Введение к работе
Актуальность проблемы. Успехи селекционно-генетической работы в животноводстве находятся в прямой зависимости от внедрения новых прогрессивных методов воспроизводства сельскохозяйственных животных, одним из которых является трансплантация эибрионов. Это объясняется тем, что скорость генетических изменений (СГИ) прямо пропорциональна интенсивности селекции, ее точности, уровню наследуемости полезного признака и обратно пропорциональна интервалу между поколениями. По показателям интенсивности роста и продуктивности СГИ при трансплантации эмбрионов в животноводстве выше, чем при других методах селекции ( Smith С, 1986). Именно поэтому в ряде стран с развитый животноводством принята программа МОШ-шюжествен-кая овуляция.и пересадка эмбрионов, которая используется для получения быков-производителей от выдающихся родительских пар и сохранения генофонда редких и исчезающих пород животных (Эрнст Л.К., 1982; Михайлов Н.Н., 1990 ; Goza.ch ft- d aE.t 1983 ; Ko/iCg l.etal, 1988; Smith C., 1988).
Новый биотехнологический метод воспроизводства открывает перспективы сохранения высокоценного генофонда животных неблагополучных по инфекционным болезням, особенно вирусной этиологии, кото-риэ наиболее часто встречаются у высокопродуктивных коров (Sinfth &. et а2„ 1982, 1983 ; Eage$o>v.e tf/P. еод982; А/с*ге W. С.Ъ. U *t, 1985 ; вол/бп X et&i., 1983 ; Ohon C. at at ,1982).
Результаты исследований,проведенные по возможности использования высокопродуктивных коров неблагополучных по отдельным инфекционным болезням в качестве доноров эмбрионов,оказались обнадеживающими, однако, отдельные положения требовали дополнительных исследований с целью разработки соответствующих методических рекомендаций.
В технологии трансплантации эибрионов важное место отводится разработке методов, прэдупредцагщих возможность контаминации их патогенной и усяовнопатогенной клкро^лорой, которые обеспечивают получение здоровых телят я профашетируют появление гикэкологичес-апх бояезшзй, в частности эндоезтритов, как у коров-доноров, так и у рзцшпзотов. йгзнно поэтому руководством международного общества по пбрбсадаа экбраонов {.ИапиаІ o^the. Ititeinotcionat ет$-\уо tzms$&i ,IS36) прэдусеотрен сакятарннй контроль юс ва-састеа, А.Д.Еуррсз в др. <1Ш1> установили, что у коров-довороз
2.
больных эндометритом, наблюдают частичную иди полную дегенерацию эмбрионов на разных стадиях их развития, при значительном числе неоплодотворенных яйцеклеток.
Повыпение эффективности трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных находится в прямой зависимости от качества используемых гормональных и санирующих препаратов, сред и питательных компонентов, входящих в их состав. Поэтому разработка и внедрение в практику отечественных препаратов, аналогичных по качеству зарубежным, является практически важной и актуальной проблемой.
В последние годы практическое применение нашел метод получения эмбрионов вне организма,позволяпций более рационально использовать генетический потенциал самок сельскохозяйственных животных. В связи с этим представляется перспективным изучение факторов, влияющих на повышение оплодотворяемости яйцеклеток крупного рогатого скота с целью получения большего числа эмбрионов пригодных для пересадки.
Цель работы: Разработать некоторые теоретические основы и методологические способы повмпения эффективности трансплантации эмбрионов, с использованием новых отечественных гормональных и санирующих препаратов, сред и питательных компонентов^входящих в их состав, а также систему ветеринарно-санитарных требований,обеспечивающих получение здорового потомства от высокопродуктивных животных, неблагополучных по инфекционным болезням. Определить факторы, влияющие на получение большего числа эмбрионов при оплодотворении яйцеклеток коров вне организма.
