Введение к работе
виртуальность теми. Разработка методов регуляции уровня вос-,„^ тСпйонзводства наиболее ценных в генетическом отношении животных "*"*"о использованием биологически активных препаратов и метода трансплантации эмбрионов в настоящее время приобретает большую научно-прикладную актуальность.
Известно, что завезенные в наши регионы овцы породы австралийский меринос проходят трудный процесс адаптации к местным природно-климатическим условиям. В то же время трансплантация Бмбрионов, извлеченных от завозных, трудноакклкматизируемых маток овцематкам-реципиентам местных пород дает возможность их ускоренного размножения и получения более здорового их потомства.
Еатшейшим звеном в процессе ускоренного размножения ценных генотипов овец путем трансплантации эмбрионов является индукция наиболее оптимального уровня овуляции яичников маток-доноров, когда создается возможность получения большого количества эмбрионов, пригодных для трансплантации. А это достигается применением гонадотропних гормонов, выделяемых в кровь аденогипофизсм (ФСГ, ЛГ). По способу получения и очистки гормонаяьныз препараты значительно отличаются мезду собой по эффективности применения. Следовательно, возникает необходимость изучения применения втих препаратов для установления наиболее оптимальних их доз и в зависимости ст возраста п генотипа обрабатываемых животных.
Приобретает определенную актуальность изучение характера развития ягнят-трансплантатов относительно новой популяции овец по-рсдц австралийский кериное выращенных в организма реципиентов .разных «ютипов овец. Установление характера формирования юс ссєиотип<\ позволяет выяснить вариабельность их по основным хозяйственно-полезным признакам п планз выяснения вммеяного влияния па степень ice проявления организма матерей-реципиентоп.
He менее важное значзние имеет выявление возможного влияния на жизнеспособность эмбрионов предварительное обогащение организма матерей-доноров витаминами, действие которых на организм животных давно установлено.
Получение животных с новыми генетическими свойствами путем индукции генетических материалов в их геном с применением современных биотехнологических методов (генетическая инженерия) имеет огромную перспективную актуальность. В втой связи изучение влияния микрошъекцяи чужеродного ДНК как в цитоплазму, так и в про-нуклеус аигот овец представляет огромный научный интерес.
Цепь и задачи исследования. Цель исследований заключалась в разработке наиболее эффективных схем гормонального вызывания суперовупяции у овцематок-доноров австралийских мериносов; в изучении влияния кикроиньекцда на жизнеспособность ранних эмбрионов' овец, а также изыскание возможностей получения трансгенных овец методом микроинъекции чунеродной ДНК.
Основные задачи .исследования состояли в следующем:
отработать схемы гормонального вызывания суперовуляции путем применения новых препаратов;
изучить влияние витаминов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов;
изучить биологические и продуктивные особенности ягнят-трансплантатов австралийских мериносов;
выяснение влияния микроинъекции (в зиготы овец) гена у" -интерферона человека и созданной на его основе генно-инженерной конструкции на выживаемость зигот, а также выяснение возможности интеграции в геном микроинъецированных фрагментов ДНК.
Научная новизна. Установлены наиболее оптимальные дозы гормональных препаратов и сроки их введения овцематкам австралийских
мериносов для индукции высокой степени полиовуляции; дана характеристика продуктивно-биологических качеств ягнят-трансплантатов; впервые изучено влияние на выживаемость зигот микрокнъекции гена ;f-интерферона человека и кДНК этого-гена; впервые разработана схема гормональной обработки овцематок-доноров с целью получения от них зигот на стадии двух пронуклеусов.
Практическая ценность и реализация результатов исследований. Разработанные схемы кнжукции суперовуляции овец-доноров с применением различных типов гонадотропних гормонов и витаминов дает возможность получения множества эмбрионов пригодных для трансплантации. Получение и пересадка эмбрионов по разработанным схемам дает высокую приживляемость (до 68$).
Отработанная схема гормональной обработки и датированного осеменения овцематок-доноров позволяет получать в 40-ЄЮй случаев зиготы на стадии двух прокуклеусов, что является необходимым условием для проведения генно-иняенерннх работ в животноводстве.
Основные положения диссертации, вшосимие на защиту. . I. Разработанная схема гормональной индукции суперовуляции овцематок-доноров обеспечивает выход больного количества нормальных эмбрионов.
2. Микроинъекция чужеродного гена у-интерферона человека
.в дозе 1-2 пкл оказывает отрицательное влияние на жизнеспособ
ность эмбрионов, степень'которого сильно варьирует в зависимости
от места аппликации ДНК .(цитоплазма шга'пронукяеус).
3. Разработана принципиально новая схема гормональной обра
ботки ыаток-доноров, обеспечивающая высокий выход зигот на ста
дии, двух пронуллеусов.
Апробация работе. Основные положения диссертации Долонскы:
- на Республиканской конференции "Интенсификация и повышение
эффективности общественного производства на основе ускорения
научно-технического прогресса" (Алма-Ата, 1988 г.)у
на 3-й школе-семинаре во генетике и селекции кивотных, 2-х научных чтениях памяти академика Д.К.Беляева (Бийск, 1989 г.)}
на Всесоюзной конференции-совещании "Трансплантация вибрионов сельскохозяйственных животных" (Алма-Ата, 1989 г. >;
на Всесоюзной конференции "Новые направления биотехнологии" (Пущино, 1990 р.). *
Объем работы. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста, иллюстрирована 30 таблицами и 39 рисунками. Список литература содердаэ? 94 наименований, б том числе 173 на иностранном языке.