Введение к работе
Актуальность проблеми. Несомненно, одной из актуальных проблем современной медицины остается проблема широкого распространения тромботичеоких и тромбогеморрагических осложнений сердечно-сосудистых и других заболеваний.
Согласно классическому представлению причины тромботичеоких ослож :ний могут быть связаны с нарушением целостности сосудистой стенки, нарушением тока крови и нарушением соогноше-ия элементов .крови (Струков А.И., Огрукова СМ., 1990, Breddin et al. , 1989). ,К Факторам, предрасполагающим к тромбообразованию, можно отнести травму, оперативное вмешательство, возраст, нарушения обмена и др.
Основным осложнением тромболитической терапии наряду с крово-, точивостью являются ретромбозы. Показано, что эффективность терапии тромбозов, тромб»,мдолий и других предтромбогических и тромботических состояний современными антикоагулянтндаи и тромболитичесними средствами в большинстве случаев ограничивается серьезной побочной реакпией-активаиией свертывания. Частота ретромбозов при введении в кровоток препаратов плазмина, а также различных активаторов длаз-миногена,достигает 30-52$ ( coilen с > 1980).
Впервые феномен повышения свертываемости крови и торможнения фибринолиза при введении плазмина (Фибринолизияа) животным - так называемая компенсаторная реакция - описан в журнале " Nature " Б.А.Кудряшовым и Т.М.Калишевской в I9S3 г. Экспериментально установлено, что эта реакция системы гемостаза блокируется фенголамином, иммуносимпатэктомией и хирургической десимпатизапией (Калишевская Т.М., 1982). Следовательно, реакция гиперкоагуляции на плазмин не является фатальной, т.к. существуют пути ее cj,. рмакологической профилактики. Одним из таких путей может быть.взелоние совместно о тромболитиками гепарина, который отдаляет проявление компенсаторной
2.
реакции (Кудряшов Б.А., 1975). Более физиологичной является блокада этой реакции на у* овне t( -адренорепепторов сосудов о помощью л
-адреноблокаторов.
Блокаторы d. -адренорепепторов широко применяются при лечении ряда патологий и, прежде всего, различных сердечно-сосудистых заболевании, что требует знания всего спектра действия этих препаратов. Тем не менее, данные о влиянии d -адреноблокаторов на систему гемостаза практически отсутствуют.
Учитывая все за и против применения антикоагулянтных, фибрино-литических и адреноблокирувдих средств для профилактики и лечения тромбоглческих осложнений, необходимо продолжать поиск как новых преї—ратов-(в частности, регуляторних пептидов), так и новых комбинаций вышеназванных средств для использования их с большей эффективностью.
Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение механизмов возникновения побочных тромботических осложнений при тромболитической и антикоагулянтной терапии биологически активными веществами белковой, полисахаридной и пептидной природы и путей
х преодоления. Исходя из этого были поставлены следующие задачи:
- учитывая адренергическу» природу компенсаторной реакции сис
темы гемостаза на плазмин, изучить влияние с-адреноблокаторов на
ее/реализашю;
;, - исследовать влияние неселективного (дигидроэрготоксин) и селективных (празозин, йохнмбин) о( -адреноблокаторов ка систему гемостаза, цнтактных кивотнык и животных с экспериментальным тромбозом;
на разных моделях тромбоза изучить возмохность использования неселектшзішх и селективных л -адреноблокаторов с целью повыаения эффективности применения фибранолитичес^ких и антикоагулянтных средств в протпвотромботической и тромболитической терапии;
провести сравнительный анализ влияния аргинил—вазопрессина и
3. его аналогов на состояние системы свертывания крови интактных животных и изучить механизмы увеличения активности активаторов плазмино-гена (МП) и усиления лрокоагулянтных свойств крови под действием этих пептидов.
Научная новизна. При использовании неселективного и се* актив
ных <6 -адреноблонаторов показано участие л-адренорецепторов в
осуществлении реакции гиперкоагуляпии на плаз&шн (фибринолизин) и
ведущая роль л j-адренореиепторов. Установлено, что введение ди-
гидроэрготоксина (ДЭТ).и празозина приводит к выбреду активаторов .
'плазминогена Из сосудистой стенки, увеличе'чш фибринолиза и анти-
коагулянтной активности крови, oL ^-Адреноблокатор йохимбин не об
ладает выраженным действием на фибршюлиз. При исследовании фибри-
иолатической активности комбинации ДЭТ или празозина с плазмином '
показано, что данные блокагоры блокируют реакцию гиперкоагуляпии
на шгазмин, усиливая и значительно пролонгируя его фибринолитические
эффекты. '
С использованием модифицированной чодели венозного тромбоза по Весслеру и анализа гистологических препаратов тромбов о реконструкцией их структуры установлена высокая эффективность тромболити-ческого действия сочетанного применения плазмина и с\ -адреноблокаторов (ДЭТ и празозина). На двух моделях тромбоза (модели тр<~чбооб-разования в артерио-венозном иунте и модгта тромбоза в яремной вене крыс) показана возможность повышения эффективности как тромболити-.ческих (плазмин), гак и антикоагулянтных (не^пакпионировашшй (НФГ) и низкомолекулярный (НМГ У гепарин) средств с целью предотвращения тромбообразования при использовании ДЭТ или празозина. ШГ, используемый в различных экспериментальных условиях, имеет определенное преимущество перед НФГ, обладая более выраженным протшютромботиче-сним эффектом.
