill. Весьма противоречивы данные касающиеся респираторного взрыва. Так, Yamamoto М. et al. (1991) сообщили о повышенной по сравнению с клетками крови продукции супероксидного радикала оральными нейтрофилами. Однако в более поздней публикации тех же авторов (Yamamoto М. et al., 1993) приводятся прямо противоположные данные. Обращает на себя внимание, практически полное отсутствие работ по цитохимии оральных нейтрофилов. Можно сослаться лишь на публикации, где изучались нейтрофилы ротовой полости при хроническом тонзиллите у взрослых людей (Драгомирецкий В.Д. и др., 1984; 1986; 1993; Бажора Ю.А. и др.,1991). Полностью отсутствуют исследования цитохимического статуса оральных нейтрофилов у детей при различных заболеваниях. Такие сведения могли бы оказаться полезным в педиатрии, учитывая доступность объекта и атравматич-ность процедуры исследования.
Цель работы. На основе изучения функциональных параметров нейтрофилов ротовой полости определить возможность их использования в качестве индикатора нарушений гомеостаза.
Задачи исследования:
-
Изучить функциональную активность нейтрофилов ротовой полости в сравнительном аспекте с нейтрофилами крови.
-
Установить возрастные особенности функциональных показателей оральных нейтрофилов.
-
Изучить функциональную активность нейтрофилов ротовой полости при некоторых патологических состояниях.
4. Обосновать методические подходы для клинико-
диагностичекого использования оральных нейтрофилов
Научная новизна. Впервые изучена функциональная активность нейтрофилов ротовой полости здоровых взрослых и детей. Установлено, что оральные нейтрофилы отличаются от нейтрофилов крови снижением рецепторзависимых (IgG, СЗЬ и коллагензависимых) адгезивных реакций. Изучены особенности респираторного взрыва нейтрофилов ротовой полости: установлена высокая спонтанная реакция и значительное ослабление реактивности при дополнительной стимуляции в люминолзависимых хемилюминесцентных реакциях и полная ареак-тивность в НСТ - тесте. Впервые в возрастном аспекте в оральных нейтрофилах определено содержание лизосомальных катионных бел-
ков, миелопероксидазы и щелочной фосфатазы. Установлено, что ней-трофилы ротовой полости характеризуются высокой по сравнению с клетками крови активностью общей фракции лизосомальных катион-ных белков и щелочной фосфатазы и более низким уровнем миелопероксидазы. Впервые изучены цитохимические характеристики оральных неитрофилов при ряде распространенных воспалительных заболеваний у детей - язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, остром гнойном гайморите и бронхиальной астме.
Теоретическая и практическая значимость. Разработаны методические подходы для изучения оральных неитрофилов. Получена информация о функциональной активности неитрофилов ротовой полости здоровых взрослых и детей в сравнительном аспекте с нейтро-филами крови. На основе ослабления индуцированных реакций люми-нолзависимой хемилюминесценции и НСТ- теста, сделан вывод о том, что слюна подавляет реактивность неитрофилов, т.е., обладает противовоспалительным эффектом. В качестве доступных и информативных критериев, адекватно отражающих функциональное состояние оральных неитрофилов, предложено цитохимическое выявление лизосомальных катионных белков и миелопероксидазы. Установлено, что функциональная активность неитрофилов ротовой полости так же, как и неитрофилов крови, меняется по ряду показателей при различных заболеваниях; при этом изменения происходящие в этих популяциях клеток нередко носят разнонаправленный характер.
Положения выносимые на защиту.
-
Эмиграция в ротовую полость и контакт со слюной оказывают влияние на функциональное состояние неитрофилов.
-
Реактивность оральных неитрофилов меняется при различных заболеваниях; в этом отношении они принципиально не отличаются от неитрофилов крови.
-
Изменения оральных неитрофилов при нарушениях гомеостаза не всегда соответствуют реактивной перестройке неитрофилов крови; по некоторым из них они носят разнонаправленный характер.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научной конференции молодых ученых "Актуальные проблемы медицины" (Н. Новгород , 1994 ), на 1-й Российской гастроэнтерологической неделе (С-Петербург, 1995), Республиканском семинаре педиатров-гастроэнтерологов России (Н.Новгород, 1996).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ. Список приведен в конце автореферата.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, содержит 31 рисунок и 5 таблиц. Работа состоит из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 127 отечественных и 76 иностранных источников.