Осиаднге задачи исследования;
разработать промышленную технологию получения гонадотропного гормона из сыворотки крови жеребых кобыл (СЖ) и усовершенствовать методы контроля гонадотропних препаратов в соответствии с международными требованиями;
изучить эффективность применения гонадотропних препаратов (ФСГ и ГСЖК) для стимуляции полиовуляции у коров-доноров эмбрионов
создать питательную среду для культивирования и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных;
изучить эффективность применения новых антимикробных препаратов для санации эмбрионов крупного рогатого скота ;
предложить методы, обеспечивающие получение эмбрионов свободных от бактериальной и вирусной контаминации;
Актуальность проблемы. Успехи селекционно-генетической рабо-ты в животноводстве находятся в пряной зависимости от внедрения новых прогрессивных методов воспроизводства сельскохозяйственных ЖИ-. воткых, одним из которых является трансплантация эмбрионов. Это объясняется тем, что скорость генетических изменений (СГИ) прямо пропорциональна интенсивности селекции, ее точности, уровню наследуемости полезного признака и обратно пропорциональна интервалу между поколениями. По показателям интенсивности роста и продуктивности СГИ при трансплантации эмбрионов в животноводстве выше, чем при других методах селекции ( Smith С. 1986). Именно поэтому в ряде стран с развитым животноводством принята программа ^AOПЭ-вдoжecтвeн-ная овуляция.и пересадка эмбрионов, которая используется для получения быков-производителей от выдающихся родительских пар и сохранения генофонда редких и исчезащих пород животных (Эрнст Л.К., 1982; Михайлов Н.Н., 1990 ; Goza.c/i fl. et at, 1988 ; Konlg 1. et аё., 1988; Snlth C, 1988).
Новый биотехнологический метод воспроизводства открывает перспективы сохранения высокоценного генофонда животных неблагополучных по инфекционным болезням, особенно вирусной этиологии, кото-рнэ наиболее часто встречаются у высокопродуктивных коров (,?«^Ь Є.Д &І с*2., 1982, 1983 ; a%eso»->e И."P. еод982 ; Маге W.C/&. U *., 1965 ; Bowan J. eta 2., 1983 ; Ohon C. et оЄ. ,1982).
Результаты исследований,проведенные по возможности использования высокопродуктивных коров неблагополучных по отдельным инфекционный болезням в качестве доноров эмбрионов,оказались обнадеживающими, однако, отдельные положения требовали дополнительных исследований с целью разработки соответствующих методических рекомендаций.
В технологии, трансплантации экбрионов важное место отводится разработке кэтодов, прздупреяданяих возможность контаминации их патогенной и услоаиопатогенной клкро$лорой, которые обеспечивают получение здоровых телят я профаиактируют появление гинекологических болезіай, в частности эндометритов, как у коров-доноров, так и у рзцеяеєіїгов. Ийэшо поэтому руководством международного общества по переезда экбраонов (ManuaS o^thz. iiiteinatcLohc,!! етё-ьуо txansfe.?- ,1986) продусвотрен сагатарвдй контроль их качества, А,Д.Е?грсз в др. <І28і) устаносзла, что у коров-доворсз
a.
больных эндометритом, наблюдают частичную иди полную дегенерацию эмбрионов на разных стадиях их развития, при значительном числе неоплодотворенных яйцеклеток.
Повышение эффективности трансплантации эмбрионов сельскохозяй ственных животных находится в прямой зависимости от качества используемых гормональных и санирующих препаратов, сред и питательных компонентов, входящих в их состав. Поэтому разработка и внедрение в практику отечественных препаратов, аналогичных по качеству зарубежным, является практически важной и актуальной проблемой.
В последние годы практическое применение нашел метод получения эмбрионов вне организма,позволяющий более рационально использовать генетический потенциал самок сельскохозяйственных животных. В связи с этим представляется перспективным изучение факторов, влия ющих на повышение оплодотворяеыости яйцеклеток крупного рогатого скота с целью получения большего числа эмбрионов пригодных для пересадки.
Цель работы: ЇЬзработать некоторые теоретические основы и методологические способы повышения эффективности трансплантации эм брионов, с использованием новых отечественных гормональных и санирующих препаратов, сред и питательных компонентов,входящих в их состав, а также систему ветеринарно-санитарных требований,обеспечивающих получение здорового потомства от высокопродуктивных живот ных,неблагополучных по инфекционным болезням. Определить факторы^ влияющие на получение большего числа эмбрионов при оплодотворении яйцеклеток коров вне организма.
Основные запачи исследования!
разработать промышленную технологию получения гонадотропного гормона из сыворотки крови жеребых кобыл (СЖК) и усовершенствовать методы контроля гонадотропних препаратов в соответствии с меж дународными требованиями;
изучить эффективность применения гонадотропних препаратов (КГ и ГСЯК) для стимуляции полиовуляции у коров-доноров эмбрионов
создать питательную среду для культивирования и транспланта ции эмбрионов сельскохозяйственных животных ;
изучить эффективность применения новых антимикробных препаратов для санации эмбрионов крупного рогатого скота;
предложить методы, обеспечивающие получение эмбрионов свобод ных от бактериальной и вирусной контаминации;
3.