При сравнительном анализе влияния на состояние системы гемосга-
4. за вазопрессина и его аналогов установлено, что наиболее значительное и длительное успение ААП вызывает внутривенное введение вазопрессина, и показана ведущая роль центральній №-холинорецепторов в этом процессе. Показано, что при инъекции лишенного гормональной активности аналога вазопрессина дез-глиннл-айид-аргияил-вазопресси-на {ДГАВП) наблюдаются значительное усиление прокоагулянгных свойств крови и торможение фибринолиза. Установлено участие адренергических леханизмов в осуществлении этих реакшій.
Практическое значение. Результати наших исследований углубляют представления о механизме осуществления компенсаторной реакции системы гемостаза на плазмин. Выявленная в работе роль -адренорецеп-торов, в частности, лj -и <^2~ ш подтипов, в регуляции системы гемостаза представляется важной для успеиного применения d -адрено-блокаторов при "ечевии сердечно-сосудистых и других заболеваний, связанных с тромботическими осложнениями»
Выявление возможных путей блокады реакции гилеркоагуляшш при использовании фибршюлитических средств (в частности, плазмина) и усиления и пролонгирования их прямого действия, а также действия антикоагулянтов (НФГ и НМГ), открывает новые возможности для приме-"нения этих средств в тромболатической и противотромботичесной терапии. Впервые примененный.нами для этих нелей оч j-адреноблокатор празозин, обладающий рядом преимуществ по сравнению с неселективиы-ми о( -адреноблокаторами, может являться препаратом выбора при терапии тромбозов, проводимой при ряде патологий, в частности, при сердечной недостаточности.
Изучение действия вазопрессина и его аналогов и, прежде всего, используемого в клинической психиатрии ДГАВП,"выявило возможность троыботичеоких осложнений при его применении. Результаты исследований механизмов усиления ААП и увеличения свертывающего потенциала крови позволяют использовать эти пептиды для направлешюй коррекции
5.
нарушений в системе гемостаза.
Апробация работы. Результаты работы были доложены на конференции "Противотромботическая терапия в клинической практике. Вопросы фибринолиза и тромболиза" (Ялта, 1988), на патофизиологическом съезде "Нарушение механизмов регуляции и их коррекция" (Кишинев, 1989), на заседании кафедры физиологии человека и животных МГУ от 18 декаб-ря 1991 года.
отруктура и объем работы;'Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов исследр-'вания» их обсуждения, выводов, -списка испсъзованной литературы. Работа изложена на 185 страницах машинописного текста, содержит 5 таблип и 34 рисунка. Список литературы включает 274 названий.
Получали препараты: плазминоген из человеческой плазмы методом аффинной хроматографии на лизин-сефарозе ("рьагшаоіо ".Швеция) ( Deutsob et al, » 197) и Дефицитную -о фактору УШ плазму крыс ( Salem et al., 1985). Ллазмин получали активацией плазмпногена каталитическими количествами срептокиназы ("Behnng да ", ФРГ) при молярном - соотношении плазмшоген/стрептокиназа 1:0,05 (Попова Г.Ю., 1991).
Использовали следующие методы аналі*~а препаратов: концентрацию. плазминогена определяли спектрофотометрически, принимая EggQ j С[Д= .=17,0; определяли казеинолитическую активность плазыина (Баскова И.П., 1976) и фибриноллтическую активность в условных единицах (Андрееііко Г.В., 1979).
Состояние системы гемостаза оценивали комплексом общепринятых методов (Андреенко Г.В. и др., 1980), проводили тромбоэластографиче-окий анализ (Балуда З.П. и др., 1980). Ант'и-факгор Па активность в плазме крови определяли по прописи " BoohringerMannheim"(ФРГ),
V . "..:'
' ' 6. '
используя высокоспешфичньй хромогенний субстрат тромбина То » -01 у-
Pro-Arg-pNA; АсОН (хроыозим ТН) этой же фирмы. Определяли актив- ~
нооть фактора УШ ("Haemoetaalo ', 1985) и активность б'-нуклеоти-
даэы в плазме крови (Зубаиров Д.М. и др., 1987).
Опыты по внутривенному введених) препаратов проводили на 1200
белых беспородных крысах odoero пола массой 180-200 г. Исследуемые
препараты и 0,9^-й ы аС1 вводили в v.jfusularia и через определеіі-
ые промежутки времени из противоположной вены .брали кровь. 'Моделирование тромбоза проводили по модифицированному методу А»іаа в артерио-веиозиом. шунте (Банков Г.В. и др., 1988) и по методу v/es-
sler et aljl959). Статистическую обработку результатов проводили по ' методу Сгыодента-Фишера и с использованием непараметрических методов вариационной статистики.