обосновать возможность использования высокопродуктивных хоров,имеющих антитела к вирусам лейкоза и инфекционного риннотра-хеита (№!') в качестве доноров эмбрионов ;
установить факторы, влияющие на оплодотворяемость яйцеклеток коров вне организма;
разработать систему вегеринарно-санигарных мероприятий ври трансплантации эмбрионов, обеспечивающую получение здоровых телят.
научная новизна; Впервые установлено наличие и форма содержания Vb свободном или связанном с ингибитором состоянии) фактора дифференцировки клеток в сыворотке крови у отдельных видов животных и амниотической жидкости коров, который ответственен за поддержание генетической стабильности в клеточных структурах, что особенно важно при культивировании эмбрионов, полученных вне организма. а зависимости от формы содержания и мезодермализующей активности фактора дифференцировки клеток в сыворотке крови отдельных видов животных и амниотической жидкости коров,даны практические рекомендации по их применение в средах при культивировании и трансплантации эмбрионов.
В отличии от известных способов получения гонадотропного гормона из сыворотки крови жеребых кобыл іОДО, применение спиртово-буферного солевого раствора позволяет снизить потери гормона на io-ju% на стадии осаждения основной массы балластных белков, при достаточно высокой степени его очистки, ото достигается созданием оптимальных технологических условий,препятствующих адсорбции гормона на поверхности осаждаемых белков, препарат по своим биологическим свойствам эффективен и не вызывает аллергических реакций у животных при его применении.
Изучены факторы, влияющие на омодотворяемость яйцеклеток коров вне организма,и определены условия для получения большего числа эмбрионов.
Йаучная новизна работы подтверждена авторскими свидетельствами : * 1725453 "Способ получения гонадотрошша" ;» і424163 "Способ изготовления среды для вымывания и культивирования эмбрионов крупного рогатого скота" ; *> 1576669 "основа питательных сред для вымывания, культивирования и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животике".
4.
Практическая значимость. Разработаны и внедрены в промышленное производство: технология получения препарата Тонадотропин очищенный - ГСЖ" ; фосфатво-буферная среда, сыворотка крови северных оленей, амниотическая жидкость крупного рогатого скота и комплексный санирующий препарат ГАМП для трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота.
Предложена и внедрена система мер, обеспечивающая сохранение высокоценного генофонда крупного рогатого скота и получение здоровых телят, включающая:
ветеринарно-санитарные требования к центрам и пунктам по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота ;
положение "О порядке ввоза, хранения и использования эмбрионов сельскохозяйственных животных, поступающих в СССР по импорту";
методические указания "О мероприятиях при использовании в качестве доноров эмбрионов высокопродуктивных коров, имеющих в сыворотке крови антитела к вирусу лейкоза ;
методика по предупреждению передачи возбудителей вирусной этиологии при трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота;
методика по контролю качества сыворотки крови, используемой в средах при трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота ;
наставление по применению комплексного санирующего препарата ГАМП для культур клеток и эмбрионов крупного рогатого скота;
наставление по применению амниотической жидкости крупного рогатого скота для биотехнологических работ.
На основании проведения комплексных исследований, совместно с Всероссийским научно-исследовательским институтом животноводства, разработан и внедрен в практику ГОСТ 28424-90 "Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия".
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на конференциях и симпозиумах:
- Всесоюзная научно-техническая конференция "Применение биотехнологий в животноводстве, растеневодстве и ветеринарной медицине", Ленинград, 1988;
Всесоюзная научная конференция "Научные основы профилактики и лечения патологии воспроизводительной функции сельскохозяйственных животных", Воронеж, 1968;
Всесоюзная конференция "Эпизоотология, эпидемиология, ере-
5.
детва диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, обідих для свловека и животных", Львов, ЇЛ*Ш;
ib европейская конференция "Трансплантация эмбрионов, лейкоз крупного рогатого скота", Мадрид, 1966;
Ьсесовзная научная конференция "Совершенствование государственного контроля ветеринарных препаратов", иосква, i%i;
Российско-герьгшекий симпозиум "Успехи биотехнологии в разшіоиении с.-х. животных", Ьш, дубровицы, ifcttd ;
- ^чаных совзгах Jdl'hKw ветпрепаратов в 1^о*-і9Уа гг.
Разработки по материалам диссертационной работы удостоены
прении Совета министров СССР за іУио г., демонстрировались на ВДНХ СССР и Ььц, Р* и удостоены пяти серебряшых и одной бронзовой медалей (.удостоверения № 355^4, 1иь<кЗ, 3658, ZLZIZ, 4б?8 и 1327).
Публикация результатов исследований, ио материалам диссертации опубликовано 3d работ, в т.ч. 3 авторских свидетельства и 3 зашшчитзльных отчета.